SNU-398人(ren)肝(gan)癌細(xi)胞(bao)

公司(si)產品(pin)僅(jin)供(gong)科(ke)研(yan)研(yan)究(jiu)使(shi)用(yong)、不得用於(yu)臨(lin)床(chuang)診(zhen)斷(duan)！

1、細(xi)胞(bao)傳(chuan)代：

1）細胞(bao)生長(chang)至(zhi)覆蓋(gai)培養瓶(ping)的 80%面(mian)積時，棄(qi) 25cm2培養瓶(ping)中的培養液(ye)，用(yong) PBS 清(qing)洗細(xi)胞(bao)壹次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培養瓶(ping)中，倒(dao)置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察，待(dai)細(xi)胞(bao)回縮(suo)變(bian)圓(yuan)後加入 5ml 培養

液(ye)終(zhong)止(zhi)消化(hua)，再(zai)輕(qing)輕(qing)吹打(da)細(xi)胞(bao)使(shi)之(zhi)脫(tuo)落，然(ran)後將懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離心(xin)管中，1000rpm 離(li)心 5min；

3）棄(qi)上清，沈澱(dian)細胞(bao)用 1-2ml 培養基(ji)重(zhong)懸(xuan)，然(ran)後按 1:2 比例進(jin)行(xing)分瓶(ping)傳(chuan)代，最(zui)後放(fang)入 37℃，5%CO2細胞(bao)

培養箱中培養；

2、細胞(bao)凍存(cun)：

1）細胞(bao)生長(chang)至(zhi)覆蓋(gai)培養瓶(ping)的 80%面(mian)積時，棄(qi) 25cm2培養瓶(ping)中的培養液(ye)，用(yong) PBS 清(qing)洗細(xi)胞(bao)壹次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培養瓶(ping)中，倒(dao)置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察，待(dai)細(xi)胞(bao)回縮(suo)變(bian)圓(yuan)後加入培養液(ye)終(zhong)

止(zhi)消化(hua)，輕(qing)輕(qing)吹打(da)細(xi)胞(bao)使(shi)之(zhi)脫(tuo)落，然(ran)後將懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離心(xin)管中，1000rpm 離(li)心 5min；

3）用(yong)適量的凍存(cun)液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞(bao)，並放(fang)置(zhi)於凍(dong)存管中；

4）先將(jiang)細(xi)胞(bao)凍存(cun)管放(fang)置(zhi)於-20℃ 1.5h，然(ran)後將其移入-80℃過夜(ye)，24h 後轉入液(ye)氮(dan)中進(jin)行(xing)長期(qi)保存(cun)。使(shi)用(yong)程(cheng)序(xu)

降溫盒(he)可(ke)直接放(fang)入-80℃。

二、細胞(bao)培養操作

1) 復(fu)蘇(su)細胞(bao)：以下細(xi)胞(bao)培養凍存(cun)處(chu)理(li)僅(jin)供(gong)參(can)考，具(ju)體操作步(bu)驟以隨貨產(chan)品(pin)說明(ming)書為主。將(jiang)含(han)有1 mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)的凍存(cun)管在(zai) 37℃水浴(yu)中迅(xun)速搖(yao)晃(huang)解凍(dong)，加4 mL培養基(ji)混(hun)合(he)均(jun)勻。在(zai)1000 rpm條件(jian)下離(li)心(xin)3 min，棄去(qu)上清液(ye)，加1-2 mL培養基(ji)後吹勻(yun)。然(ran)後將所有細胞(bao)懸(xuan)液(ye)加入含適(shi)量培養基(ji)的培養瓶(ping)中培養過夜(ye)（或將細胞(bao)懸(xuan)液(ye)加入10 cm皿中，加入約(yue)8 mL培養基(ji)，培養過夜(ye)）。第二天換液(ye)並(bing)檢查(zha)細胞(bao)密(mi)度。

2) 細(xi)胞(bao)傳(chuan)代：如果(guo)細(xi)胞(bao)密(mi)度達(da) 80%-90%，即(ji)可(ke)進(jin)行(xing)傳(chuan)代培養。

a、棄去(qu)培養上清(qing)，用(yong)不含(han)鈣、鎂(mei)離子(zi)的PBS潤洗細(xi)胞(bao)1-2次(ci)。

b、加1 mL消化(hua)液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培養瓶(ping)中，使(shi)消化(hua)液(ye)浸(jin)潤所有細胞(bao)，將培養瓶(ping)置(zhi)於37℃培養箱中消化(hua)1-2 min（視細(xi)胞(bao)情況而定(ding)），然(ran)後在顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察細胞(bao)消化(hua)情況，若(ruo)細(xi)胞(bao)大部(bu)分(fen)變(bian)圓(yuan)並脫(tuo)落，迅(xun)速拿(na)回(hui)操作臺，輕(qing)敲(qiao)幾(ji)下培養瓶(ping)後加2-3ml培養基(ji)終(zhong)止消化(hua)。輕(qing)輕(qing)打(da)勻(yun)後裝入無菌(jun)離心(xin)管中，1000 rpm離(li)心5 min，棄(qi)去上清(qing)液(ye)，補(bu)加1-2 mL培養液(ye)後吹勻(yun)。

c、將(jiang)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)按(an)1:2比(bi)例分到(dao)新(xin)的含8 mL培養基(ji)的新皿(min)中或者瓶(ping)中，置(zhi)於培養箱中培養。 3) 細胞(bao)凍存(cun)：待(dai)細(xi)胞(bao)生長(chang)狀態良(liang)好(hao)時(shi)，可進(jin)行(xing)細胞(bao)凍存(cun)。下面(mian) T25 瓶(ping)為(wei)例；a、收集細(xi)胞(bao)及(ji)細胞(bao)培養液(ye)，裝入無菌(jun)離心(xin)管中，1000 rpm條件(jian)下離(li)心(xin)4 min，棄去(qu)上清液(ye)，用(yong)PBS清(qing)洗壹遍(bian)，棄盡(jin)PBS，進(jin)行(xing)細胞(bao)計數(shu)。

b、根(gen)據(ju)細胞(bao)數量(liang)加入無血(xue)清細(xi)胞(bao)凍存(cun)液(ye)，使(shi)細(xi)胞(bao)密(mi)度5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混(hun)勻(yun)，每支凍(dong)存管凍(dong)存1mL細胞(bao)懸(xuan)液(ye)，註(zhu)意(yi)凍存管做(zuo)好(hao)標(biao)識。將凍存管放(fang)入-80℃冰箱，24 h後轉入液(ye)氮(dan)灌(guan)儲(chu)存。記(ji)錄(lu)凍(dong)存管位置(zhi)以便(bian)下次(ci)拿(na)取。

公(gong)司(si)正(zheng)在(zai)出(chu)售的產品(pin)：

RWPE-2(人(ren)前列(lie)腺(xian)正(zheng)常(chang)細(xi)胞(bao)) 5×106cells/瓶(ping)×2 CHRF(人(ren)巨(ju)核細(xi)胞(bao)白血(xue)病(bing)) 大(da)鼠羧化(hua)不全(quan)骨鈣素(su)(ucOC)ELISA試劑盒(he) Pentosidine  大(da)鼠戊(wu)糖(tang)素(su) 96T

NFkB p105 / p50： 細胞(bao)核因(yin)子p50/k基(ji)因(yin)結合(he)核(he)因(yin)子(zi)抗體 人(ren)胰(yi)腺癌細(xi)胞(bao);PANC-1

CF Protein Rat 重組(zu)大鼠 CF / Ciliary Neuroophic Factor 蛋白 大(da)鼠髓(sui)樣(yang)細胞(bao)觸發性(xing)受體2(EM2)ELISA試劑盒(he) IL-13(Human Interleukin 13)  人(ren)白介(jie)素(su)13 96T

Neurokinin A Receptor： 神經激(ji)肽A受體/K物質受(shou)體抗體 SERPINB9 Others Human 人(ren) SerpinB9 / CAP-3 桿(gan)狀病(bing)毒(du)-昆蟲細(xi)胞(bao)裂解(jie)液(ye) (陽性(xing)對(dui)照(zhao))

小鼠直腸平滑肌(ji)細胞(bao)培養基(ji) 100mL 大(da)鼠髓(sui)細(xi)胞(bao)觸發受體1(EM1)ELISA試劑盒(he) ADH/VP/AVP(Mouse antidiuretic hormone/vasopressin/arginine vasopressin)  小鼠抗(kang)利尿激(ji)素(su)/血(xue)管加壓(ya)素(su)/精酸(suan)加壓(ya)素(su) 96T

intestinal FABP/IFABP/FABP2： 腸型脂(zhi)肪酸結合(he)蛋白抗(kang)體 子宮平(ping)滑肌(ji)細胞(bao)Many types of cells包(bao)裝：5 × 105次(ci)方(fang)(1ml)

CCL7 Protein Human 重組(zu)人(ren) MCP-3 / CCL7 蛋白 (His 標(biao)簽) 人(ren)白介(jie)素(su)10(IL-10)ELISA 試劑盒(he) Mtp53(Mutant type p53) 突(tu)變(bian)型(xing)P53抗(kang)原(yuan) 0.5mg

ING1： 生長(chang)抑(yi)制因子基(ji)因(yin)1抗體 B18R Others Vaccinia Virus 牛痘(dou)病(bing)毒(du) B18R / B19R 桿狀病(bing)毒(du)-昆蟲細(xi)胞(bao)裂解(jie)液(ye) (陽性(xing)對(dui)照(zhao))

人(ren)胎(tai)盤絨(rong)毛膜(mo)細(xi)胞(bao)培養基(ji) 100mL 人(ren)白介(jie)素(su)1(IL-1)ELISA 試劑盒(he) WIG-1(wtp53-induced gene 1) 野(ye)生(sheng)型(xing)p53誘(you)導基(ji)因(yin)1抗原(yuan) 0.5mg

IL-8/CXCL8： 白介(jie)素(su)8抗體 非洲綠(lv)猴腎(shen)細(xi)胞(bao)系/HCV-NS4B;Vero-HCV-NS4B 人(ren)肝(gan)癌細(xi)胞(bao)，SK-HEP-1細胞(bao) 95-D(高轉移(yi)肺癌細(xi)胞(bao))

SNU-398人(ren)肝(gan)癌細(xi)胞(bao)RET： 指狀蛋白RET抗(kang)體 GB Others Cytomegalovirus/CMV 巨細胞(bao)病(bing)毒(du) HCMV gB 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解(jie)液(ye) (陽性(xing)對(dui)照(zhao))

人(ren)表(biao)皮角(jiao)質(zhi)細胞(bao)總(zong)RNAHEK NA 大(da)鼠補(bu)體片斷(duan)5(C5)ELISA試劑盒(he) 1,25-(OH)2D3/DVD/DHVD 3(Human 1,25-dihydroxyvitamin D3)  人(ren)1,25二羥基(ji)維(wei)生3 96T

RNF39： 環(huan)指蛋白39抗(kang)體 非洲綠(lv)猴腎(shen)細(xi)胞(bao)系/IgR;VERO/IgR

人(ren)胚(pei)胎心(xin)臟成纖維樣細胞(bao);HEH2 人(ren)子(zi)宮成(cheng)纖維(wei)細胞(bao)培養基(ji) 100mL 大(da)鼠補(bu)體片斷(duan)3b(C3b)ELISA 試劑盒(he) Human histon-H2b  人(ren)組(zu)蛋白H2b 96T

RAB40B： RAS癌基(ji)因(yin)家(jia)族(zu)蛋白RAB40B抗(kang)體 原(yuan)代腎實(shi)質(zhi)細胞(bao)特(te)制無血(xue)清添(tian)加劑Many types of cells包(bao)裝：1ml

三、培養註意(yi)事項(xiang) 

1. 收到細(xi)胞(bao)後首(shou)先觀(guan)察細胞(bao)瓶(ping)是(shi)否(fou)完(wan)好(hao)，培養液(ye)是(shi)否(fou)有漏液(ye)、渾(hun)濁(zhuo)等現象，若(ruo)有(you)上述現象 發生請(qing)及(ji)時和我(wo)們(men)聯(lian)系。

2. 仔細閱(yue)讀細(xi)胞(bao)說明(ming)書，了解(jie)細(xi)胞(bao)相關信息，如細(xi)胞(bao)形態、所用培養基(ji)、血(xue)清比(bi)例、所需(xu) 細(xi)胞(bao)因子(zi)等，確保(bao)細(xi)胞(bao)培養條件(jian)壹致(zhi)，若(ruo)由(you)於培養條件(jian)不壹致(zhi)而導(dao)致(zhi)細胞(bao)出(chu)現問(wen)題，責任(ren)由(you) 客戶自行(xing)承(cheng)擔。

3. 用(yong) 75%酒精擦拭細胞(bao)瓶(ping)表(biao)面(mian)，顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察細胞(bao)狀態。因(yin)運(yun)輸問(wen)題，部(bu)分(fen)細胞(bao)由於(yu)溫度(du) 變(bian)化(hua)及(ji)劇(ju)烈碰(peng)亡破碎(sui)形成(cheng)碎(sui)片，是(shi)正(zheng)常(chang)現象。觀(guan)察好(hao)細(xi)胞(bao)狀態後，75%酒精消毒(du)瓶(ping)壁(bi)將(jiang) T25 瓶(ping)置(zhi)於 37℃培養箱放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細胞(bao)可以消化(hua)，懸(xuan)浮(fu)細胞(bao)直接混勻收集細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄上(shang) 清。加 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用(yong)新鮮的培養基(ji)重(zhong)懸(xuan) 細(xi)胞(bao)，並接(jie)種到(dao)新的培養瓶(ping)或培養皿中，置(zhi)於培養箱中進(jin)行(xing)培養。

5. 請客戶用相同(tong)條件(jian)的培養基(ji)用(yong)於細胞(bao)培養。

6. 建議(yi)客戶收到細(xi)胞(bao)後前 3 天(tian)各(ge)拍幾張細(xi)胞(bao)照片(pian)，記(ji)錄(lu)細(xi)胞(bao)狀態，便(bian)於和(he)我(wo)司(si)技術部(bu)溝通 交流。由於運輸的原(yuan)因(yin)，個(ge)別敏感(gan)細(xi)胞(bao)會(hui)出(chu)現不穩(wen)定(ding)的情況，請及(ji)時和我(wo)們(men)聯(lian)系，告知細胞(bao) 的具體情況，以便(bian)我(wo)們(men)的技術人(ren)員跟(gen)蹤回訪(fang)直至(zhi)問(wen)題解決(jue)。

7. 該(gai)細胞(bao)僅(jin)供(gong)科(ke)研(yan)使(shi)用(yong)。

8. 備註：運(yun)輸(shu)用的培養基(ji) (灌(guan)液(ye)培養基(ji)) 不能再(zai)用來(lai)培養細胞(bao)，請換用按(an)照說(shuo)明(ming)書細胞(bao)培 養條件(jian)新(xin)配(pei)制的培養基(ji)來(lai)培養細胞(bao)。     收到細(xi)胞(bao)後第壹次(ci)傳(chuan)代建議(yi) 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳(chuan)代就(jiu)是 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶(ping)或者 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿(min)。