Y79人視網(wang)膜母(mu)細胞瘤細胞

公(gong)司產品僅(jin)供科(ke)研(yan)研(yan)究使(shi)用、不(bu)得用於臨床診斷！

1、細胞傳代：

1）細胞生長(chang)至覆蓋培養(yang)瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積時，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶(ping)中(zhong)的(de)培養(yang)液(ye)，用 PBS 清洗細胞壹(yi)次(ci)；

2）添加 0.25%消(xiao)化液約 1ml 至(zhi)培養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒置(zhi)顯微(wei)鏡(jing)下觀察，待(dai)細胞回縮(suo)變(bian)圓後加入(ru) 5ml 培養(yang)

液(ye)終止(zhi)消(xiao)化，再輕(qing)輕(qing)吹打(da)細胞使(shi)之(zhi)脫(tuo)落，然後將懸液(ye)轉移(yi)至 15ml 離(li)心管中，1000rpm 離(li)心 5min；

3）棄(qi)上清(qing)，沈澱細胞用 1-2ml 培養(yang)基(ji)重懸，然後按 1:2 比例(li)進(jin)行分瓶(ping)傳(chuan)代，最後放入(ru) 37℃，5%CO2細胞

培養(yang)箱(xiang)中培養(yang)；

2、細胞凍(dong)存：

1）細胞生長(chang)至覆蓋培養(yang)瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積時，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶(ping)中(zhong)的(de)培養(yang)液(ye)，用 PBS 清洗細胞壹(yi)次(ci)；

2）添加 0.25%消(xiao)化液約 1ml 至(zhi)培養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒置(zhi)顯微(wei)鏡(jing)下觀察，待(dai)細胞回縮(suo)變(bian)圓後加入(ru)培養(yang)液(ye)終

止(zhi)消(xiao)化，輕(qing)輕(qing)吹打(da)細胞使(shi)之(zhi)脫(tuo)落，然後將懸液(ye)轉移(yi)至 15ml 離(li)心管中，1000rpm 離(li)心 5min；

3）用適(shi)量的(de)凍(dong)存液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，並放置(zhi)於凍(dong)存管中；

4）先(xian)將細胞凍(dong)存管放置(zhi)於-20℃ 1.5h，然後將其移(yi)入(ru)-80℃過夜，24h 後轉入(ru)液氮中進(jin)行長(chang)期(qi)保(bao)存(cun)。使(shi)用程序

降(jiang)溫(wen)盒可直(zhi)接(jie)放入(ru)-80℃。

二(er)、細胞培養(yang)操(cao)作

1) 復(fu)蘇(su)細胞：以(yi)下細胞培養(yang)凍(dong)存處(chu)理(li)僅(jin)供參考(kao)，具體操(cao)作步驟(zhou)以(yi)隨(sui)貨(huo)產品說明(ming)書為主。將含(han)有1 mL細胞懸液(ye)的凍(dong)存管在 37℃水(shui)浴中(zhong)迅速(su)搖晃(huang)解(jie)凍(dong)，加4 mL培養(yang)基(ji)混(hun)合(he)均勻(yun)。在(zai)1000 rpm條(tiao)件(jian)下離(li)心3 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，加1-2 mL培養(yang)基(ji)後吹勻(yun)。然後將所有細胞懸液(ye)加入(ru)含(han)適(shi)量培養(yang)基(ji)的培養(yang)瓶(ping)中(zhong)培養(yang)過(guo)夜（或將細胞懸液(ye)加入(ru)10 cm皿中，加入(ru)約8 mL培養(yang)基(ji)，培養(yang)過(guo)夜）。第(di)二(er)天(tian)換液(ye)並檢查細胞密(mi)度。

2) 細胞傳代：如果(guo)細胞密(mi)度達(da) 80%-90%，即可進(jin)行傳(chuan)代培養(yang)。

a、棄(qi)去(qu)培養(yang)上(shang)清，用不(bu)含(han)鈣(gai)、鎂(mei)離(li)子的PBS潤(run)洗細胞1-2次(ci)。

b、加1 mL消(xiao)化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培養(yang)瓶(ping)中(zhong)，使(shi)消(xiao)化液浸(jin)潤所有細胞，將培養(yang)瓶(ping)置(zhi)於37℃培養(yang)箱(xiang)中消(xiao)化1-2 min（視細胞情(qing)況而定），然後在顯微(wei)鏡(jing)下觀察細胞消(xiao)化情(qing)況，若(ruo)細胞大部(bu)分變(bian)圓並脫(tuo)落，迅速(su)拿回(hui)操(cao)作臺(tai)，輕(qing)敲幾下培養(yang)瓶(ping)後加2-3ml培養(yang)基(ji)終止(zhi)消(xiao)化。輕(qing)輕(qing)打勻(yun)後裝入(ru)無菌離(li)心管中，1000 rpm離(li)心5 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，補加1-2 mL培養(yang)液(ye)後吹勻(yun)。

c、將細胞懸液(ye)按1:2比例(li)分到新(xin)的(de)含(han)8 mL培養(yang)基(ji)的新(xin)皿(min)中(zhong)或者瓶(ping)中(zhong)，置(zhi)於培養(yang)箱(xiang)中培養(yang)。 3) 細胞凍(dong)存：待(dai)細胞生長(chang)狀態良(liang)好(hao)時，可進(jin)行細胞凍(dong)存。下面 T25 瓶(ping)為例(li)；a、收(shou)集細胞及細胞培養(yang)液(ye)，裝入(ru)無菌離(li)心管中，1000 rpm條(tiao)件(jian)下離(li)心4 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，用PBS清洗壹(yi)遍，棄(qi)盡PBS，進(jin)行細胞計(ji)數(shu)。

b、根(gen)據細胞數(shu)量(liang)加入(ru)無血清細胞凍(dong)存液(ye)，使(shi)細胞密(mi)度5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混(hun)勻(yun)，每支凍(dong)存管凍(dong)存1mL細胞懸液(ye)，註意(yi)凍(dong)存管做好(hao)標(biao)識。將凍(dong)存管放入(ru)-80℃冰箱，24 h後轉入(ru)液氮灌儲存(cun)。記錄凍(dong)存管位置(zhi)以(yi)便下次(ci)拿取。

公(gong)司正在(zai)出售(shou)的產(chan)品：

CST6 Others Mouse 小鼠 Cystatin E / CST6 人細胞裂解(jie)液 (陽(yang)性對照) 大鼠(shu)神(shen)經(jing)突蛋(dan)白1(N1)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) Col IV (Mouse Collagen Type IV )  小(xiao)鼠Ⅳ型膠原 96T

NIS： 轉(zhuan)運(yun)體蛋(dan)白抗(kang)體 小鼠皮質(zhi)神(shen)經(jing)元MN-c

Neuro-2a [N2a; Neuro-2a]小鼠(shu)腦(nao)神經(jing)瘤(liu)細胞 Neuro-2a [N2a; Neuro-2a] mouse neuroblastoma Neuro-2a cells MEM培養(yang)基(ji)(GIBCO)+10%FBS 大鼠(shu)神(shen)經(jing)調(tiao)節素2(G2)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) NE  大鼠(shu)中(zhong)性粒(li)細胞彈性蛋(dan)白酶(mei) 96T

Neurokinin 1 Receptor： P物(wu)質(zhi)受體抗(kang)體 GDF15 Others Human 人 GDF-15 人細胞裂解(jie)液 (陽(yang)性對照)

CM-M031小鼠(shu)腸(chang)動脈內(nei)皮(pi)細胞培養(yang)基(ji)100mL 大鼠(shu)神(shen)經(jing)調(tiao)節素1(G1)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) DSIP(Human delta sleep-inducing peptide)  人促睡眠(mian)肽 96T

Neuro-2a細胞，小鼠(shu)腦(nao)神(shen)經瘤細胞 MDA-MB-231(癌細胞) 人腦瘤(liu)細胞;SF767 人H1N1 抗(kang)體(IgG)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) TLR4/CD284 (Toll-like receptor 4) Toll樣(yang)受體4抗(kang)原 0.5mg

IGF 1： 1抗(kang)體 TNFRSF19 Others Mouse 小鼠 TNFRSF19 / OY 人細胞裂解(jie)液 (陽(yang)性對照)

人羊(yang)膜(mo)細胞;WISH 人GTP酶(mei)活化蛋(dan)白(GAP)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) TLR5/CD285 (Toll-like receptor 5) Toll樣(yang)受體5抗(kang)原 0.5mg

IGF II： -II抗(kang)體 人組織細胞淋(lin)巴(ba)瘤(liu)細胞;U937 [U-937]

SP2/0(小(xiao)鼠(shu)骨髓瘤細胞) 5×106cells/瓶(ping)×2 小(xiao)鼠(shu) AXR2 / CMG2 人細胞裂解(jie)液 (陽(yang)性對照) 人FMS樣(yang)酪(lao)酸(suan)激(ji)酶(mei)3配體(Flt-3L)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) TM(Thrombomodulin) 血(xue)栓調(tiao)節蛋(dan)白多肽 0.5mg

Y79人視網(wang)膜母(mu)細胞瘤細胞REC8： 減(jian)數(shu)分裂重(zhong)組蛋(dan)白家族(zu)REC8抗(kang)體 小鼠皮層(ceng)神經(jing)膠質(zhi)細胞(EGFP標(biao)記)

人絨(rong)毛(mao)膜(mo)毛(mao)細血管內(nei)皮(pi)細胞 大鼠(shu)白(bai)介(jie)素(su)2可(ke)溶性受體α鏈(IL-2sRα/CD25)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) PAL(Human L-Phenylalanine ammonla-lyase)  人L苯解(jie)酶(mei) 96T

RALDH2： 醛(quan)脫(tuo)氫酶(mei)2型(xing)抗(kang)體 PROC Others Human 人 PROC1 / Protein C / PROC 人細胞裂解(jie)液 (陽(yang)性對照)

BNL CL.2 小鼠(shu)胚(pei)胎肝(gan)細胞 大鼠(shu)白(bai)介(jie)素(su)2可(ke)溶性受體α鏈(IL-2sRα/CD25)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) 5-NT(Human 5-Nucleotidase)  人5核(he)苷(gan)酸(suan)酶(mei) 96T

REG4： 再生基(ji)因(yin)蛋(dan)白4抗(kang)體 3T6細胞，小鼠(shu)胚(pei)胎成(cheng)纖維(wei)細胞 人前列(lie)腺(xian)癌細胞,gpc-1細胞 人視網(wang)膜色(se)素(su)上(shang)皮(pi)細胞RNAHRPEpiC miRNA5 μg

三、培養(yang)註(zhu)意(yi)事項(xiang) 

1. 收(shou)到細胞後首先(xian)觀察(cha)細胞瓶(ping)是(shi)否完好(hao)，培養(yang)液(ye)是否有漏(lou)液、渾(hun)濁(zhuo)等現象，若有(you)上(shang)述現象 發生(sheng)請(qing)及(ji)時和我(wo)們(men)聯系。

2. 仔細閱(yue)讀(du)細胞說明(ming)書，了解(jie)細胞相關信(xin)息，如細胞形(xing)態、所用培養(yang)基(ji)、血清(qing)比例(li)、所需 細胞因(yin)子等，確(que)保細胞培養(yang)條(tiao)件(jian)壹(yi)致(zhi)，若由(you)於培養(yang)條(tiao)件(jian)不(bu)壹(yi)致(zhi)而導(dao)致(zhi)細胞出現問(wen)題，責任(ren)由(you) 客(ke)戶自(zi)行承擔(dan)。

3. 用 75%酒精擦(ca)拭(shi)細胞瓶(ping)表(biao)面(mian)，顯微(wei)鏡(jing)下觀察細胞狀態。因(yin)運(yun)輸(shu)問(wen)題，部(bu)分細胞由於溫(wen)度 變(bian)化(hua)及(ji)劇烈碰亡破碎形(xing)成碎(sui)片(pian)，是(shi)正常現象。觀察(cha)好(hao)細胞狀態後，75%酒精(jing)消(xiao)毒瓶(ping)壁(bi)將 T25 瓶(ping)置(zhi)於 37℃培養(yang)箱(xiang)放置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細胞可以(yi)消(xiao)化，懸浮細胞直接(jie)混(hun)勻(yun)收(shou)集細胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，棄(qi)上 清(qing)。加 5 mL PBS 重(zhong)懸細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，用新(xin)鮮(xian)的(de)培養(yang)基(ji)重懸 細胞，並接(jie)種(zhong)到新(xin)的(de)培養(yang)瓶(ping)或培養(yang)皿(min)中，置(zhi)於培養(yang)箱(xiang)中進(jin)行培養(yang)。

5. 請(qing)客(ke)戶用相同條(tiao)件(jian)的培養(yang)基(ji)用於細胞培養(yang)。

6. 建(jian)議客(ke)戶收(shou)到細胞後前 3 天(tian)各拍(pai)幾張細胞照片(pian)，記錄細胞狀態，便於和我(wo)司技術(shu)部(bu)溝通(tong) 交流。由於運(yun)輸(shu)的(de)原因(yin)，個(ge)別(bie)敏感(gan)細胞會出現不(bu)穩(wen)定的情(qing)況，請(qing)及(ji)時和我(wo)們(men)聯系，告知細胞 的具(ju)體情(qing)況，以(yi)便我(wo)們(men)的技術(shu)人員跟(gen)蹤(zong)回(hui)訪直至問(wen)題解(jie)決。

7. 該(gai)細胞僅(jin)供科(ke)研(yan)使(shi)用。

8. 備註：運(yun)輸(shu)用的培養(yang)基(ji) (灌液培養(yang)基(ji)) 不(bu)能(neng)再用來培養(yang)細胞，請(qing)換用按照說明(ming)書細胞培 養(yang)條(tiao)件(jian)新(xin)配制(zhi)的(de)培養(yang)基(ji)來培養(yang)細胞。     收到細胞後第(di)壹(yi)次(ci)傳代建議 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳代就是 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶(ping)或者 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不(bu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿(min)。