V79倉(cang)鼠肺(fei)細(xi)胞

公(gong)司(si)產(chan)品(pin)僅供科(ke)研(yan)研(yan)究使(shi)用(yong)、不得(de)用(yong)於臨(lin)床(chuang)診(zhen)斷！

壹、商(shang)品介紹：

1、細(xi)胞傳(chuan)代(dai)：

1）細(xi)胞生(sheng)長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培(pei)養瓶(ping)的 80%面(mian)積(ji)時，棄(qi) 25cm2培(pei)養瓶(ping)中的培(pei)養液(ye)，用(yong) PBS 清洗(xi)細(xi)胞壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消化(hua)液約 1ml 至培(pei)養瓶(ping)中，倒置顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)，待細(xi)胞回(hui)縮變(bian)圓(yuan)後加入 5ml 培(pei)養

液(ye)終止消(xiao)化(hua)，再(zai)輕(qing)輕(qing)吹打(da)細(xi)胞使(shi)之脫落(luo)，然後將懸(xuan)液(ye)轉移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心管中(zhong)，1000rpm 離(li)心 5min；

3）棄(qi)上清，沈澱細(xi)胞用(yong) 1-2ml 培(pei)養基重(zhong)懸(xuan)，然後按 1:2 比(bi)例進行分瓶(ping)傳(chuan)代(dai)，最後放(fang)入 37℃，5%CO2細(xi)胞

培(pei)養箱中培(pei)養；

2、細(xi)胞凍(dong)存：

1）細(xi)胞生(sheng)長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培(pei)養瓶(ping)的 80%面(mian)積(ji)時，棄(qi) 25cm2培(pei)養瓶(ping)中的培(pei)養液(ye)，用(yong) PBS 清洗(xi)細(xi)胞壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消化(hua)液約 1ml 至培(pei)養瓶(ping)中，倒置顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)，待細(xi)胞回(hui)縮變(bian)圓(yuan)後加入培(pei)養液(ye)終

止消(xiao)化(hua)，輕(qing)輕(qing)吹打(da)細(xi)胞使(shi)之脫落(luo)，然後將懸(xuan)液(ye)轉移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心管中(zhong)，1000rpm 離(li)心 5min；

3）用(yong)適量(liang)的凍(dong)存液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞，並(bing)放(fang)置於凍(dong)存管中(zhong)；

4）先將細(xi)胞凍(dong)存管放(fang)置於-20℃ 1.5h，然後將其移(yi)入-80℃過夜(ye)，24h 後轉入液氮(dan)中進行長(chang)期保存(cun)。使(shi)用(yong)程(cheng)序

降溫(wen)盒(he)可(ke)直接(jie)放(fang)入-80℃。

二、細(xi)胞培(pei)養操(cao)作(zuo)

1) 復(fu)蘇細(xi)胞：以(yi)下(xia)細(xi)胞培(pei)養凍(dong)存處理(li)僅供參(can)考，具體(ti)操作(zuo)步驟以(yi)隨(sui)貨(huo)產品(pin)說明書(shu)為(wei)主(zhu)。將(jiang)含(han)有1 mL細(xi)胞懸(xuan)液(ye)的凍(dong)存管在 37℃水浴中(zhong)迅(xun)速(su)搖(yao)晃解凍(dong)，加4 mL培(pei)養基混(hun)合均勻。在1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離(li)心3 min，棄(qi)去(qu)上清液，加(jia)1-2 mL培(pei)養基後吹勻(yun)。然後將所(suo)有細(xi)胞懸(xuan)液(ye)加入含(han)適量(liang)培(pei)養基的培(pei)養瓶(ping)中培(pei)養過(guo)夜(ye)（或(huo)將(jiang)細(xi)胞懸(xuan)液(ye)加入10 cm皿(min)中(zhong)，加入約8 mL培(pei)養基，培(pei)養過(guo)夜(ye)）。第(di)二(er)天換(huan)液(ye)並(bing)檢(jian)查(zha)細(xi)胞密度(du)。

2) 細(xi)胞傳(chuan)代(dai)：如果(guo)細(xi)胞密度(du)達(da) 80%-90%，即可(ke)進行傳(chuan)代(dai)培(pei)養。

a、棄(qi)去(qu)培(pei)養上清，用(yong)不含(han)鈣、鎂(mei)離(li)子(zi)的PBS潤(run)洗(xi)細(xi)胞1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(pei)養瓶(ping)中，使(shi)消化液浸(jin)潤(run)所(suo)有細(xi)胞，將(jiang)培(pei)養瓶(ping)置於37℃培(pei)養箱中消(xiao)化1-2 min（視細(xi)胞情(qing)況(kuang)而(er)定），然後在顯微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)細(xi)胞消(xiao)化(hua)情(qing)況(kuang)，若細(xi)胞大(da)部(bu)分變(bian)圓(yuan)並脫落(luo)，迅(xun)速(su)拿回操(cao)作(zuo)臺(tai)，輕(qing)敲(qiao)幾下(xia)培(pei)養瓶(ping)後加2-3ml培(pei)養基終止消(xiao)化(hua)。輕(qing)輕(qing)打(da)勻(yun)後裝(zhuang)入無菌(jun)離(li)心管中(zhong)，1000 rpm離(li)心5 min，棄(qi)去(qu)上清液，補(bu)加1-2 mL培(pei)養液(ye)後吹勻(yun)。

c、將(jiang)細(xi)胞懸(xuan)液(ye)按1:2比(bi)例分到新的含(han)8 mL培(pei)養基的新皿(min)中(zhong)或者(zhe)瓶(ping)中，置於培(pei)養箱中培(pei)養。 3) 細(xi)胞凍(dong)存：待細(xi)胞生(sheng)長(chang)狀態(tai)良(liang)好時，可(ke)進行細(xi)胞凍(dong)存。下(xia)面(mian) T25 瓶(ping)為(wei)例；a、收(shou)集(ji)細(xi)胞及(ji)細(xi)胞培(pei)養液(ye)，裝(zhuang)入無菌(jun)離(li)心管中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離(li)心4 min，棄(qi)去(qu)上清液，用(yong)PBS清洗(xi)壹遍，棄(qi)盡(jin)PBS，進行細(xi)胞計(ji)數(shu)。

b、根(gen)據(ju)細(xi)胞數(shu)量(liang)加入無血(xue)清細(xi)胞凍(dong)存液(ye)，使(shi)細(xi)胞密度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混(hun)勻，每(mei)支凍(dong)存管凍(dong)存1mL細(xi)胞懸(xuan)液(ye)，註意(yi)凍(dong)存管做(zuo)好標(biao)識。將(jiang)凍(dong)存管放(fang)入-80℃冰箱，24 h後轉入液氮(dan)灌儲存(cun)。記(ji)錄凍(dong)存管位置以(yi)便(bian)下(xia)次拿取(qu)。

三(san)、培(pei)養註意(yi)事項(xiang) 

1. 收(shou)到細(xi)胞後首先觀(guan)察(cha)細(xi)胞瓶(ping)是(shi)否完好，培(pei)養液(ye)是(shi)否有漏(lou)液、渾(hun)濁(zhuo)等(deng)現象，若有上述(shu)現象 發(fa)生(sheng)請(qing)及(ji)時和我(wo)們(men)聯(lian)系。

2. 仔細(xi)閱讀細(xi)胞說明書(shu)，了解細(xi)胞相(xiang)關(guan)信(xin)息(xi)，如細(xi)胞形態(tai)、所(suo)用(yong)培(pei)養基、血清比(bi)例、所(suo)需 細(xi)胞因子(zi)等，確保細(xi)胞培(pei)養條(tiao)件(jian)壹致，若由(you)於培(pei)養條(tiao)件(jian)不壹致而(er)導(dao)致細(xi)胞出(chu)現(xian)問(wen)題，責(ze)任(ren)由(you) 客戶(hu)自行(xing)承擔(dan)。

3. 用(yong) 75%酒精擦(ca)拭(shi)細(xi)胞瓶(ping)表面(mian)，顯微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)細(xi)胞狀態(tai)。因運輸(shu)問題，部(bu)分細(xi)胞由(you)於溫(wen)度(du) 變(bian)化(hua)及劇(ju)烈(lie)碰亡(wang)破(po)碎形成碎片(pian)，是(shi)正(zheng)常(chang)現(xian)象。觀(guan)察(cha)好細(xi)胞狀態(tai)後，75%酒精消(xiao)毒(du)瓶(ping)壁將(jiang) T25 瓶(ping)置於 37℃培(pei)養箱放(fang)置 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細(xi)胞可(ke)以(yi)消化，懸(xuan)浮細(xi)胞直接(jie)混(hun)勻收(shou)集(ji)細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，棄(qi)上 清。加 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，用(yong)新鮮(xian)的培(pei)養基重(zhong)懸(xuan) 細(xi)胞，並(bing)接(jie)種(zhong)到新的培(pei)養瓶(ping)或培(pei)養皿(min)中(zhong)，置於培(pei)養箱中進行培(pei)養。

5. 請(qing)客戶(hu)用(yong)相(xiang)同(tong)條(tiao)件(jian)的培(pei)養基用(yong)於細(xi)胞培(pei)養。

6. 建(jian)議(yi)客戶(hu)收(shou)到細(xi)胞後前(qian) 3 天各(ge)拍(pai)幾張(zhang)細(xi)胞照(zhao)片，記(ji)錄細(xi)胞狀態(tai)，便(bian)於和(he)我(wo)司(si)技術(shu)部(bu)溝(gou)通(tong) 交流。由(you)於運(yun)輸(shu)的原(yuan)因，個(ge)別(bie)敏感(gan)細(xi)胞會(hui)出現(xian)不(bu)穩定的情(qing)況(kuang)，請(qing)及(ji)時和我(wo)們(men)聯(lian)系，告知(zhi)細(xi)胞 的具(ju)體(ti)情況(kuang)，以(yi)便(bian)我(wo)們(men)的技(ji)術人員(yuan)跟蹤回訪直至(zhi)問(wen)題解決(jue)。

7. 該細(xi)胞僅(jin)供科(ke)研(yan)使(shi)用(yong)。

8. 備註：運輸(shu)用(yong)的培(pei)養基 (灌液培(pei)養基) 不能再(zai)用(yong)來培(pei)養細(xi)胞，請(qing)換(huan)用(yong)按照(zhao)說明書(shu)細(xi)胞培(pei) 養條(tiao)件(jian)新配制(zhi)的培(pei)養基來培(pei)養細(xi)胞。     收(shou)到細(xi)胞後第(di)壹(yi)次(ci)傳(chuan)代(dai)建議 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳(chuan)代(dai)就(jiu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶(ping)或者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不(bu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿(min)。

公(gong)司正(zheng)在出售(shou)的產(chan)品：

Oxytetracycline： 土抗(kang)體(ti) 中國倉(cang)鼠卵巢細(xi)胞(亞系克隆(long));CHO-HCV-E1

人肺(fei)泡上皮細(xi)胞 (HPAEpiC)( 1×106 ) rCF, 大(da)鼠(shu)心(xin)臟成纖(xian)維(wei)細(xi)胞 Rattus 大(da)鼠(shu)免疫球蛋(dan)白E(IgE)ELISA 試(shi)劑盒(he) MBP(Human myelin basic protein autoantibody)  人髓(sui)鞘堿性(xing)蛋(dan)白抗(kang)體(ti) 人結直腸腺癌(ai)細(xi)胞;HCT 116 [HCT116]

PDGFC Protein Mouse 重(zhong)組(zu)小鼠(shu) PDGF-C / SCDGF 蛋(dan)白 (Fc 標(biao)簽) 大(da)鼠免疫球蛋(dan)白A(IgA)ELISA試(shi)劑盒(he) PI3K  大鼠0酸肌醇3激酶 96T

OAZ2： 鳥酸(suan)脫羧酶抗(kang)酶2抗(kang)體(ti) PRKD2 Others Human 人 PRKD2 / PKD2 桿狀病(bing)毒(du)-昆(kun)蟲細(xi)胞裂(lie)解液 (陽性(xing)對照(zhao))

786-0 人腎透(tou)明(ming)細(xi)胞腺癌(ai)細(xi)胞 大(da)鼠(shu)免疫球蛋(dan)白A(IgA)ELISA 試(shi)劑盒(he) MHC I /H-2 I (Mouse major histocompatibility complex I )  小鼠主要(yao)組(zu)織相(xiang)容(rong)性復(fu)合體(ti)Ⅰ類 96T

KAT5： TIP60抗體(ti) EB病(bing)毒(du)轉(zhuan)化(hua)的人B淋巴細(xi)胞;KMY0919

CT-26.WT細(xi)胞，小(xiao)鼠(shu)大(da)腸癌細(xi)胞 CBRH-7919(大(da)鼠(shu)肝(gan)癌(ai)細(xi)胞) 大(da)額(e)牛皮膚(fu)成(cheng)纖(xian)維(wei)樣細(xi)胞;BOS-2 雞(ji)免疫球蛋(dan)白Y(IgY)ELISA試(shi)劑盒(he) Hirudin 水蛭(zhi)素 0.5mg

KDM1： 組(zu)蛋(dan)白賴酸特(te)異(yi)性(xing)脫甲(jia)基酶1抗(kang)體(ti) HAVCR1 Others Rat 大鼠(shu) KIM1 / TIM1 / HAVCR1 人細(xi)胞裂(lie)解液 (陽性(xing)對照(zhao))

色標(biao)法檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒(he)NO 雞免疫球蛋(dan)白M(IgM)ELISA試(shi)劑盒(he) HPV16 E6 protein 人類狀瘤(liu)病(bing)毒(du)16抗(kang)原(yuan) 0.5mg

KMT8： 轉錄因子(zi)GATA3結合蛋(dan)白G3B抗(kang)體(ti) 人前(qian)列腺癌(ai)高轉移(yi)細(xi)胞株(zhu);PC-3M IE8

V79倉(cang)鼠肺(fei)細(xi)胞人小(xiao)腦星(xing)形膠質(zhi)細(xi)胞HA-c 大(da)鼠(shu)CXC趨(qu)化(hua)因子(zi)配體(ti)16(CXCL16)ELISA試劑(ji)盒(he) AsAb(Human anti-sperm antibody)  人抗(kang)抗體(ti) BT-474(人導(dao)管癌(ai)細(xi)胞) 5×106cells/瓶(ping)×2

人成(cheng)骨肉(rou)瘤(liu)細(xi)胞;Saos-2 人脈(mai)絡膜微血管細(xi)胞培(pei)養基 100mL 大鼠CXC趨(qu)化(hua)因子(zi)配體(ti)16(CXCL16)ELISA 試劑(ji)盒(he) HG(Human Herpes Gestation)  人皰疹抗(kang)體(ti) CL-0021ACHN(人腎癌細(xi)胞)5×106cells/瓶(ping)×2

SK-MEL-1, 人皮膚(fu)黑色素瘤(liu)細(xi)胞 大(da)鼠(shu)CXC趨(qu)化(hua)因子(zi)配體(ti)1(CXCL1)ELISA試劑(ji)盒(he) PLGF(Human placenta growth factor)  人胎(tai)盤生長(chang)因子(zi) 96T

phospho-Src(Tyr215)： 0酸化(hua)Src原(yuan)癌基因抗體(ti) CARTPT Others Human 人 CART / CARTPT 人細(xi)胞裂(lie)解液 (陽性(xing)對照(zhao))

L929 小鼠(shu)成纖(xian)維(wei)細(xi)胞 大(da)鼠(shu)Coronin-1A(Coro1a/Coro1)ELISA試(shi)劑盒(he) TM(Human Thrombin)  人 96T