143B 人(ren)骨(gu)肉瘤(liu)細(xi)胞

公司產品僅供(gong)科研(yan)研究(jiu)使(shi)用、不得(de)用於(yu)臨床(chuang)診斷(duan)！

1、細胞傳代：

1）細胞生(sheng)長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培(pei)養瓶的(de) 80%面(mian)積(ji)時，棄 25cm2培(pei)養瓶中(zhong)的(de)培(pei)養液，用 PBS 清洗(xi)細(xi)胞壹(yi)次；

2）添加 0.25%消(xiao)化(hua)液約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯(xian)微鏡下觀察(cha)，待細胞回(hui)縮(suo)變圓(yuan)後加入 5ml 培(pei)養

液終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)，再(zai)輕輕吹打(da)細(xi)胞使(shi)之(zhi)脫落，然後將懸液轉移(yi)至 15ml 離(li)心管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄上(shang)清(qing)，沈(chen)澱(dian)細(xi)胞用 1-2ml 培(pei)養基(ji)重(zhong)懸，然(ran)後按 1:2 比例進行分瓶傳代，最(zui)後(hou)放入 37℃，5%CO2細胞

培(pei)養箱(xiang)中(zhong)培(pei)養；

2、細(xi)胞凍(dong)存(cun)：

1）細胞生(sheng)長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培(pei)養瓶的(de) 80%面(mian)積(ji)時，棄 25cm2培(pei)養瓶中(zhong)的(de)培(pei)養液，用 PBS 清洗(xi)細(xi)胞壹(yi)次；

2）添加 0.25%消(xiao)化(hua)液約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯(xian)微鏡下觀察(cha)，待細胞回(hui)縮(suo)變圓(yuan)後加入培(pei)養液終(zhong)

止(zhi)消(xiao)化(hua)，輕輕吹打(da)細(xi)胞使(shi)之(zhi)脫落，然後將懸液轉移(yi)至 15ml 離(li)心管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用適量的(de)凍(dong)存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸細(xi)胞，並放置(zhi)於(yu)凍(dong)存(cun)管(guan)中(zhong)；

4）先將細(xi)胞凍(dong)存(cun)管(guan)放置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後(hou)將(jiang)其(qi)移(yi)入-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後轉入液氮(dan)中(zhong)進(jin)行長(chang)期(qi)保存(cun)。使(shi)用程序

降溫(wen)盒(he)可直接(jie)放(fang)入(ru)-80℃。

壹、商品介紹：

二(er)、細胞培(pei)養操(cao)作(zuo)

1) 復(fu)蘇(su)細(xi)胞：以下細胞培(pei)養凍(dong)存(cun)處(chu)理(li)僅(jin)供(gong)參考，具體(ti)操(cao)作(zuo)步(bu)驟以隨(sui)貨產品說(shuo)明書(shu)為(wei)主(zhu)。將(jiang)含(han)有1 mL細(xi)胞懸(xuan)液的(de)凍(dong)存(cun)管(guan)在 37℃水(shui)浴中(zhong)迅(xun)速(su)搖晃(huang)解(jie)凍(dong)，加4 mL培(pei)養基(ji)混(hun)合均勻。在(zai)1000 rpm條件下離心(xin)3 min，棄去(qu)上(shang)清(qing)液，加1-2 mL培(pei)養基(ji)後(hou)吹勻(yun)。然(ran)後(hou)將所(suo)有(you)細胞懸(xuan)液加入含(han)適量培(pei)養基(ji)的(de)培(pei)養瓶中(zhong)培(pei)養過(guo)夜(ye)（或(huo)將(jiang)細(xi)胞懸(xuan)液加入10 cm皿(min)中(zhong)，加入約(yue)8 mL培(pei)養基(ji)，培(pei)養過(guo)夜(ye)）。第(di)二(er)天換(huan)液並檢查(zha)細(xi)胞密度。

2) 細(xi)胞傳代：如果(guo)細胞密度達 80%-90%，即(ji)可進行傳代培(pei)養。

a、棄去(qu)培(pei)養上(shang)清(qing)，用不含(han)鈣、鎂離(li)子的(de)PBS潤(run)洗(xi)細(xi)胞1-2次。

b、加1 mL消(xiao)化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養瓶中(zhong)，使(shi)消(xiao)化(hua)液浸(jin)潤(run)所有(you)細胞，將(jiang)培(pei)養瓶置(zhi)於(yu)37℃培(pei)養箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化(hua)1-2 min（視細(xi)胞情(qing)況(kuang)而定），然(ran)後(hou)在顯(xian)微鏡下觀察(cha)細胞消(xiao)化(hua)情(qing)況(kuang)，若(ruo)細(xi)胞大(da)部分變(bian)圓(yuan)並脫落，迅(xun)速(su)拿(na)回(hui)操(cao)作(zuo)臺，輕敲幾(ji)下(xia)培(pei)養瓶後(hou)加2-3ml培(pei)養基(ji)終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)。輕輕打勻(yun)後(hou)裝入(ru)無菌(jun)離(li)心管(guan)中(zhong)，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄去(qu)上(shang)清(qing)液，補加1-2 mL培(pei)養液後(hou)吹勻(yun)。

c、將(jiang)細(xi)胞懸(xuan)液按(an)1:2比例分到(dao)新(xin)的(de)含(han)8 mL培(pei)養基(ji)的(de)新(xin)皿(min)中(zhong)或(huo)者(zhe)瓶中(zhong)，置(zhi)於(yu)培(pei)養箱(xiang)中(zhong)培(pei)養。 3) 細(xi)胞凍(dong)存(cun)：待細(xi)胞生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態(tai)良好時，可進行細胞凍(dong)存(cun)。下面(mian) T25 瓶為(wei)例；a、收集(ji)細(xi)胞及(ji)細(xi)胞培(pei)養液，裝入(ru)無菌(jun)離(li)心管(guan)中(zhong)，1000 rpm條件下離心(xin)4 min，棄去(qu)上(shang)清(qing)液，用PBS清洗(xi)壹(yi)遍，棄盡(jin)PBS，進行細胞計(ji)數(shu)。

b、根據(ju)細胞數(shu)量加入無(wu)血清(qing)細(xi)胞凍(dong)存(cun)液，使(shi)細(xi)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混(hun)勻(yun)，每支凍(dong)存(cun)管(guan)凍存(cun)1mL細(xi)胞懸(xuan)液，註(zhu)意(yi)凍(dong)存管(guan)做好標識。將凍(dong)存管(guan)放入(ru)-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後轉入液氮(dan)灌(guan)儲存。記錄(lu)凍(dong)存管(guan)位置(zhi)以便下次拿(na)取(qu)。

公司正(zheng)在(zai)出(chu)售(shou)的(de)產品：

LAMP2： 溶酶(mei)體(ti)相關(guan)膜蛋白(bai)2抗體(ti) IL13RA1 Others Human 人(ren) IL13Ra1 人(ren)細(xi)胞裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao))

人(ren)滑(hua)膜細(xi)胞HS 大(da)鼠(shu)主(zhu)要(yao)堿(jian)性(xing)蛋白(bai)(MBP)ELISA試劑盒(he) Chicken IgM/Cy3 熒(ying)光(guang)素Cy3標記(ji)雞(ji)IgM 0.1ml

LAS2： 肺腺瘤(liu)易(yi)感蛋白(bai)2抗體(ti) 小鼠(shu)T淋(lin)巴(ba)細胞瘤(liu)細(xi)胞;Cyc-Tag(S49)

A3(人(ren)T淋(lin)巴(ba)細胞白(bai)血病細(xi)胞) 5×106cells/瓶×2 子宮癌組(zu)織源性(xing)原(yuan)代細(xi)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)/1ml 大(da)鼠(shu)主(zhu)要(yao)急性(xing)期蛋白(bai)(MAP)ELISA試劑盒(he) dog IgG/Cy3 熒(ying)光(guang)素Cy3標記(ji)狗(gou)IgG 0.1ml

phospho-LEO1(Ser551)： 0酸化RNA聚合酶(mei)相關(guan)蛋白(bai)LEO1抗體(ti) CL-0097HCT-15(人(ren)結(jie)腸(chang)癌細胞)5×106cells/瓶×2

中(zhong)國(guo)倉鼠(shu)卵(luan)巢細胞;CHO 人(ren)類(lei)白(bai)細胞抗原(yuan)E(HLA-E)ELISA 試劑盒(he) ACE2(Angiotensin converting enzyme 2) 血管(guan)緊張(zhang)素轉換(huan)酶(mei)2抗原(yuan) 0.5mg

Glypican 1： 0脂酰(xian)基(ji)醇(chun)蛋白(bai)聚糖1抗體(ti) 人(ren)惡(e)性(xing)非(fei)霍(huo)奇(qi)金(jin)淋(lin)巴(ba)瘤(liu)患者(zhe)的(de)自(zi)然殺(sha)傷細(xi)胞;NK-92MI [NK92MI]

CoC1/DDP(人(ren)卵(luan)巢耐藥細(xi)胞亞(ya)株) 5×106cells/瓶×2 CL-0150MDA-MB-231(人(ren)癌細胞)5×106cells/瓶×2 Walker氏(shi)癌肉瘤(liu)256瘤(liu)株;W256 人(ren)類(lei)白(bai)細胞抗原(yuan)C(HLA-C)ELISA 試劑盒(he) BNP 腦素(多(duo)肽(tai)抗原(yuan)) 0.5mg

GSK3 alpha： 糖原(yuan)合酶(mei)激酶(mei)3α抗體(ti) 人(ren)卵(luan)巢畸胎瘤(liu)細(xi)胞;PA-1

NCTC 1469(小鼠正(zheng)常肝(gan)細胞) 5×106cells/瓶×2 人(ren)類(lei)白(bai)細胞抗原(yuan)B27(HLA-B27)ELISA 試劑盒(he) BNP/Biotin 化腦素多(duo)肽(tai) 0.2ml

143B 人(ren)骨(gu)肉瘤(liu)細(xi)胞PLCZ1： 0酸肌醇(chun)0脂酶(mei)PLCZ1抗體(ti) CL-0412PC-12(大鼠(shu)腎上(shang)腺(xian)嗜(shi)鉻(ge)細(xi)胞瘤(liu)細(xi)胞)5×106cells/瓶×2

MHCC-97L人(ren)肝(gan)癌細胞(低(di)轉移(yi)) MHCC-97L human hepatoma cells (low metastasis) DMEM+10%FBS 大鼠(shu)巨噬細(xi)胞替(ti)代(dai)激活(huo)相關(guan)化學(xue)因(yin)子1(AmAC-1)ELISA試劑盒(he) LAT(Mouse Linker for activation of T cell)  小鼠T細(xi)胞活(huo)化連接(jie)蛋白(bai) 96T

PAP2B： 0脂酸0酸酶(mei)2b抗體(ti) ASAH2 Others Mouse 小鼠(shu) ASAH2 人(ren)細(xi)胞裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao))

人(ren)導管(guan)瘤(liu)細(xi)胞;BT-474 大(da)鼠(shu)巨噬細(xi)胞替(ti)代(dai)激活(huo)相關(guan)化學(xue)因(yin)子1(AmAC-1)ELISA 試劑盒(he) SCA(Human steroid producing cell autoantibody)  人(ren)抗類(lei)固醇(chun)生成(cheng)細胞抗體(ti) 貓源(yuan)細胞

人(ren)結(jie)膜(mo)纖維原(yuan)細胞(HConF)(5×105 ) HAVSMC, 人(ren)主(zhu)動脈(mai)平(ping)滑(hua)肌細(xi)胞 Human 大(da)鼠(shu)巨噬細(xi)胞來源趨(qu)化(hua)因(yin)子(MDC)ELISA試劑盒(he) GS-ANA(Human granulocyte specific antinuclear antibody)  人(ren)粒細胞特(te)異(yi)性(xing)抗核(he)抗體(ti) 人(ren)雪(xue)旺(wang)細(xi)胞RNAHSC miRNA5 μg

三(san)、培(pei)養註(zhu)意(yi)事項 

1. 收(shou)到(dao)細(xi)胞後(hou)首(shou)先觀察(cha)細胞瓶是否完(wan)好，培(pei)養液是否有(you)漏(lou)液、渾(hun)濁(zhuo)等現(xian)象(xiang)，若有上述現象(xiang) 發生請(qing)及時和我們(men)聯(lian)系。

2. 仔細(xi)閱讀細(xi)胞說(shuo)明書(shu)，了解(jie)細(xi)胞相(xiang)關(guan)信息，如細(xi)胞形(xing)態(tai)、所用培(pei)養基(ji)、血清(qing)比例、所需(xu) 細胞因(yin)子等，確(que)保細(xi)胞培(pei)養條件壹致，若(ruo)由(you)於(yu)培(pei)養條件不壹致(zhi)而導致(zhi)細(xi)胞出(chu)現(xian)問(wen)題(ti)，責任由(you) 客(ke)戶自(zi)行承擔。

3. 用 75%酒精(jing)擦拭細胞瓶表(biao)面(mian)，顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察(cha)細胞狀(zhuang)態(tai)。因(yin)運輸問(wen)題(ti)，部分細(xi)胞由(you)於(yu)溫(wen)度(du) 變(bian)化及(ji)劇(ju)烈碰亡破(po)碎(sui)形(xing)成(cheng)碎(sui)片，是正(zheng)常現象(xiang)。觀察(cha)好細胞狀(zhuang)態(tai)後，75%酒(jiu)精(jing)消(xiao)毒(du)瓶壁將 T25 瓶置(zhi)於(yu) 37℃培(pei)養箱(xiang)放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁細胞可以消(xiao)化(hua)，懸浮(fu)細胞直接(jie)混(hun)勻(yun)收集(ji)細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄上(shang) 清(qing)。加 5 mL PBS 重(zhong)懸細(xi)胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，用新鮮的(de)培(pei)養基(ji)重(zhong)懸 細(xi)胞，並接(jie)種(zhong)到(dao)新(xin)的(de)培(pei)養瓶或(huo)培(pei)養皿(min)中(zhong)，置(zhi)於(yu)培(pei)養箱(xiang)中(zhong)進(jin)行培(pei)養。

5. 請(qing)客(ke)戶用相同條件的(de)培(pei)養基(ji)用於(yu)細(xi)胞培(pei)養。

6. 建(jian)議(yi)客(ke)戶收(shou)到(dao)細(xi)胞後(hou)前 3 天各拍(pai)幾(ji)張(zhang)細(xi)胞照(zhao)片，記錄(lu)細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)，便於(yu)和(he)我司技術部溝(gou)通 交流(liu)。由(you)於(yu)運輸的(de)原(yuan)因(yin)，個別敏感細胞會出(chu)現(xian)不穩定的(de)情(qing)況(kuang)，請(qing)及(ji)時和我們(men)聯(lian)系，告知(zhi)細(xi)胞 的(de)具(ju)體(ti)情(qing)況(kuang)，以便我們(men)的(de)技術人(ren)員(yuan)跟蹤(zong)回訪(fang)直至問(wen)題(ti)解(jie)決(jue)。

7. 該(gai)細(xi)胞僅(jin)供(gong)科研(yan)使用。

8. 備(bei)註：運輸用的(de)培(pei)養基(ji) (灌(guan)液培(pei)養基(ji)) 不(bu)能(neng)再(zai)用來培(pei)養細(xi)胞，請(qing)換(huan)用按照(zhao)說(shuo)明書(shu)細胞培(pei) 養條件新配制(zhi)的(de)培(pei)養基(ji)來培(pei)養細(xi)胞。     收(shou)到(dao)細(xi)胞後(hou)第(di)壹次傳代建議(yi) 1：2 傳代 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或(huo)者(zhe) 2 個 6cm 皿。不(bu)是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。