SK-OV-3人(ren)卵(luan)巢(chao)癌細(xi)胞

公(gong)司(si)產品(pin)僅(jin)供(gong)科研研究(jiu)使(shi)用、不(bu)得(de)用於(yu)臨(lin)床(chuang)診斷！

1、細(xi)胞傳代(dai)：

1）細(xi)胞生(sheng)長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋培養瓶(ping)的 80%面積時，棄 25cm2培養瓶(ping)中(zhong)的培養液(ye)，用 PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞壹次(ci)；

2）添加 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培養瓶(ping)中(zhong)，倒置(zhi)顯(xian)微鏡下觀(guan)察，待細(xi)胞回縮變(bian)圓後加入(ru) 5ml 培養

液(ye)終止消(xiao)化(hua)，再輕(qing)輕(qing)吹打細(xi)胞使之(zhi)脫落(luo)，然(ran)後將(jiang)懸液(ye)轉移至(zhi) 15ml 離(li)心管中(zhong)，1000rpm 離(li)心 5min；

3）棄(qi)上清，沈澱(dian)細(xi)胞用 1-2ml 培養基(ji)重懸，然(ran)後按 1:2 比例進行分瓶(ping)傳代(dai)，最(zui)後放入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞

培養箱(xiang)中(zhong)培養；

2、細(xi)胞凍存(cun)：

1）細(xi)胞生(sheng)長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋培養瓶(ping)的 80%面積時，棄 25cm2培養瓶(ping)中(zhong)的培養液(ye)，用 PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞壹次(ci)；

2）添加 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培養瓶(ping)中(zhong)，倒置(zhi)顯(xian)微鏡下觀(guan)察，待細(xi)胞回縮變(bian)圓後加入(ru)培養液(ye)終

止消(xiao)化(hua)，輕輕(qing)吹打細(xi)胞使之(zhi)脫落(luo)，然(ran)後將(jiang)懸液(ye)轉移至(zhi) 15ml 離(li)心管中(zhong)，1000rpm 離(li)心 5min；

3）用適(shi)量的凍存(cun)液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xi)胞，並(bing)放置(zhi)於(yu)凍存(cun)管中(zhong)；

4）先(xian)將(jiang)細(xi)胞凍存(cun)管放置(zhi)於-20℃ 1.5h，然(ran)後將(jiang)其移入(ru)-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後轉入(ru)液(ye)氮(dan)中(zhong)進(jin)行(xing)長(chang)期(qi)保(bao)存。使用程序

降(jiang)溫(wen)盒可(ke)直接放入-80℃。

壹、商(shang)品(pin)介(jie)紹：

二、細(xi)胞培養操(cao)作(zuo)

1) 復(fu)蘇(su)細(xi)胞：以下細(xi)胞培養凍存(cun)處(chu)理僅(jin)供(gong)參(can)考(kao)，具體操(cao)作步驟(zhou)以隨貨產品(pin)說明書為(wei)主。將(jiang)含(han)有1 mL細(xi)胞懸液(ye)的凍存(cun)管在(zai) 37℃水浴(yu)中(zhong)迅(xun)速搖晃(huang)解(jie)凍，加(jia)4 mL培養基(ji)混(hun)合均(jun)勻。在(zai)1000 rpm條(tiao)件(jian)下離(li)心3 min，棄(qi)去上清液(ye)，加1-2 mL培養基(ji)後吹勻。然後將(jiang)所有細(xi)胞懸液(ye)加入(ru)含(han)適量培養基(ji)的培養瓶(ping)中(zhong)培養過(guo)夜(ye)（或將(jiang)細(xi)胞懸液(ye)加入(ru)10 cm皿(min)中(zhong)，加(jia)入(ru)約(yue)8 mL培養基(ji)，培養過(guo)夜(ye)）。第二天換液(ye)並(bing)檢查細(xi)胞密度。

2) 細(xi)胞傳代(dai)：如(ru)果(guo)細(xi)胞密度達(da) 80%-90%，即可(ke)進行傳代(dai)培養。

a、棄(qi)去培養上清，用不(bu)含(han)鈣、鎂離(li)子的PBS潤(run)洗(xi)細(xi)胞1-2次。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化(hua)液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培養瓶(ping)中(zhong)，使(shi)消(xiao)化(hua)液(ye)浸潤(run)所(suo)有細(xi)胞，將(jiang)培養瓶(ping)置於(yu)37℃培養箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化(hua)1-2 min（視細(xi)胞情況(kuang)而(er)定(ding)），然後在(zai)顯(xian)微鏡下觀(guan)察細(xi)胞消(xiao)化(hua)情況(kuang)，若(ruo)細(xi)胞大部(bu)分變(bian)圓並(bing)脫落(luo)，迅(xun)速拿(na)回操(cao)作臺(tai)，輕(qing)敲幾下培養瓶(ping)後加2-3ml培養基(ji)終止消(xiao)化(hua)。輕輕(qing)打勻後裝入(ru)無菌離(li)心管中(zhong)，1000 rpm離(li)心5 min，棄(qi)去上清液(ye)，補(bu)加(jia)1-2 mL培養液(ye)後吹勻。

c、將(jiang)細(xi)胞懸液(ye)按1:2比例分到新(xin)的含(han)8 mL培養基(ji)的新(xin)皿(min)中(zhong)或者瓶(ping)中(zhong)，置(zhi)於(yu)培養箱(xiang)中(zhong)培養。 3) 細(xi)胞凍存(cun)：待細(xi)胞生(sheng)長(chang)狀態良好(hao)時，可(ke)進行細(xi)胞凍存(cun)。下面 T25 瓶(ping)為例；a、收集細(xi)胞及細(xi)胞培養液(ye)，裝入(ru)無菌離(li)心管中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件(jian)下離(li)心4 min，棄(qi)去上清液(ye)，用PBS清(qing)洗(xi)壹(yi)遍(bian)，棄(qi)盡(jin)PBS，進(jin)行細(xi)胞計數(shu)。

b、根據細(xi)胞數(shu)量加(jia)入(ru)無血清細(xi)胞凍存(cun)液(ye)，使細(xi)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕(qing)混(hun)勻，每(mei)支凍存(cun)管凍存(cun)1mL細(xi)胞懸液(ye)，註意(yi)凍存(cun)管做(zuo)好(hao)標識(shi)。將(jiang)凍存(cun)管放入(ru)-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後轉入(ru)液(ye)氮(dan)灌(guan)儲存。記錄凍存(cun)管位置以便下次拿(na)取。

公(gong)司正在(zai)出(chu)售的產品(pin)：

NIR2： 膜0脂(zhi)轉(zhuan)移蛋(dan)白(bai)1抗(kang)體 敘利亞(ya)倉(cang)鼠腎(shen)細(xi)胞;BHK-21

人(ren)內殼(ke)細(xi)胞(HHirSC)( 5×105 ) mEPC, 小鼠(shu)內(nei)皮祖細(xi)胞-骨髓(sui) Mouse 大(da)鼠能(neng)受(shou)體α2C(ADRα2C)ELISA試(shi)劑盒 MT(Human Metallothionein)  人(ren)金屬硫(liu)蛋白 96T

Neurotensin Receptor 1： 神經降(jiang)壓素受體1抗(kang)體 KM小鼠(shu)子(zi)瘤株(zhu);U14

IL2 Protein Rat 重組大(da)鼠(shu) Ierleukin-2 / IL-2 蛋白 大鼠能(neng)受(shou)體α1A(ADRα1A)ELISA試(shi)劑盒 C5a  大(da)鼠補(bu)體片(pian)斷5a 96T

Neurotensin Receptor 2： 神經降(jiang)壓素受體2抗(kang)體 MAP3K8 Others Human 人(ren) TPL2 / MAP3K8 / MEKK8 桿狀病毒(du)-昆蟲(chong)細(xi)胞裂解(jie)液(ye) (陽性對(dui)照(zhao))

EFNA5 Protein Mouse 重組小鼠(shu) Ephrin-A5 / EFNA5 蛋(dan)白 (His 標簽(qian)) 牛布魯氏(shi)桿菌(jun)抗體ELISA試(shi)劑盒 Amylin(1-37) amide 糖(tang)尿(niao)病相(xiang)關肽(tai)/胰(yi)島(dao)澱粉(fen)樣(yang)肽(tai) 0.5mg

KCC4： 氯離(li)子轉(zhuan)運蛋白(bai)KCC4抗體 EPHB2 Others Human 人(ren) EphB2 / Hek5 (aa 570-987) 桿狀病毒(du)-昆蟲(chong)細(xi)胞裂解(jie)液(ye) (陽性對(dui)照(zhao))

人(ren)腦靜(jing)脈血管內皮細(xi)胞培養基(ji) 100mL 牛病毒(du)性腹(fu)瀉病(bing)毒(du)(BVDV)ELISA 試(shi)劑盒 Amyloid Beta 25-35/Beta-Amyloid 25-35 β澱(dian)粉樣(yang)肽(tai)25-35/Aβ25-35/Amyloid β (25-35) (多(duo)肽(tai)) 1mg

phospho-KCNA3(Tyr135)： 0酸(suan)化(hua)離(li)子通(tong)道(dao)蛋(dan)白Kv1.3抗體 RLF, 大(da)鼠淋(lin)巴(ba)成(cheng)纖(xian)維細(xi)胞 STJ.EPI.H7細(xi)胞 COS-1(SV40 轉化(hua)的非洲(zhou)綠(lv)猴(hou)腎細(xi)胞)

HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/Cambodia/S1211394/2008) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人(ren)細(xi)胞裂解(jie)液(ye) (陽性對(dui)照(zhao)) 牛二酰(xian)(malonyl CoA)ELISA試劑盒 Beta-Amyloid 1-42 CT β澱(dian)粉樣(yang)肽(tai) 1-42 (C端(duan)多(duo)肽(tai)) 0.1mg

SK-OV-3人(ren)卵(luan)巢(chao)癌細(xi)胞SP-A： 肺表(biao)面活(huo)性蛋白(bai)A抗體 EGFR Others Human 人(ren) EGFR / ErbB1 人(ren)細(xi)胞裂解(jie)液(ye) (陽性對(dui)照(zhao))

人(ren)上皮細(xi)胞HMEpiC 大鼠(shu)Rho鳥(niao)苷酸(suan)交換(huan)因子7(Arhgef7/Pak3bp/Pixb)ELISA試(shi)劑盒 CS(Human chondroitin sulfate)  人(ren)軟(ruan)骨(gu)素 96T

SLC37A4： 葡萄(tao)糖(tang)-60酸(suan)轉運蛋白(bai)抗體 Anglne(人(ren)卵(luan)巢(chao)癌細(xi)胞) 5×106cells/瓶(ping)×2

EB病毒(du)轉(zhuan)化(hua)的人(ren)B淋(lin)巴(ba)細(xi)胞;HH-29 人(ren)腦膜細(xi)胞培養基(ji) 100mL 大(da)鼠Ras相(xiang)關C3肉毒(du)菌(jun)毒(du)素底物(wu)1(Rac1)ELISA試(shi)劑盒 DS(Human dermatan sulfate)  人(ren)皮膚素 96T

SDHD： 線(xian)粒體琥(hu)珀(po)酸(suan)脫氫(qing)酶D抗(kang)體 CL-0149MCF-7(人(ren)癌細(xi)胞)5×106cells/瓶(ping)×2

三(san)、培養註(zhu)意(yi)事(shi)項(xiang) 

1. 收到(dao)細(xi)胞後首先(xian)觀(guan)察細(xi)胞瓶(ping)是(shi)否完好(hao)，培養液(ye)是(shi)否有漏液(ye)、渾濁(zhuo)等現(xian)象，若(ruo)有上述現象 發(fa)生(sheng)請(qing)及(ji)時和我們聯(lian)系。

2. 仔(zai)細(xi)閱讀(du)細(xi)胞說明書，了(le)解細(xi)胞相(xiang)關信(xin)息(xi)，如(ru)細(xi)胞形態(tai)、所用培養基(ji)、血(xue)清比例、所需(xu) 細(xi)胞因子等(deng)，確保細(xi)胞培養條(tiao)件(jian)壹(yi)致(zhi)，若(ruo)由於(yu)培養條(tiao)件(jian)不(bu)壹(yi)致(zhi)而(er)導致(zhi)細(xi)胞出現(xian)問(wen)題(ti)，責(ze)任(ren)由(you) 客戶(hu)自行承擔。

3. 用 75%酒(jiu)精擦拭細(xi)胞瓶(ping)表(biao)面，顯(xian)微鏡下觀(guan)察細(xi)胞狀態。因運輸(shu)問(wen)題(ti)，部(bu)分細(xi)胞由於(yu)溫度 變(bian)化(hua)及劇烈碰(peng)亡(wang)破碎形(xing)成(cheng)碎片，是(shi)正常(chang)現(xian)象。觀(guan)察好(hao)細(xi)胞狀態後，75%酒精消(xiao)毒(du)瓶(ping)壁將(jiang) T25 瓶(ping)置於(yu) 37℃培養箱(xiang)放置 2-4h。

4. 貼(tie)壁細(xi)胞可(ke)以消(xiao)化(hua)，懸浮(fu)細(xi)胞直接混(hun)勻收集細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，棄(qi)上 清。加 5 mL PBS 重懸細(xi)胞，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，用新(xin)鮮的培養基(ji)重懸 細(xi)胞，並(bing)接種到(dao)新(xin)的培養瓶(ping)或培養皿(min)中(zhong)，置(zhi)於(yu)培養箱(xiang)中(zhong)進(jin)行(xing)培養。

5. 請(qing)客(ke)戶(hu)用相(xiang)同(tong)條(tiao)件(jian)的培養基(ji)用於(yu)細(xi)胞培養。

6. 建(jian)議(yi)客(ke)戶(hu)收到(dao)細(xi)胞後前 3 天各拍幾張(zhang)細(xi)胞照(zhao)片，記錄細(xi)胞狀態，便(bian)於(yu)和我司(si)技術部(bu)溝(gou)通 交(jiao)流。由(you)於運輸(shu)的原(yuan)因，個別(bie)敏感細(xi)胞會(hui)出(chu)現(xian)不(bu)穩(wen)定(ding)的情況(kuang)，請(qing)及時和我們聯(lian)系，告知細(xi)胞 的具體情(qing)況，以便我(wo)們的技術人(ren)員跟(gen)蹤回(hui)訪(fang)直至(zhi)問(wen)題(ti)解(jie)決。

7. 該(gai)細(xi)胞僅供(gong)科研使(shi)用。

8. 備註：運輸(shu)用的培養基(ji) (灌(guan)液(ye)培養基(ji)) 不(bu)能(neng)再(zai)用來(lai)培養細(xi)胞，請換(huan)用按照(zhao)說明書細(xi)胞培 養條(tiao)件(jian)新(xin)配(pei)制的培養基(ji)來(lai)培養細(xi)胞。     收到(dao)細(xi)胞後次傳代(dai)建(jian)議(yi) 1：2 傳代(dai) 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳代(dai)就(jiu)是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳 2 個(ge) T25 瓶(ping)或者 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳 2 個(ge)10cm 皿(min)。