WPMY-1人正常(chang)前(qian)列(lie)腺基(ji)質永生化細(xi)胞

公(gong)司產(chan)品(pin)僅(jin)供科研(yan)研(yan)究使(shi)用、不得用於臨床診(zhen)斷(duan)！

1、細(xi)胞傳代：

1）細(xi)胞生(sheng)長至覆(fu)蓋(gai)培養瓶的 80%面(mian)積時(shi)，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的(de)培(pei)養液(ye)，用 PBS 清洗細(xi)胞壹(yi)次(ci)；

2）添加(jia) 0.25%消化液(ye)約 1ml 至(zhi)培養瓶中，倒(dao)置(zhi)顯微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察(cha)，待(dai)細(xi)胞回(hui)縮(suo)變圓(yuan)後(hou)加(jia)入(ru) 5ml 培養

液(ye)終(zhong)止消化，再(zai)輕(qing)輕(qing)吹打(da)細(xi)胞使(shi)之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然後(hou)將(jiang)懸液(ye)轉移至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄(qi)上(shang)清(qing)，沈(chen)澱(dian)細(xi)胞用 1-2ml 培養基(ji)重懸，然(ran)後(hou)按 1:2 比(bi)例進(jin)行(xing)分瓶傳代，最後(hou)放入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞

培(pei)養(yang)箱(xiang)中培(pei)養(yang)；

2、細(xi)胞凍(dong)存：

1）細(xi)胞生(sheng)長至覆(fu)蓋(gai)培養瓶的 80%面(mian)積時(shi)，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的(de)培(pei)養液(ye)，用 PBS 清洗細(xi)胞壹(yi)次(ci)；

2）添加(jia) 0.25%消化液(ye)約 1ml 至(zhi)培養瓶中，倒(dao)置(zhi)顯微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察(cha)，待(dai)細(xi)胞回(hui)縮(suo)變圓(yuan)後(hou)加(jia)入(ru)培養液(ye)終(zhong)

止消化，輕輕吹打(da)細(xi)胞使(shi)之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然後(hou)將(jiang)懸液(ye)轉移至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用適量(liang)的(de)凍(dong)存液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xi)胞，並(bing)放置於(yu)凍存管中；

4）先(xian)將(jiang)細(xi)胞凍(dong)存管放置於(yu)-20℃ 1.5h，然後(hou)將(jiang)其(qi)移入(ru)-80℃過夜(ye)，24h 後(hou)轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮中進(jin)行(xing)長期保存。使(shi)用程序(xu)

降(jiang)溫盒(he)可直接放入(ru)-80℃。

壹(yi)、商(shang)品介紹：

二(er)、細(xi)胞培(pei)養(yang)操(cao)作

1) 復蘇細(xi)胞：以(yi)下細(xi)胞培(pei)養(yang)凍(dong)存處(chu)理僅(jin)供參考，具(ju)體操作步(bu)驟以隨(sui)貨(huo)產(chan)品(pin)說(shuo)明(ming)書(shu)為(wei)主(zhu)。將(jiang)含有1 mL細(xi)胞懸液(ye)的凍(dong)存管在(zai) 37℃水(shui)浴中迅(xun)速搖晃解凍(dong)，加(jia)4 mL培(pei)養(yang)基(ji)混合(he)均勻(yun)。在(zai)1000 rpm條(tiao)件下離(li)心(xin)3 min，棄(qi)去(qu)上清(qing)液(ye)，加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)基(ji)後(hou)吹勻。然(ran)後(hou)將(jiang)所有細(xi)胞懸液(ye)加(jia)入(ru)含適量(liang)培(pei)養(yang)基(ji)的培(pei)養瓶中培(pei)養(yang)過夜(ye)（或將細(xi)胞懸液(ye)加(jia)入(ru)10 cm皿中，加(jia)入(ru)約8 mL培養(yang)基(ji)，培養(yang)過夜(ye)）。第二(er)天換液(ye)並檢(jian)查細(xi)胞密(mi)度(du)。

2) 細(xi)胞傳代：如果(guo)細(xi)胞密(mi)度(du)達(da) 80%-90%，即(ji)可進行(xing)傳代培養。

a、棄(qi)去(qu)培養(yang)上(shang)清(qing)，用不含鈣(gai)、鎂(mei)離(li)子(zi)的(de)PBS潤洗(xi)細(xi)胞1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(pei)養瓶中，使(shi)消化液(ye)浸潤所有細(xi)胞，將(jiang)培(pei)養(yang)瓶置於(yu)37℃培養(yang)箱(xiang)中消化1-2 min（視細(xi)胞情(qing)況而(er)定(ding)），然後(hou)在(zai)顯微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察(cha)細(xi)胞消化情(qing)況，若細(xi)胞大(da)部(bu)分變圓(yuan)並(bing)脫(tuo)落(luo)，迅(xun)速拿回(hui)操(cao)作臺，輕敲幾(ji)下培(pei)養瓶後(hou)加(jia)2-3ml培(pei)養(yang)基(ji)終(zhong)止消化。輕輕打(da)勻後(hou)裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌(jun)離(li)心(xin)管中，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄(qi)去(qu)上清(qing)液(ye)，補加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)液(ye)後(hou)吹勻。

c、將(jiang)細(xi)胞懸液(ye)按1:2比(bi)例分到新的(de)含(han)8 mL培(pei)養基(ji)的新皿(min)中或者瓶中，置(zhi)於(yu)培養箱(xiang)中培(pei)養(yang)。 3) 細(xi)胞凍(dong)存：待細(xi)胞生(sheng)長狀態(tai)良(liang)好時，可進行(xing)細(xi)胞凍(dong)存。下面(mian) T25 瓶為例；a、收(shou)集細(xi)胞及(ji)細(xi)胞培(pei)養(yang)液(ye)，裝入(ru)無(wu)菌(jun)離(li)心(xin)管中，1000 rpm條(tiao)件下離(li)心(xin)4 min，棄(qi)去(qu)上清(qing)液(ye)，用PBS清洗壹遍(bian)，棄(qi)盡(jin)PBS，進(jin)行(xing)細(xi)胞計(ji)數(shu)。

b、根(gen)據(ju)細(xi)胞數(shu)量(liang)加(jia)入(ru)無(wu)血(xue)清(qing)細(xi)胞凍(dong)存液(ye)，使(shi)細(xi)胞密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕輕混勻(yun)，每(mei)支凍存管凍存1mL細(xi)胞懸液(ye)，註意(yi)凍(dong)存管做好標(biao)識。將凍(dong)存管放入(ru)-80℃冰箱(xiang)，24 h後(hou)轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮灌(guan)儲存。記錄凍存管位置以便(bian)下次(ci)拿取。

公(gong)司正在(zai)出(chu)售的(de)產(chan)品(pin)：

OR2A4： 嗅覺(jiao)受體家族2亞基(ji)4抗體 中國(guo)倉(cang)鼠(shu)卵(luan)巢(chao)細(xi)胞(亞系克(ke)隆);CHO-HCV-p7

人氣管上皮細(xi)胞(HTEpiC)(5×105 ) MN-h, 小(xiao)鼠(shu)海(hai)馬(ma)神經元 Mouse 大(da)鼠(shu)卵(luan)清蛋白(bai)特(te)異性(xing)IgE(OVA sIgE)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) OLAb(Mouse oxidized lowdensity lipoprotein antibody)  小(xiao)鼠(shu)氧(yang)化低密(mi)度(du)脂蛋白(bai)抗體 人子宮內(nei)膜腺癌細(xi)胞;HEC-1-B

R-Spondin Protein 大(da)鼠(shu)卵(luan)清蛋白(bai)特(te)異性(xing)IgE(OVA sIgE)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) HSCCAg-2(uman Squamous Cell Carcinoma Antigen 2)  人鱗(lin)狀(zhuang)上(shang)皮細(xi)胞癌(ai)抗原2 96T

ODF3B： 外(wai)致密(mi)白(bai)3B抗體 SERPINB12 Others Mouse 小(xiao)鼠(shu) SerpinB12 桿狀病毒-昆蟲(chong)細(xi)胞裂(lie)解液(ye) (陽性(xing)對照)

95-D 人高轉移肺(fei)癌細(xi)胞 大(da)鼠(shu)卵(luan)泡抑素(FS)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) Cr  大鼠(shu)骨(gu)膠(jiao)原交(jiao)聯(lian) 96T

GH3細(xi)胞，大(da)鼠(shu)埀(埀)體瘤細(xi)胞 5637(人膀胱(guang)癌(ai)細(xi)胞) 非(fei)洲綠(lv)猴(hou)腎(shen)細(xi)胞;Vero E6 雞(ji)可溶性(xing)E選擇素(sE-selectin)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) Insulin protein (from porcine pancreas) 豬(zhu)胰(yi)島(dao)素 0.5mg

KCNC1： 離(li)子(zi)通道蛋白(bai)Kv3.1抗體 BSG Others Mouse 小(xiao)鼠(shu) CD147 / EMMPRIN / Basigin 人細(xi)胞裂(lie)解液(ye) (陽性(xing)對照)

細(xi)胞培(pei)養(yang)超(chao)水(shui)CCGW 雞(ji)抗Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) ICAM-2 細(xi)胞間(jian)粘(zhan)附(fu)分子-2抗原 0.5mg

KLK11： 11抗體 人肺巨細(xi)胞癌(ai)高(gao)轉(zhuan)移細(xi)胞株(zhu);PG-BE1

HCCLM3(人高轉移肝癌細(xi)胞) 5×106cells/瓶×2 肝竇(dou)內(nei)皮(pi)細(xi)胞Many types of cells包(bao)裝(zhuang)：5 × 105次(ci)方(1ml) 雞(ji)巨噬(shi)細(xi)胞替(ti)代激活(huo)相關化學因子1(AmAC-1)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) IL-1 Alpha 白(bai)介(jie)素1α/IL-1α 0.5mg

WPMY-1人正常(chang)前(qian)列(lie)腺基(ji)質永生化細(xi)胞SIT： 跨(kua)膜(mo)接頭蛋白(bai)SIT抗體 CL-0005293T(人胚(pei)腎(shen)細(xi)胞)5×106cells/瓶×2

SKOV3/Taxol-25, 人卵(luan)巢(chao)癌(ai)耐(nai)藥細(xi)胞株(zhu) 大(da)鼠(shu)CD4分子(CD4)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) PS(Human plasma anticoagulant protein S)  人血漿(jiang)抗凝蛋白(bai)S 96T

SKAP55： SKAP55蛋白(bai)抗體 SLAMF6 Others Human 人 SLAMF6 / Ly108 人細(xi)胞裂(lie)解液(ye) (陽性(xing)對照)

LLC-MK2 恒(heng)河猴(hou)腎(shen)細(xi)胞 大(da)鼠(shu)CD45分子(CD45)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) PC(Human plasma anticoagulant protein C)  人血漿(jiang)抗凝蛋白(bai)C 96T

SIRT2： 沈(chen)默(mo)調(tiao)節相關蛋白(bai)2抗體 KB/V細(xi)胞，人口(kou)腔(qiang)上皮(pi)癌(ai)長春新堿(jian)耐(nai)藥株 人血管內皮細(xi)胞,EC-304細(xi)胞 大(da)鼠(shu)骨(gu)髓瘤細(xi)胞;Y3-Ag 1.2.3

三(san)、培養註意(yi)事(shi)項(xiang) 

1. 收(shou)到細(xi)胞後(hou)首(shou)先(xian)觀(guan)察(cha)細(xi)胞瓶是否(fou)完好(hao)，培養液(ye)是否(fou)有漏液(ye)、渾濁(zhuo)等(deng)現(xian)象(xiang)，若有上(shang)述(shu)現(xian)象(xiang) 發(fa)生請(qing)及(ji)時(shi)和我們(men)聯(lian)系。

2. 仔細(xi)閱(yue)讀細(xi)胞說(shuo)明(ming)書(shu)，了(le)解細(xi)胞相關信息(xi)，如細(xi)胞形(xing)態(tai)、所用培養基(ji)、血清(qing)比(bi)例、所需(xu) 細(xi)胞因子等(deng)，確保細(xi)胞培(pei)養(yang)條(tiao)件壹致，若由於(yu)培(pei)養條(tiao)件不壹致而導(dao)致細(xi)胞出(chu)現(xian)問(wen)題，責任(ren)由 客戶自(zi)行(xing)承擔。

3. 用 75%酒精(jing)擦拭(shi)細(xi)胞瓶表面(mian)，顯微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察(cha)細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)。因運輸問(wen)題(ti)，部分細(xi)胞由(you)於(yu)溫度(du) 變化及(ji)劇(ju)烈(lie)碰(peng)亡(wang)破碎(sui)形(xing)成碎(sui)片，是正常(chang)現(xian)象(xiang)。觀(guan)察(cha)好(hao)細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)後(hou)，75%酒精(jing)消毒瓶壁將(jiang) T25 瓶置於(yu) 37℃培養(yang)箱(xiang)放置 2-4h。

4. 貼壁(bi)細(xi)胞可以消化，懸浮(fu)細(xi)胞直(zhi)接混(hun)勻(yun)收(shou)集細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄(qi)上(shang) 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重懸細(xi)胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用新鮮(xian)的培(pei)養基(ji)重懸 細(xi)胞，並(bing)接種到新的(de)培(pei)養(yang)瓶或培養皿中，置(zhi)於(yu)培養箱(xiang)中進(jin)行(xing)培養。

5. 請(qing)客(ke)戶用相同(tong)條(tiao)件的培養基(ji)用於細(xi)胞培(pei)養(yang)。

6. 建(jian)議客(ke)戶收(shou)到細(xi)胞後(hou)前(qian) 3 天各(ge)拍(pai)幾(ji)張(zhang)細(xi)胞照片，記錄細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)，便(bian)於和我司技術部溝通 交(jiao)流。由於(yu)運輸的(de)原因，個(ge)別(bie)敏感(gan)細(xi)胞會(hui)出(chu)現(xian)不(bu)穩(wen)定(ding)的(de)情(qing)況，請(qing)及(ji)時(shi)和我們(men)聯(lian)系，告(gao)知細(xi)胞 的(de)具(ju)體情(qing)況，以(yi)便(bian)我們(men)的(de)技術人員跟蹤(zong)回訪(fang)直至(zhi)問題解決(jue)。

7. 該(gai)細(xi)胞僅(jin)供科研(yan)使(shi)用。

8. 備註：運輸用的培養基(ji) (灌液(ye)培養(yang)基(ji)) 不能(neng)再(zai)用來(lai)培(pei)養細(xi)胞，請(qing)換(huan)用按照說明(ming)書(shu)細(xi)胞培(pei) 養(yang)條(tiao)件新配制(zhi)的培(pei)養(yang)基(ji)來(lai)培(pei)養細(xi)胞。     收(shou)到細(xi)胞後(hou)第(di)壹(yi)次(ci)傳代建議 1：2 傳代 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳代就是 1 個(ge) T25 瓶傳 2 個(ge) T25 瓶或者 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不是 1 個(ge) T25 瓶傳 2 個(ge)10cm 皿(min)。