OCI-LY3人彌漫(man)大B細(xi)胞淋(lin)巴瘤(liu)細(xi)胞

公(gong)司(si)產(chan)品(pin)僅供(gong)科(ke)研研究使用、不得用於臨床診(zhen)斷！

1、細(xi)胞傳(chuan)代：

1）細(xi)胞生長(chang)至覆(fu)蓋(gai)培養(yang)瓶(ping)的(de) 80%面積時，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶(ping)中(zhong)的培養(yang)液，用 PBS 清洗細(xi)胞壹次(ci)；

2）添加(jia) 0.25%消化液約 1ml 至培養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒置(zhi)顯(xian)微鏡下(xia)觀(guan)察，待(dai)細(xi)胞回(hui)縮變圓(yuan)後加(jia)入(ru) 5ml 培養(yang)

液終(zhong)止消化，再輕輕吹(chui)打細(xi)胞使(shi)之脫(tuo)落(luo)，然(ran)後將懸(xuan)液轉(zhuan)移至 15ml 離心(xin)管中，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄(qi)上清(qing)，沈(chen)澱細(xi)胞用 1-2ml 培養(yang)基(ji)重(zhong)懸，然(ran)後按(an) 1:2 比例(li)進(jin)行(xing)分(fen)瓶(ping)傳(chuan)代，最(zui)後放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞

培養(yang)箱(xiang)中培養(yang)；

2、細(xi)胞凍(dong)存：

1）細(xi)胞生長(chang)至覆(fu)蓋(gai)培養(yang)瓶(ping)的(de) 80%面積時，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶(ping)中(zhong)的培養(yang)液，用 PBS 清洗細(xi)胞壹次(ci)；

2）添加(jia) 0.25%消化液約 1ml 至培養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒置(zhi)顯(xian)微鏡下(xia)觀(guan)察，待(dai)細(xi)胞回(hui)縮變圓(yuan)後加(jia)入(ru)培養(yang)液終(zhong)

止消化，輕輕吹(chui)打細(xi)胞使(shi)之脫(tuo)落(luo)，然(ran)後將懸(xuan)液轉(zhuan)移至 15ml 離心(xin)管中，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用適(shi)量的(de)凍(dong)存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸細(xi)胞，並(bing)放(fang)置(zhi)於凍存管中；

4）先將細(xi)胞凍(dong)存管放(fang)置(zhi)於-20℃ 1.5h，然(ran)後將其(qi)移(yi)入-80℃過(guo)夜，24h 後轉(zhuan)入液氮(dan)中(zhong)進(jin)行(xing)長期(qi)保(bao)存。使(shi)用程序

降(jiang)溫盒(he)可直接放(fang)入(ru)-80℃。

二(er)、細(xi)胞培養(yang)操作

1) 復蘇細(xi)胞：以(yi)下細(xi)胞培養(yang)凍(dong)存處(chu)理僅供(gong)參(can)考，具(ju)體操作步驟以(yi)隨貨產(chan)品(pin)說明(ming)書(shu)為(wei)主(zhu)。將含(han)有(you)1 mL細(xi)胞懸(xuan)液的(de)凍(dong)存(cun)管在 37℃水(shui)浴(yu)中(zhong)迅速(su)搖晃(huang)解凍，加(jia)4 mL培養(yang)基(ji)混合(he)均勻。在1000 rpm條件(jian)下(xia)離心(xin)3 min，棄(qi)去上清(qing)液，加(jia)1-2 mL培養(yang)基(ji)後吹(chui)勻。然(ran)後將所(suo)有(you)細(xi)胞懸(xuan)液加(jia)入(ru)含適(shi)量培養(yang)基(ji)的培養(yang)瓶(ping)中(zhong)培養(yang)過(guo)夜（或將細(xi)胞懸(xuan)液加(jia)入(ru)10 cm皿中(zhong)，加(jia)入(ru)約8 mL培養(yang)基(ji)，培養(yang)過(guo)夜）。第(di)二(er)天(tian)換(huan)液並(bing)檢(jian)查(zha)細(xi)胞密度(du)。

2) 細(xi)胞傳(chuan)代：如果(guo)細(xi)胞密度(du)達(da) 80%-90%，即(ji)可進(jin)行(xing)傳代培養(yang)。

a、棄(qi)去培養(yang)上清(qing)，用不含鈣、鎂(mei)離子的PBS潤(run)洗細(xi)胞1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培養(yang)瓶(ping)中(zhong)，使消化液浸(jin)潤(run)所(suo)有(you)細(xi)胞，將培養(yang)瓶(ping)置(zhi)於37℃培養(yang)箱(xiang)中消化1-2 min（視(shi)細(xi)胞情(qing)況(kuang)而(er)定(ding)），然(ran)後在顯(xian)微鏡下(xia)觀(guan)察細(xi)胞消化情(qing)況(kuang)，若(ruo)細(xi)胞大(da)部分(fen)變圓(yuan)並脫(tuo)落(luo)，迅速(su)拿(na)回操作臺(tai)，輕敲(qiao)幾(ji)下(xia)培養(yang)瓶(ping)後加(jia)2-3ml培養(yang)基(ji)終止消化。輕輕打(da)勻後裝入(ru)無(wu)菌離心(xin)管中，1000 rpm離心(xin)5 min，棄(qi)去上清(qing)液，補(bu)加(jia)1-2 mL培養(yang)液後吹(chui)勻。

c、將細(xi)胞懸(xuan)液按(an)1:2比例(li)分(fen)到(dao)新的含(han)8 mL培養(yang)基(ji)的新皿中(zhong)或者(zhe)瓶(ping)中(zhong)，置(zhi)於培養(yang)箱(xiang)中培養(yang)。 3) 細(xi)胞凍(dong)存：待(dai)細(xi)胞生長(chang)狀態良好時，可進(jin)行(xing)細(xi)胞凍(dong)存。下面 T25 瓶(ping)為(wei)例(li)；a、收(shou)集細(xi)胞及(ji)細(xi)胞培養(yang)液，裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌離心(xin)管中，1000 rpm條件(jian)下(xia)離心(xin)4 min，棄(qi)去上清(qing)液，用PBS清洗壹遍(bian)，棄(qi)盡(jin)PBS，進(jin)行(xing)細(xi)胞計數(shu)。

b、根據細(xi)胞數(shu)量加(jia)入(ru)無血清細(xi)胞凍(dong)存液，使(shi)細(xi)胞密度(du)5×106~1×107/mL，輕輕混(hun)勻，每支(zhi)凍存(cun)管凍存(cun)1mL細(xi)胞懸(xuan)液，註(zhu)意凍(dong)存(cun)管做好(hao)標(biao)識(shi)。將凍(dong)存(cun)管放(fang)入(ru)-80℃冰箱，24 h後轉(zhuan)入液氮(dan)灌(guan)儲(chu)存。記錄凍存(cun)管位置(zhi)以(yi)便(bian)下(xia)次拿(na)取。

公(gong)司(si)正(zheng)在出售的(de)產品：

CL-0308TE-13(人食管癌細(xi)胞)5×106cells/瓶(ping)×2 大(da)鼠吻素(su)受(shou)體(KISS1R)ELISA試(shi)劑盒 PF3(Mouse platelet factor 3)  小(xiao)鼠血小板(ban)因子3 96T

MAP4K1： 造(zao)血祖(zu)細(xi)胞激(ji)酶1抗(kang)體 小(xiao)鼠誘導性多(duo)潛(qian)能(neng)幹(gan)細(xi)胞;PUMC-mips-B5

NCTC 1469(小(xiao)鼠正(zheng)常肝細(xi)胞) 5×106cells/瓶(ping)×2 WEHI 22.1(B淋(lin)巴細(xi)胞) 大(da)鼠吻素(su)1(KISS1)ELISA試(shi)劑盒 IAA  大(da)鼠胰島素(su)自身抗(kang)體 雜(za)交(jiao)瘤(liu)(B類);Z51B3C10H12A12G2F7B5

IL1B Protein Rat 重(zhong)組大鼠 IL-1 beta / IL1B 蛋白(bai) (pro form, His 標簽) 大(da)鼠胃泌(mi)素抑制肽(tai)(GIP)ELISA試劑盒 VEGFR-1/Flt1(Human Vascuoar endothelial cell growth factor receptor 1)  人血管內(nei)皮(pi)細(xi)胞生長(chang)因(yin)子受(shou)體1 96T

phospho-MAP3K7IP1(Ser423)： 0酸(suan)化轉(zhuan)化生長(chang)因(yin)子β活(huo)化激酶(mei)結(jie)合蛋白(bai)1抗(kang)體 NA Others H1N1 甲(jia)型流(liu)感 H1N1 (A/California/04/2009) 神(shen)經(jing)酶(mei) (Neuraminidase / NA) 桿(gan)狀病毒(du)-昆(kun)蟲(chong)細(xi)胞裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性對照)

HPV16 E6 protein： 人類狀瘤(liu)病(bing)毒(du)16抗(kang)體 SV40轉(zhuan)化的非(fei)洲(zhou)綠猴(hou)腎細(xi)胞;COS-1 膀(pang)胱變移(yi)細(xi)胞癌(ai)，T-24細(xi)胞 U251(膠(jiao)質瘤(liu)細(xi)胞)

NXPH1 Others Mouse 小(xiao)鼠 Neurexophilin-1 / NXPH1 人細(xi)胞裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性對照) 人雌激(ji)素(su)誘導(dao)蛋白(bai)PS2 ELISA 試劑盒 IL-23R(Interleukin-23 receptor) 白(bai)介素-23受(shou)體抗(kang)原 0.5mg

HPV18 E7： 人類狀瘤(liu)病(bing)毒(du)18 E7抗(kang)體 CM-R103大(da)鼠腦靜脈血管平(ping)滑肌(ji)細(xi)胞培養(yang)基(ji)100mL

CCC-HSF-1細(xi)胞，人皮(pi)膚成纖(xian)維(wei)細(xi)胞 伯氏菌 中(zhong)國(guo)倉鼠肺細(xi)胞;CHL 人雌激(ji)素(su)受(shou)體(ER)ELISA 試(shi)劑盒 IL-1 Alpha (Interleukin-1 Alpha ) 白(bai)介素1α抗(kang)原 0.5mg

HPV31 E7： 人類狀瘤(liu)病(bing)毒(du)31 E7抗(kang)體 EFNB2 Others Mouse 小(xiao)鼠 EFNB2 / EphrinB2 人細(xi)胞裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性對照)

OCI-LY3人彌漫(man)大B細(xi)胞淋(lin)巴瘤(liu)細(xi)胞mOPC, 小(xiao)鼠少突(tu)膠(jiao)質前(qian)體細(xi)胞 大(da)鼠蛋白(bai)Z依賴性蛋白(bai)酶抑制(zhi)因(yin)子(ZPI)ELISA試劑盒 DHEA-S(Human Dehydroepiandrosterone sulfate)  人脫(tuo)氫(qing)表雄(xiong)酮(tong)酯 96T

Piwil2： piwi樣(yang)2蛋白(bai)抗(kang)體 IL12A Others Human 人 IL12A / NKSF1 人細(xi)胞裂(lie)解(jie)液 (陽(yang)性對照)

人胚胎(tai)心肌(ji)組織來(lai)源細(xi)胞;CCC-HEH-2 大(da)鼠蛋白(bai)C(PROC)ELISA試劑盒 T(Human Testoterone)  人睪(gao)酮(tong) 96T

presenilin 2： 早老(lao)素蛋白(bai)-2抗(kang)體 非(fei)洲(zhou)綠猴(hou)腎細(xi)胞;VERO

人胚肺(fei)成纖(xian)維(wei)細(xi)胞;IMR-90 人淋巴血管內(nei)皮(pi)細(xi)胞培養(yang)基(ji) 100mL 大鼠蛋白(bai)(nephrin)ELISA試劑盒 F-TESTO(Human Free Testoterone)  人遊離睪(gao)酮(tong) 96T

三(san)、培養(yang)註(zhu)意事(shi)項(xiang) 

1. 收(shou)到(dao)細(xi)胞後首先觀(guan)察細(xi)胞瓶(ping)是(shi)否(fou)完(wan)好，培養(yang)液是(shi)否(fou)有(you)漏(lou)液、渾(hun)濁(zhuo)等(deng)現象(xiang)，若有(you)上述(shu)現象 發(fa)生請及(ji)時(shi)和(he)我們(men)聯系。

2. 仔細(xi)閱讀(du)細(xi)胞說(shuo)明書，了(le)解(jie)細(xi)胞相關信息，如細(xi)胞形(xing)態、所(suo)用培養(yang)基(ji)、血清比例(li)、所(suo)需(xu) 細(xi)胞因(yin)子等(deng)，確(que)保(bao)細(xi)胞培養(yang)條件(jian)壹致(zhi)，若由(you)於培養(yang)條件(jian)不(bu)壹致(zhi)而導(dao)致(zhi)細(xi)胞出現問(wen)題，責任由 客(ke)戶(hu)自行(xing)承(cheng)擔(dan)。

3. 用 75%酒精擦拭(shi)細(xi)胞瓶(ping)表(biao)面，顯(xian)微鏡下(xia)觀(guan)察細(xi)胞狀態。因運輸問題，部分(fen)細(xi)胞由(you)於溫度(du) 變化及劇(ju)烈(lie)碰(peng)亡破(po)碎(sui)形(xing)成碎(sui)片，是(shi)正(zheng)常現(xian)象(xiang)。觀(guan)察好細(xi)胞狀態後，75%酒精消毒(du)瓶(ping)壁(bi)將 T25 瓶(ping)置(zhi)於 37℃培養(yang)箱(xiang)放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁細(xi)胞可(ke)以(yi)消化，懸浮(fu)細(xi)胞直(zhi)接混勻收集細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄(qi)上 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸細(xi)胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，用新鮮(xian)的培養(yang)基(ji)重(zhong)懸 細(xi)胞，並(bing)接種到(dao)新的培養(yang)瓶(ping)或培養(yang)皿(min)中，置(zhi)於培養(yang)箱(xiang)中進(jin)行(xing)培養(yang)。

5. 請客(ke)戶(hu)用相同條件(jian)的(de)培養(yang)基(ji)用於細(xi)胞培養(yang)。

6. 建(jian)議客戶收到(dao)細(xi)胞後前 3 天(tian)各(ge)拍幾張(zhang)細(xi)胞照片，記(ji)錄細(xi)胞狀態，便(bian)於和我司(si)技(ji)術(shu)部(bu)溝通 交(jiao)流(liu)。由於運輸的原(yuan)因(yin)，個(ge)別敏感細(xi)胞會(hui)出現不(bu)穩定(ding)的(de)情(qing)況(kuang)，請及(ji)時(shi)和(he)我們(men)聯系，告知細(xi)胞 的(de)具(ju)體情(qing)況(kuang)，以(yi)便(bian)我們(men)的(de)技(ji)術(shu)人員(yuan)跟(gen)蹤(zong)回訪(fang)直(zhi)至問題解決。

7. 該細(xi)胞僅供(gong)科(ke)研使(shi)用。

8. 備註(zhu)：運輸用的培養(yang)基(ji) (灌液培養(yang)基(ji)) 不能(neng)再用來培養(yang)細(xi)胞，請換(huan)用按(an)照說明(ming)書(shu)細(xi)胞培 養(yang)條件(jian)新配(pei)制(zhi)的(de)培養(yang)基(ji)來培養(yang)細(xi)胞。     收(shou)到(dao)細(xi)胞後第(di)壹次(ci)傳代建(jian)議 1：2 傳代 。

9. 註(zhu)意：  1:2 傳(chuan)代就(jiu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個 T25 瓶(ping)或者(zhe) 2 個 6cm 皿。不(bu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個10cm 皿。