OCI-AML3人急性髓細(xi)胞性(xing)白血病細(xi)胞

公(gong)司(si)產(chan)品僅(jin)供科(ke)研研究使(shi)用(yong)、不得(de)用(yong)於(yu)臨(lin)床(chuang)診斷！

1、細(xi)胞傳(chuan)代：

1）細(xi)胞生長(chang)至(zhi)覆蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶的 80%面(mian)積時(shi)，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶中(zhong)的培(pei)養(yang)液(ye)，用(yong) PBS 清洗(xi)細(xi)胞壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化液(ye)約(yue) 1ml 至培養(yang)瓶中(zhong)，倒置(zhi)顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察，待細(xi)胞回縮(suo)變(bian)圓後(hou)加入(ru) 5ml 培(pei)養(yang)

液(ye)終止消(xiao)化，再(zai)輕(qing)輕吹(chui)打(da)細(xi)胞使(shi)之脫(tuo)落(luo)，然(ran)後(hou)將懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄(qi)上(shang)清，沈澱細(xi)胞用(yong) 1-2ml 培養(yang)基(ji)重懸(xuan)，然(ran)後(hou)按 1:2 比例進(jin)行分瓶(ping)傳(chuan)代，最(zui)後(hou)放入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞

培(pei)養(yang)箱中(zhong)培養(yang)；

2、細(xi)胞凍(dong)存(cun)：

1）細(xi)胞生長(chang)至(zhi)覆蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶的 80%面(mian)積時(shi)，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶中(zhong)的培(pei)養(yang)液(ye)，用(yong) PBS 清洗(xi)細(xi)胞壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化液(ye)約(yue) 1ml 至培養(yang)瓶中(zhong)，倒置(zhi)顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察，待細(xi)胞回縮(suo)變(bian)圓後(hou)加入(ru)培(pei)養(yang)液(ye)終

止消(xiao)化，輕輕(qing)吹(chui)打(da)細(xi)胞使(shi)之脫(tuo)落(luo)，然(ran)後(hou)將懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用(yong)適量的凍(dong)存(cun)液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細(xi)胞，並(bing)放置(zhi)於(yu)凍(dong)存(cun)管(guan)中；

4）先(xian)將細(xi)胞凍(dong)存(cun)管(guan)放置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後(hou)將其移入(ru)-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後(hou)轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮(dan)中(zhong)進(jin)行長期保(bao)存(cun)。使(shi)用(yong)程序

降溫盒可直接放入(ru)-80℃。

二(er)、細(xi)胞培(pei)養(yang)操作(zuo)

1) 復蘇細(xi)胞：以(yi)下(xia)細(xi)胞培(pei)養(yang)凍存(cun)處理僅供(gong)參(can)考(kao)，具(ju)體(ti)操(cao)作(zuo)步驟(zhou)以(yi)隨(sui)貨產(chan)品說(shuo)明(ming)書(shu)為(wei)主。將含有(you)1 mL細(xi)胞懸(xuan)液(ye)的凍(dong)存(cun)管(guan)在 37℃水浴中(zhong)迅(xun)速搖晃解凍(dong)，加(jia)4 mL培(pei)養(yang)基(ji)混合(he)均勻(yun)。在1000 rpm條(tiao)件下(xia)離心(xin)3 min，棄(qi)去上(shang)清液(ye)，加1-2 mL培(pei)養(yang)基(ji)後(hou)吹勻。然(ran)後(hou)將所有(you)細(xi)胞懸(xuan)液(ye)加入(ru)含適量(liang)培(pei)養(yang)基(ji)的培(pei)養(yang)瓶中(zhong)培養(yang)過夜(ye)（或將細(xi)胞懸(xuan)液(ye)加入(ru)10 cm皿(min)中(zhong)，加(jia)入(ru)約(yue)8 mL培養(yang)基(ji)，培養(yang)過夜(ye)）。第二(er)天換液(ye)並檢(jian)查細(xi)胞密度。

2) 細(xi)胞傳(chuan)代：如果(guo)細(xi)胞密度達 80%-90%，即可進行傳代(dai)培(pei)養(yang)。

a、棄(qi)去培(pei)養(yang)上(shang)清，用(yong)不含鈣、鎂離子的PBS潤(run)洗(xi)細(xi)胞1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養(yang)瓶中(zhong)，使(shi)消(xiao)化液(ye)浸潤(run)所有(you)細(xi)胞，將培(pei)養(yang)瓶置(zhi)於(yu)37℃培(pei)養(yang)箱中(zhong)消化1-2 min（視細(xi)胞情況(kuang)而定），然(ran)後(hou)在顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察細(xi)胞消(xiao)化情況(kuang)，若(ruo)細(xi)胞大(da)部分變(bian)圓並脫(tuo)落，迅(xun)速拿回操(cao)作(zuo)臺(tai)，輕(qing)敲幾下(xia)培養(yang)瓶後(hou)加2-3ml培養(yang)基(ji)終止消(xiao)化。輕輕(qing)打(da)勻後(hou)裝入(ru)無(wu)菌離心(xin)管(guan)中，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄(qi)去上(shang)清液(ye)，補加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)液(ye)後(hou)吹勻。

c、將細(xi)胞懸(xuan)液(ye)按1:2比例分(fen)到(dao)新(xin)的含8 mL培養(yang)基(ji)的新(xin)皿(min)中或者(zhe)瓶(ping)中(zhong)，置(zhi)於(yu)培(pei)養(yang)箱中(zhong)培養(yang)。 3) 細(xi)胞凍(dong)存(cun)：待細(xi)胞生長(chang)狀態(tai)良(liang)好(hao)時(shi)，可進行細(xi)胞凍(dong)存(cun)。下(xia)面(mian) T25 瓶為例；a、收(shou)集細(xi)胞及細(xi)胞培(pei)養(yang)液(ye)，裝入(ru)無(wu)菌離心(xin)管(guan)中，1000 rpm條(tiao)件下(xia)離心(xin)4 min，棄(qi)去上(shang)清液(ye)，用(yong)PBS清洗(xi)壹(yi)遍(bian)，棄(qi)盡PBS，進(jin)行細(xi)胞計(ji)數(shu)。

b、根據細(xi)胞數(shu)量加入(ru)無(wu)血清細(xi)胞凍(dong)存(cun)液(ye)，使(shi)細(xi)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕(qing)混(hun)勻，每支(zhi)凍(dong)存(cun)管(guan)凍存(cun)1mL細(xi)胞懸(xuan)液(ye)，註意(yi)凍存(cun)管(guan)做好(hao)標(biao)識。將凍(dong)存(cun)管(guan)放入(ru)-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後(hou)轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮(dan)灌(guan)儲存(cun)。記(ji)錄凍存(cun)管(guan)位(wei)置(zhi)以(yi)便下(xia)次(ci)拿(na)取。

公司(si)正在(zai)出售(shou)的產(chan)品：

NCI-H838(人非小(xiao)細(xi)胞肺(fei)癌(ai)細(xi)胞) 5×106cells/瓶(ping)×2 A9(皮(pi)下(xia)結(jie)締(di)組(zu)織細(xi)胞) 大(da)鼠五聚素3(PTX3)ELISA試劑(ji)盒 Apo-H(Mouse Apolipoprotein H)  小(xiao)鼠載(zai)脂蛋白H 96T

MIC1： 結(jie)腸(chang)癌(ai)相關(guan)蛋白MIC1抗(kang)體(ti) 小(xiao)鼠前胃(wei)癌(ai)低轉(zhuan)移細(xi)胞(綠色熒(ying)光蛋白標(biao)記(ji));MFC-B5-GFP

IL18 Protein Cynomolgus 重(zhong)組(zu)食蟹猴 IL-18 / IL-1F4 蛋白 (His 標(biao)簽) 大鼠無翅(chi)型MMTV整合(he)位(wei)點(dian)家(jia)族成員5A(W5A)ELISA試(shi)劑(ji)盒 IL1Ra  大(da)鼠白介素1受體(ti)拮抗(kang)劑(ji) 96T

MHC Class II： 組(zu)織相容(rong)性復合(he)體(ti)β抗(kang)體(ti) CCL17 Others Mouse 小(xiao)鼠 CCL17 / TARC 桿狀病毒(du)-昆(kun)蟲(chong)細(xi)胞裂解液(ye) (陽性(xing)對(dui)照(zhao))

小(xiao)鼠胰島(dao)細(xi)胞培(pei)養(yang)基(ji) 100mL 大鼠無翅(chi)型MMTV整合(he)位(wei)點(dian)家(jia)族成員4(W4)ELISA試(shi)劑(ji)盒 BAFF-R(Human B cell activation factorr from the tumor necrosis factor family receptor)  人B細(xi)胞活化因子受體(ti) 96T

HSH2D： HSH2D抗(kang)體(ti) CM-R111大(da)鼠雪(xue)旺氏(shi)細(xi)胞培(pei)養(yang)基(ji)100mL

HEF細(xi)胞，人胚纖維細(xi)胞系 奇(qi)異變(bian)形桿(gan)菌 中國(guo)倉(cang)鼠卵巢(chao)細(xi)胞(亞(ya)系克隆(long));CHO-DUKXB11-TGF-β Dinding Protein cDNA (LH)ELISA 試劑(ji)盒 IL-14/Taxilin alpha 白(bai)介素14抗(kang)原(yuan) 0.5mg

Hirudin： 水蛭(zhi)素抗(kang)體(ti) EFNB2 Others Mouse 小(xiao)鼠 EFNB2 / EphrinB2 人細(xi)胞裂解液(ye) (陽性(xing)對(dui)照(zhao))

小(xiao)鼠誘導性(xing)多潛能幹(gan)細(xi)胞;PUMC-mips-A5 人促紅細(xi)胞生成(cheng)素抗(kang)原(yuan)(EPO-Ag)ELISA試(shi)劑(ji)盒 IL-15(Interleukin-15) 白(bai)細(xi)胞介(jie)素-15抗(kang)原(yuan) 0.5mg

HLA Class 1 ABC： 白(bai)細(xi)胞抗(kang)原(yuan)A抗(kang)體(ti) EB病(bing)毒(du)轉(zhuan)化的人B淋巴(ba)細(xi)胞;KMY0927

OCI-AML3人急性髓細(xi)胞性(xing)白血病細(xi)胞293來(lai)源病毒(du)包(bao)裝(zhuang)細(xi)胞;ΦA-GP 大(da)鼠蛋白激(ji)酶(mei)Bγ(PKBγ)ELISA試(shi)劑(ji)盒 CT(Human Calcitonin)  人降鈣素 96T

Peptide YY/PYY： 酪酪肽(tai)抗(kang)體(ti) 猴(hou)腎(shen)細(xi)胞;vero IgRCD4-

人肺(fei)成纖維細(xi)胞;HFL1 人淋巴(ba)成纖(xian)維細(xi)胞培(pei)養(yang)基(ji) 100mL 大鼠蛋白激(ji)酶(mei)Bβ(PKBβ)ELISA試(shi)劑(ji)盒 TSH(Human Thyroid Stimulating Hormone)  人促甲狀腺素 96T

PACRG： 麻(ma)瘋(feng)病和(he)帕金森(sen)氏(shi)病共(gong)同調(tiao)節(jie)蛋白抗(kang)體(ti) 神(shen)經小(xiao)膠(jiao)質細(xi)胞Many types of cells包(bao)裝：5 × 105次(ci)方(fang)(1ml)

人間充(chong)質幹(gan)細(xi)胞-脂肪(fang) 大鼠蛋白激(ji)酶(mei)B(PKB)ELISA試(shi)劑(ji)盒 Human Cortisol  人 96T

三(san)、培(pei)養(yang)註意(yi)事項(xiang) 

1. 收(shou)到(dao)細(xi)胞後(hou)首(shou)先(xian)觀(guan)察細(xi)胞瓶(ping)是否(fou)完好(hao)，培養(yang)液(ye)是否(fou)有(you)漏(lou)液(ye)、渾(hun)濁等現象(xiang)，若(ruo)有(you)上(shang)述(shu)現象(xiang) 發生請(qing)及時(shi)和(he)我們(men)聯系。

2. 仔(zai)細(xi)閱讀(du)細(xi)胞說(shuo)明(ming)書(shu)，了(le)解(jie)細(xi)胞相(xiang)關(guan)信(xin)息(xi)，如(ru)細(xi)胞形(xing)態(tai)、所用(yong)培養(yang)基(ji)、血清比例、所需(xu) 細(xi)胞因子等，確(que)保(bao)細(xi)胞培(pei)養(yang)條(tiao)件壹(yi)致(zhi)，若(ruo)由(you)於(yu)培(pei)養(yang)條(tiao)件不壹(yi)致(zhi)而導致(zhi)細(xi)胞出現問題(ti)，責任由(you) 客(ke)戶(hu)自(zi)行承(cheng)擔。

3. 用(yong) 75%酒精擦(ca)拭(shi)細(xi)胞瓶(ping)表面(mian)，顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察細(xi)胞狀態(tai)。因運(yun)輸問題(ti)，部分(fen)細(xi)胞由(you)於(yu)溫(wen)度(du) 變(bian)化及劇(ju)烈碰亡破(po)碎形成(cheng)碎片(pian)，是正(zheng)常(chang)現象(xiang)。觀(guan)察好(hao)細(xi)胞狀態(tai)後(hou)，75%酒精消(xiao)毒(du)瓶(ping)壁(bi)將 T25 瓶(ping)置(zhi)於(yu) 37℃培(pei)養(yang)箱放置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細(xi)胞可以(yi)消(xiao)化，懸(xuan)浮細(xi)胞直(zhi)接混勻(yun)收(shou)集細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄(qi)上(shang) 清。加 5 mL PBS 重懸(xuan)細(xi)胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用(yong)新(xin)鮮的培(pei)養(yang)基(ji)重懸(xuan) 細(xi)胞，並(bing)接種到(dao)新(xin)的培(pei)養(yang)瓶或培養(yang)皿中(zhong)，置於(yu)培(pei)養(yang)箱中(zhong)進行(xing)培養(yang)。

5. 請客(ke)戶(hu)用(yong)相同條(tiao)件的培(pei)養(yang)基(ji)用(yong)於(yu)細(xi)胞培(pei)養(yang)。

6. 建議(yi)客(ke)戶(hu)收(shou)到(dao)細(xi)胞後(hou)前 3 天各拍(pai)幾張(zhang)細(xi)胞照(zhao)片(pian)，記(ji)錄細(xi)胞狀態(tai)，便於(yu)和(he)我司(si)技術部(bu)溝通 交(jiao)流。由(you)於(yu)運(yun)輸(shu)的原(yuan)因，個(ge)別敏(min)感(gan)細(xi)胞會(hui)出現不穩(wen)定的情況(kuang)，請(qing)及時(shi)和(he)我們(men)聯系，告(gao)知細(xi)胞 的具(ju)體(ti)情況(kuang)，以(yi)便我們(men)的技術人員跟(gen)蹤回訪(fang)直至問題(ti)解決。

7. 該(gai)細(xi)胞僅(jin)供科(ke)研使(shi)用(yong)。

8. 備註：運(yun)輸用(yong)的培(pei)養(yang)基(ji) (灌(guan)液(ye)培養(yang)基(ji)) 不能再(zai)用(yong)來(lai)培(pei)養(yang)細(xi)胞，請(qing)換用(yong)按照說明(ming)書(shu)細(xi)胞培(pei) 養(yang)條(tiao)件新(xin)配制的培(pei)養(yang)基(ji)來(lai)培(pei)養(yang)細(xi)胞。     收(shou)到(dao)細(xi)胞後(hou)第壹(yi)次(ci)傳(chuan)代(dai)建(jian)議(yi) 1：2 傳代 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳代(dai)就是 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳 2 個(ge) T25 瓶或者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不是 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳 2 個(ge)10cm 皿。