NCM 460人(ren)正常結腸(chang)上(shang)皮細胞

公(gong)司產品(pin)僅供科研研究(jiu)使(shi)用(yong)、不得用(yong)於臨(lin)床診(zhen)斷(duan)！

1、細胞傳代：

1）細(xi)胞生(sheng)長至(zhi)覆蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶(ping)的 80%面(mian)積(ji)時，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)的(de)培(pei)養(yang)液，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細胞壹(yi)次；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化液約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀察(cha)，待(dai)細胞回縮(suo)變圓後加(jia)入(ru) 5ml 培(pei)養(yang)

液終(zhong)止(zhi)消(xiao)化，再(zai)輕輕(qing)吹打(da)細胞使之脫(tuo)落，然(ran)後將(jiang)懸(xuan)液轉移至(zhi) 15ml 離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄上清(qing)，沈澱(dian)細(xi)胞用(yong) 1-2ml 培(pei)養(yang)基(ji)重懸(xuan)，然(ran)後按(an) 1:2 比(bi)例(li)進(jin)行(xing)分瓶(ping)傳代，最(zui)後放入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞

培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)培(pei)養(yang)；

2、細(xi)胞凍存(cun)：

1）細胞生(sheng)長至(zhi)覆蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶(ping)的 80%面(mian)積(ji)時，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)的(de)培(pei)養(yang)液，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細胞壹(yi)次；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化液約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀察(cha)，待(dai)細胞回縮(suo)變圓後加(jia)入(ru)培(pei)養(yang)液終(zhong)

止(zhi)消(xiao)化，輕(qing)輕吹打(da)細胞使之脫(tuo)落，然(ran)後將(jiang)懸(xuan)液轉移至(zhi) 15ml 離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用(yong)適量(liang)的凍存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細胞，並放置(zhi)於凍存(cun)管(guan)中(zhong)；

4）先(xian)將(jiang)細(xi)胞凍存(cun)管(guan)放置(zhi)於-20℃ 1.5h，然(ran)後將(jiang)其(qi)移入(ru)-80℃過(guo)夜，24h 後轉入(ru)液氮(dan)中(zhong)進(jin)行(xing)長期保(bao)存(cun)。使用(yong)程序

降溫(wen)盒(he)可(ke)直接(jie)放入(ru)-80℃。

二(er)、細胞培(pei)養(yang)操(cao)作(zuo)

1) 復(fu)蘇(su)細(xi)胞：以(yi)下(xia)細胞培(pei)養(yang)凍存(cun)處(chu)理僅供參考(kao)，具體操(cao)作(zuo)步驟(zhou)以(yi)隨貨(huo)產(chan)品(pin)說明(ming)書(shu)為(wei)主。將(jiang)含(han)有1 mL細胞懸液的(de)凍存(cun)管(guan)在 37℃水(shui)浴(yu)中(zhong)迅(xun)速搖晃(huang)解(jie)凍，加(jia)4 mL培(pei)養(yang)基(ji)混(hun)合均(jun)勻。在1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離心(xin)3 min，棄去上清(qing)液，加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)基(ji)後吹勻(yun)。然(ran)後將(jiang)所(suo)有細胞懸液加(jia)入(ru)含(han)適量(liang)培(pei)養(yang)基(ji)的(de)培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)培(pei)養(yang)過(guo)夜（或(huo)將(jiang)細(xi)胞懸液加(jia)入(ru)10 cm皿(min)中(zhong)，加(jia)入(ru)約(yue)8 mL培(pei)養(yang)基(ji)，培(pei)養(yang)過(guo)夜）。第(di)二(er)天換液並(bing)檢(jian)查細胞密度(du)。

2) 細(xi)胞傳代：如(ru)果(guo)細(xi)胞密度(du)達(da) 80%-90%，即(ji)可(ke)進(jin)行(xing)傳代培(pei)養(yang)。

a、棄(qi)去(qu)培(pei)養(yang)上(shang)清(qing)，用(yong)不含(han)鈣、鎂(mei)離子的(de)PBS潤洗(xi)細胞1-2次。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，使(shi)消(xiao)化液浸(jin)潤所(suo)有細胞，將(jiang)培(pei)養(yang)瓶(ping)置於37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化1-2 min（視(shi)細(xi)胞情(qing)況(kuang)而定(ding)），然(ran)後在顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀察(cha)細胞消化情(qing)況(kuang)，若(ruo)細胞大部分(fen)變圓並(bing)脫(tuo)落，迅(xun)速拿(na)回操(cao)作(zuo)臺(tai)，輕敲(qiao)幾下(xia)培(pei)養(yang)瓶(ping)後加(jia)2-3ml培(pei)養(yang)基(ji)終(zhong)止(zhi)消(xiao)化。輕(qing)輕打(da)勻(yun)後裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄去上清(qing)液，補(bu)加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)液後吹勻(yun)。

c、將(jiang)細(xi)胞懸液按(an)1:2比(bi)例(li)分(fen)到新(xin)的含(han)8 mL培(pei)養(yang)基(ji)的(de)新皿(min)中(zhong)或(huo)者(zhe)瓶(ping)中(zhong)，置(zhi)於培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)培(pei)養(yang)。 3) 細(xi)胞凍存(cun)：待(dai)細胞生(sheng)長狀(zhuang)態良(liang)好(hao)時，可(ke)進(jin)行(xing)細胞凍存(cun)。下(xia)面 T25 瓶(ping)為(wei)例；a、收(shou)集細(xi)胞及(ji)細(xi)胞培(pei)養(yang)液，裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離心(xin)4 min，棄去上清(qing)液，用(yong)PBS清(qing)洗(xi)壹(yi)遍，棄(qi)盡(jin)PBS，進行(xing)細胞計(ji)數。

b、根據(ju)細胞數量(liang)加(jia)入(ru)無(wu)血清(qing)細胞凍存(cun)液，使(shi)細(xi)胞密度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混(hun)勻，每(mei)支(zhi)凍存(cun)管(guan)凍存(cun)1mL細胞懸液，註意(yi)凍存(cun)管(guan)做(zuo)好標識(shi)。將(jiang)凍存(cun)管(guan)放入(ru)-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後轉入(ru)液氮(dan)灌(guan)儲(chu)存(cun)。記錄(lu)凍存(cun)管(guan)位(wei)置以(yi)便(bian)下(xia)次拿(na)取(qu)。

公(gong)司正在出(chu)售的(de)產品(pin)：

小(xiao)鼠肺動脈(mai)成纖(xian)維(wei)細胞培(pei)養(yang)基(ji) 100mL 大鼠細(xi)胞間粘附(fu)分子2(ICAM-2)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) PCT(Mouse Procalcitonin)  小(xiao)鼠降(jiang)鈣(gai)素原 96T

phospho-MAP4K4(Ser629)： 0酸(suan)化原活化蛋(dan)白激(ji)酶(mei)MAP4K4抗體(ti) SGC-7901細(xi)胞，胃腺(xian)癌(ai)細(xi)胞 人(ren)食(shi)管(guan)癌(ai)細(xi)胞,Eca-109細胞 大鼠腎(shen)上(shang)腺(xian)嗜鉻細胞瘤細(xi)胞;PC-12 [PC12]

CNDP1 Others Mouse 小(xiao)鼠 CNDP1 人(ren)細胞裂解(jie)液 (陽(yang)性(xing)對(dui)照) 大鼠細(xi)胞間粘附(fu)分子2(ICAM2)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) TLR4  大鼠Toll樣(yang)受體4 96T

MVK： 甲羥(qiang)激(ji)酶(mei)抗體(ti) 人(ren)腎(shen)皮質(zhi)上皮細胞cDNAHRCEpiC cDNA

Psi2 DAP小(xiao)鼠胚(pei)胎成纖維(wei)細胞 Psi2 DAP mouse embryo fibroblasts DMEM培(pei)養(yang)基(ji)+10%FBS 大鼠細(xi)胞間粘附(fu)分子1(ICAM-1/CD54)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) DAT  大鼠多(duo)巴胺轉運蛋(dan)白 96T

IL8 Protein Cynomolgus 重組食(shi)蟹(xie)猴 IL-8 / CXCL8 蛋(dan)白 人(ren)催乳素(PRL)ELISA 試劑(ji)盒(he) HtrA2/Omi peptide 絲酸(suan)蛋白酶(mei)/線(xian)粒體(ti)絲酸(suan)蛋白酶(mei)多(duo)肽(tai)抗原 0.5mg

HSJ1： 熱(re)休克蛋白J1抗體(ti) ADA Others Human 人(ren) ADA / Adenosine deaminase 桿狀(zhuang)病毒-昆(kun)蟲細(xi)胞裂解(jie)液 (陽(yang)性(xing)對(dui)照)

人(ren)甲狀(zhuang)腺(xian)濾泡(pao)上皮細胞培(pei)養(yang)基(ji) 100mL 人(ren)催產素(OT)ELISA 試劑(ji)盒(he) Iba-1(Ionized calcium bindingadaptor molecule-1) 離(li)子鈣(gai)接頭蛋(dan)白抗原 0.5mg

Hes5： 發(fa)狀(zhuang)分裂(lie)相(xiang)關(guan)增強(qiang)子-5抗體(ti) 非(fei)洲綠猴腎(shen)細(xi)胞;VERO 胚(pei)絨(rong)毛癌(ai)細(xi)胞，JAR細胞 SW480 [SW-480](結腸(chang)癌(ai)細(xi)胞)

CD70 Others Rat 大鼠 CD70 / CD27L / TNFSF7 人(ren)細胞裂解(jie)液 (陽(yang)性(xing)對(dui)照) 人(ren)促有絲分(fen)裂因(yin)子(MF/MPF)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) IFABP(Intestinal Fatty acid binding protein) 小(xiao)腸(chang)型脂(zhi)肪(fang)酸(suan)結合(he)蛋(dan)白抗原 0.5mg

NCM 460人(ren)正常結腸(chang)上(shang)皮細胞NCI-H460 人(ren)大細胞肺癌(ai)細(xi)胞 大鼠蛋(dan)白激(ji)酶(mei)抑制因(yin)子β(PKIβ)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) TXB2(Human Thromboxane B2)  人(ren)血栓素B2 96T

Phosphoserine/threonine/tyrosine： 0酸(suan)化絲酸(suan)/蘇(su)酸(suan)/酪酸(suan)抗體(ti) 3T6swiss細(xi)胞，小鼠胚(pei)胎成纖維(wei)細胞 人(ren)癌(ai)細(xi)胞,M453細胞 過氧化物酶(mei)分析(xi)試劑(ji)盒(he)GPX

MS4A1 Others Ferret 雪(xue)貂(diao) CD20 / MS4A-1 人(ren)細胞裂解(jie)液 (陽(yang)性(xing)對(dui)照) 大鼠蛋(dan)白激(ji)酶(mei)N2(PKN2)ELISA試劑(ji)盒(he) CORT(Human Corticosterone)  人(ren)皮質(zhi)酮/腎(shen)上(shang)腺(xian)酮 96T

PIH1D1： 核(he)仁(ren)同(tong)源(yuan)蛋(dan)白17抗體(ti) 牛陀(tuo)螺狀(zhuang)細胞;BT

COS-7L, 非(fei)洲綠猴腎(shen)成(cheng)纖(xian)維(wei)細胞 大鼠蛋(dan)白激(ji)酶(mei)G(PKG)ELISA試劑(ji)盒(he) PGE2(Human Prostaglandin E2)  人(ren)前(qian)列(lie)腺(xian)素E2 96T

三(san)、培(pei)養(yang)註意(yi)事(shi)項(xiang) 

1. 收(shou)到細(xi)胞後首(shou)先(xian)觀察(cha)細胞瓶(ping)是否(fou)完好(hao)，培(pei)養(yang)液是否(fou)有漏液、渾(hun)濁(zhuo)等(deng)現(xian)象(xiang)，若(ruo)有上述(shu)現象(xiang) 發(fa)生(sheng)請及(ji)時和我(wo)們聯(lian)系(xi)。

2. 仔細(xi)閱讀(du)細胞說明(ming)書(shu)，了(le)解(jie)細(xi)胞相(xiang)關(guan)信(xin)息(xi)，如(ru)細(xi)胞形(xing)態(tai)、所(suo)用(yong)培(pei)養(yang)基(ji)、血清(qing)比(bi)例(li)、所(suo)需 細(xi)胞因(yin)子等(deng)，確(que)保(bao)細胞培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)壹(yi)致(zhi)，若(ruo)由於培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)不(bu)壹(yi)致(zhi)而導(dao)致(zhi)細(xi)胞出現問(wen)題(ti)，責(ze)任由 客戶自行(xing)承擔(dan)。

3. 用(yong) 75%酒精(jing)擦(ca)拭細(xi)胞瓶(ping)表面(mian)，顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀察(cha)細胞狀(zhuang)態。因(yin)運輸(shu)問(wen)題(ti)，部(bu)分(fen)細(xi)胞由於溫(wen)度(du) 變化及(ji)劇(ju)烈碰亡破碎(sui)形(xing)成(cheng)碎(sui)片，是正常現(xian)象(xiang)。觀(guan)察(cha)好細(xi)胞狀(zhuang)態後，75%酒(jiu)精(jing)消毒(du)瓶(ping)壁將(jiang) T25 瓶(ping)置於 37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)放置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁細(xi)胞可(ke)以(yi)消化，懸(xuan)浮細(xi)胞直接(jie)混(hun)勻收(shou)集細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄上 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重懸(xuan)細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，用(yong)新鮮的(de)培(pei)養(yang)基(ji)重懸(xuan) 細胞，並接種(zhong)到新(xin)的培(pei)養(yang)瓶(ping)或培(pei)養(yang)皿(min)中(zhong)，置(zhi)於培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)進(jin)行(xing)培(pei)養(yang)。

5. 請(qing)客(ke)戶用(yong)相(xiang)同條(tiao)件(jian)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)用(yong)於細胞培(pei)養(yang)。

6. 建議客(ke)戶收(shou)到細(xi)胞後前(qian) 3 天各(ge)拍幾(ji)張(zhang)細胞照片，記錄(lu)細(xi)胞狀(zhuang)態，便(bian)於和我(wo)司技(ji)術部溝(gou)通(tong) 交(jiao)流。由(you)於運輸(shu)的(de)原因(yin)，個別敏(min)感(gan)細胞會出現不(bu)穩(wen)定(ding)的(de)情(qing)況(kuang)，請(qing)及(ji)時和我(wo)們聯(lian)系(xi)，告(gao)知細胞 的具體情(qing)況(kuang)，以(yi)便(bian)我(wo)們的(de)技(ji)術人(ren)員跟蹤(zong)回訪(fang)直至(zhi)問(wen)題(ti)解(jie)決(jue)。

7. 該細胞僅供科研使用(yong)。

8. 備註：運輸(shu)用(yong)的培(pei)養(yang)基(ji) (灌(guan)液培(pei)養(yang)基(ji)) 不(bu)能(neng)再(zai)用(yong)來培(pei)養(yang)細(xi)胞，請換用(yong)按照(zhao)說(shuo)明(ming)書(shu)細(xi)胞培(pei) 養(yang)條(tiao)件(jian)新(xin)配制的(de)培(pei)養(yang)基(ji)來培(pei)養(yang)細(xi)胞。     收(shou)到細(xi)胞後第(di)壹(yi)次傳代建議 1：2 傳代 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳代就(jiu)是 1 個 T25 瓶(ping)傳 2 個(ge) T25 瓶(ping)或者(zhe) 2 個 6cm 皿(min)。不(bu)是 1 個 T25 瓶(ping)傳 2 個(ge)10cm 皿(min)。