細(xi)胞(bao)培養(yang)凍(dong)存(cun)時(shi)的(de)註(zhu)意(yi)事項(xiang)：
1、在(zai)冷凍(dong)保存之(zhi)前(qian)，應(ying)觀(guan)察(cha)細(xi)胞生長(chang)是否良(liang)好(hao)(log phase) 且存(cun)活率高(gao)，凍存(cun)的細胞密度(du)為80 – 90 ％
2、冷凍(dong)前(qian)檢測細胞(bao)是(shi)否保有(you)其(qi)*性質，例如是否有(you)雜(za)細(xi)胞(bao)或者(zhe)支原體(ti)等。
3、 使用的(de)DMSO 應(ying)為試劑(ji)級(ji)等級(ji)，以5~10 ml 小體(ti)積分裝(zhuang)，4 度(du)避(bi)光(guang)保存，勿(wu)作多次解凍(dong)。使用的(de)甘(gan)油(you)也(ye)應為試劑(ji)級(ji)等級(ji)，以高(gao)壓蒸汽(qi)滅(mie)菌(jun)後(hou)避(bi)光(guang)保存。在開啟後(hou)壹(yi)年(nian)內使用，因(yin)長(chang)期(qi)儲存(cun)後(hou)對細(xi)胞會(hui)有(you)毒(du)性。
4、冷凍(dong)保存的細胞(bao)濃(nong)度(du)：
4-1、正常的(de)成纖(xian)維細(xi)胞(bao): 1-3x 10^6 cells/ml
4-2、雜交(jiao)瘤(liu)細胞: 1~3 x 10^6 cells/ml，細(xi)胞濃(nong)度(du)不(bu)要太(tai)高(gao)，某些(xie)雜(za)交(jiao)瘤(liu)會(hui)因(yin)冷凍(dong)濃(nong)度(du)太(tai)高(gao)而在解凍(dong)24 小時(shi)後(hou)。
4-3、貼壁腫瘤細(xi)胞: 1 x 10^6，依細胞(bao)種(zhong)類而異。腺(xian)癌類的細(xi)胞(bao)解凍(dong)後(hou)須較高(gao)之(zhi)濃(nong)度(du)，而HeLa 只需1-3 x 10^6 cells/ml。
4-4、 懸浮細(xi)胞(bao): 5~10 x 10^6 cells/ml, 而淋巴(ba)類細胞(bao)須至少(shao)5 x 10^6 cells/ml。
5、冷凍(dong)保護劑(ji)濃(nong)度(du)為5 %或10 ％ DMSO，若(ruo)是不(bu)確定細胞(bao)之(zhi)冷凍(dong)條件(jian)，在做冷凍(dong)保存之(zhi)同時(shi)，亦(yi)應(ying)作(zuo)壹(yi)個(ge)backup culture，以防止冷凍(dong)失敗(bai)。