內(nei)毒(du)素(su)ELISA檢測(ce)試劑(ji)盒試驗(yan)步驟(zhou)：

　　1、加樣(yang)：分別(bie)設空(kong)白(bai)孔(空(kong)白(bai)對照孔不(bu)加樣(yang)品及(ji)酶標(biao)試劑(ji)，其余(yu)各(ge)步(bu)操(cao)作相同)、標準(zhun)孔、待測(ce)樣(yang)品孔。在(zai)酶標(biao)包(bao)被(bei)板上(shang)標準(zhun)品準確加樣(yang)50μl，待測(ce)樣(yang)品孔中(zhong)先(xian)加樣(yang)品稀釋(shi)液(ye)40μl，然後再(zai)加待測(ce)樣(yang)品10μl（樣品zui終稀(xi)釋(shi)度(du)為(wei)5倍）。加樣(yang)將(jiang)樣品加於(yu)酶標(biao)板(ban)孔底(di)部(bu)，盡量(liang)不(bu)觸(chu)及(ji)孔壁，輕輕晃動(dong)混勻。

　　2、溫(wen)育：用(yong)封(feng)板(ban)膜(mo)封(feng)板(ban)後置(zhi) 37℃溫(wen)育(yu)30分鐘。

　　3、配(pei)液(ye)：將(jiang)30倍濃(nong)縮洗滌(di)液(ye)用蒸(zheng)餾水30倍稀(xi)釋(shi)後備(bei)用(yong)

　　4、洗滌(di)：小(xiao)心揭(jie)掉封(feng)板(ban)膜(mo)，棄去液(ye)體，甩幹，每(mei)孔加滿(man)洗滌(di)液(ye)，靜置(zhi)30秒(miao)後棄去，如(ru)此(ci)重(zhong)復(fu)5次(ci)，拍(pai)幹。

　　5、加酶：每(mei)孔加入(ru)酶標(biao)試劑(ji)50μl，空(kong)白(bai)孔除外(wai)。

　　6、顯色(se)：每(mei)孔先(xian)加入(ru)顯色(se)劑(ji)A50μl，再加入(ru)顯色(se)劑(ji)B50μl，輕輕震蕩(dang)混勻，37℃避(bi)光(guang)顯色(se)10 分鐘.

　　7、終止(zhi)：每(mei)孔加終止(zhi)液(ye)50μl，終止(zhi)反應(ying)(此(ci)時(shi)藍(lan)色立轉黃(huang)色(se))。

　　8、測(ce)定：以空(kong)白(bai)空(kong)調(tiao)零，450nm波(bo)長(chang)依(yi)序(xu)測(ce)量(liang)各(ge)孔的(de)吸光(guang)度(OD值)。測(ce)定應(ying)在(zai)加終止(zhi)液(ye)後15分鐘以內(nei)進行(xing)。
 

　　內(nei)毒素(su)ELISA檢測(ce)試劑(ji)盒試驗(yan)註意(yi)事(shi)項：

　　1．試劑(ji)盒從(cong)冷(leng)藏(zang)環境中(zhong)取出(chu)應(ying)在(zai)室溫(wen)平(ping)衡15-30分鐘後方(fang)可(ke)使用，酶標(biao)包(bao)被(bei)板開(kai)封(feng)後如(ru)未(wei)用完(wan)，板條(tiao)應(ying)裝(zhuang)入密(mi)封(feng)袋(dai)中(zhong)保存(cun)。

　　2．濃(nong)洗滌(di)液(ye)可能(neng)會(hui)有結(jie)晶(jing)析出(chu)，稀(xi)釋(shi)時(shi)可(ke)在(zai)水(shui)浴(yu)中(zhong)加溫(wen)助(zhu)溶(rong)，洗滌(di)時(shi)不(bu)影(ying)響結果。

　　3．各(ge)步(bu)加樣(yang)均(jun)應(ying)使用加樣(yang)器，並經常校對其準確性，以避(bi)免(mian)試驗(yan)誤(wu)差。壹(yi)次(ci)加樣(yang)時間壹(yi)般(ban)控(kong)制在(zai)5分鐘內(nei)，如(ru)標本(ben)數量(liang)多，使用排(pai)槍加樣(yang)。

　　4．請每(mei)次(ci)測(ce)定的(de)同時做(zuo)標準(zhun)曲(qu)線(xian)，壹(yi)般(ban)做(zuo)復孔。如(ru)標本(ben)中(zhong)待測(ce)物(wu)質(zhi)含(han)量(liang)過(guo)高(gao)（樣(yang)本(ben)OD值大(da)於(yu)標準(zhun)品孔孔的(de)OD值），請先(xian)用樣(yang)品稀釋(shi)液(ye)稀釋(shi)壹(yi)定倍(bei)數（n倍(bei)）後再(zai)測(ce)定，計算(suan)時(shi)請後乘(cheng)以總(zong)稀(xi)釋(shi)倍(bei)數(shu)（×n×5）。

　　5．封(feng)板(ban)膜(mo)只(zhi)限(xian)壹(yi)次(ci)性(xing)使用，以避(bi)免(mian)交叉(cha)汙染。

　　6．底物(wu)請避光(guang)保存(cun)。

　　7．嚴格(ge)按(an)照說明書的操(cao)作進行(xing)，試驗(yan)結果(guo)判(pan)定必(bi)須(xu)以酶標(biao)儀(yi)讀(du)數為(wei)準.

　　8．所(suo)有(you)樣品，洗滌(di)液(ye)和(he)各(ge)種(zhong)廢(fei)棄物(wu)都(dou)應(ying)按(an)傳(chuan)染物(wu)處(chu)理。