MCF-7+luc人乳(ru)腺(xian)癌細胞(bao)熒光(guang)素(su)酶(mei)標記(ji)

公(gong)司(si)產品(pin)僅(jin)供(gong)科(ke)研(yan)研(yan)究使(shi)用、不得用於臨(lin)床診斷(duan)！

1、細胞(bao)傳(chuan)代：

1）細胞(bao)生(sheng)長(chang)至覆蓋培養(yang)瓶(ping)的(de) 80%面積時(shi)，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶(ping)中(zhong)的(de)培養(yang)液(ye)，用 PBS 清(qing)洗(xi)細胞(bao)壹(yi)次；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯(xian)微鏡下觀(guan)察(cha)，待細胞(bao)回縮(suo)變圓(yuan)後加(jia)入(ru) 5ml 培養(yang)

液(ye)終止消(xiao)化(hua)，再(zai)輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細胞(bao)使(shi)之(zhi)脫(tuo)落，然後將懸液轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離心管(guan)中(zhong)，1000rpm 離心 5min；

3）棄(qi)上清(qing)，沈澱細胞(bao)用 1-2ml 培養(yang)基(ji)重(zhong)懸(xuan)，然後按 1:2 比例進(jin)行(xing)分瓶(ping)傳(chuan)代，最(zui)後放入(ru) 37℃，5%CO2細胞(bao)

培養(yang)箱中(zhong)培養(yang)；

2、細胞(bao)凍(dong)存(cun)：

1）細胞(bao)生(sheng)長(chang)至覆蓋培養(yang)瓶(ping)的(de) 80%面積時(shi)，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶(ping)中(zhong)的(de)培養(yang)液(ye)，用 PBS 清(qing)洗(xi)細胞(bao)壹(yi)次；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯(xian)微鏡下觀(guan)察(cha)，待細胞(bao)回縮(suo)變圓(yuan)後加(jia)入(ru)培養(yang)液(ye)終

止消(xiao)化(hua)，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細胞(bao)使(shi)之(zhi)脫(tuo)落，然後將懸液轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離心管(guan)中(zhong)，1000rpm 離心 5min；

3）用適量的(de)凍存液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細胞(bao)，並(bing)放置(zhi)於凍存管(guan)中(zhong)；

4）先將細胞(bao)凍(dong)存(cun)管(guan)放置(zhi)於-20℃ 1.5h，然後將其移入(ru)-80℃過(guo)夜，24h 後轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮中(zhong)進(jin)行(xing)長(chang)期保(bao)存(cun)。使用程(cheng)序(xu)

降(jiang)溫盒可直接(jie)放(fang)入(ru)-80℃。

二(er)、細胞(bao)培養(yang)操(cao)作

1) 復(fu)蘇(su)細胞(bao)：以(yi)下細胞(bao)培養(yang)凍(dong)存處理(li)僅(jin)供(gong)參(can)考，具(ju)體(ti)操(cao)作步(bu)驟以(yi)隨(sui)貨(huo)產品(pin)說明書(shu)為(wei)主。將含(han)有1 mL細胞(bao)懸(xuan)液(ye)的(de)凍存管(guan)在(zai) 37℃水浴中(zhong)迅速搖(yao)晃(huang)解凍(dong)，加(jia)4 mL培養(yang)基(ji)混合均勻。在(zai)1000 rpm條件下離心3 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，加(jia)1-2 mL培養(yang)基(ji)後吹(chui)勻。然(ran)後將所(suo)有細胞(bao)懸(xuan)液(ye)加(jia)入(ru)含(han)適量培養(yang)基(ji)的(de)培養(yang)瓶(ping)中(zhong)培養(yang)過(guo)夜（或(huo)將細胞(bao)懸(xuan)液(ye)加(jia)入(ru)10 cm皿(min)中(zhong)，加(jia)入(ru)約(yue)8 mL培養(yang)基(ji)，培養(yang)過(guo)夜）。第二(er)天換(huan)液(ye)並(bing)檢查(zha)細胞(bao)密度。

2) 細胞(bao)傳(chuan)代：如(ru)果細胞(bao)密度達(da) 80%-90%，即(ji)可進(jin)行(xing)傳(chuan)代培養(yang)。

a、棄(qi)去(qu)培養(yang)上(shang)清(qing)，用不含(han)鈣(gai)、鎂離子(zi)的(de)PBS潤洗(xi)細胞(bao)1-2次。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化(hua)液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培養(yang)瓶(ping)中(zhong)，使(shi)消(xiao)化(hua)液(ye)浸潤所(suo)有細胞(bao)，將(jiang)培養(yang)瓶(ping)置(zhi)於37℃培養(yang)箱中(zhong)消(xiao)化(hua)1-2 min（視(shi)細胞(bao)情況而(er)定），然後在(zai)顯微鏡下觀(guan)察(cha)細胞(bao)消(xiao)化(hua)情況，若(ruo)細胞(bao)大(da)部(bu)分變圓並(bing)脫(tuo)落，迅速拿(na)回操(cao)作臺(tai)，輕(qing)敲(qiao)幾(ji)下培養(yang)瓶(ping)後加(jia)2-3ml培養(yang)基(ji)終止消(xiao)化(hua)。輕(qing)輕(qing)打(da)勻(yun)後裝入(ru)無菌離心管(guan)中(zhong)，1000 rpm離心5 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，補(bu)加(jia)1-2 mL培養(yang)液(ye)後吹(chui)勻。

c、將(jiang)細胞(bao)懸(xuan)液(ye)按1:2比例分(fen)到(dao)新(xin)的(de)含8 mL培養(yang)基(ji)的(de)新(xin)皿(min)中(zhong)或(huo)者(zhe)瓶(ping)中(zhong)，置(zhi)於培養(yang)箱中(zhong)培養(yang)。 3) 細胞(bao)凍(dong)存(cun)：待細胞(bao)生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態良好(hao)時(shi)，可進行(xing)細胞(bao)凍(dong)存(cun)。下面 T25 瓶(ping)為例(li)；a、收集(ji)細胞(bao)及(ji)細胞(bao)培養(yang)液(ye)，裝入(ru)無菌離心管(guan)中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件(jian)下離心4 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，用PBS清(qing)洗(xi)壹(yi)遍(bian)，棄(qi)盡PBS，進行(xing)細胞(bao)計(ji)數(shu)。

b、根據(ju)細胞(bao)數(shu)量加(jia)入(ru)無血清(qing)細胞(bao)凍(dong)存(cun)液，使細胞(bao)密度5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混(hun)勻(yun)，每(mei)支凍存管(guan)凍存(cun)1mL細胞(bao)懸(xuan)液(ye)，註意凍存(cun)管(guan)做好(hao)標識。將(jiang)凍(dong)存管(guan)放入(ru)-80℃冰(bing)箱，24 h後轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮灌儲存(cun)。記錄(lu)凍存(cun)管(guan)位置(zhi)以(yi)便(bian)下次拿取(qu)。

三(san)、培養(yang)註(zhu)意事項(xiang) 

1. 收(shou)到(dao)細胞(bao)後首先觀(guan)察(cha)細胞(bao)瓶(ping)是(shi)否(fou)完(wan)好(hao)，培養(yang)液(ye)是(shi)否(fou)有漏液、渾濁(zhuo)等現(xian)象(xiang)，若有上述現象(xiang) 發(fa)生請(qing)及時(shi)和我們(men)聯系(xi)。

2. 仔(zai)細閱讀細胞(bao)說明書(shu)，了(le)解細胞(bao)相(xiang)關信息(xi)，如(ru)細胞(bao)形(xing)態、所(suo)用培養(yang)基(ji)、血清(qing)比(bi)例(li)、所(suo)需(xu) 細胞(bao)因(yin)子(zi)等，確(que)保細胞(bao)培養(yang)條(tiao)件壹致(zhi)，若由於培養(yang)條(tiao)件不壹致(zhi)而導(dao)致(zhi)細胞(bao)出(chu)現(xian)問題，責(ze)任(ren)由 客戶自(zi)行(xing)承(cheng)擔(dan)。

3. 用 75%酒(jiu)精(jing)擦拭(shi)細胞(bao)瓶(ping)表面(mian)，顯(xian)微鏡下觀(guan)察(cha)細胞(bao)狀(zhuang)態。因(yin)運(yun)輸(shu)問題，部分細胞(bao)由於溫度 變(bian)化及(ji)劇烈(lie)碰亡破碎(sui)形(xing)成碎(sui)片(pian)，是(shi)正(zheng)常(chang)現象(xiang)。觀(guan)察(cha)好(hao)細胞(bao)狀(zhuang)態後，75%酒(jiu)精(jing)消(xiao)毒(du)瓶(ping)壁將(jiang) T25 瓶(ping)置(zhi)於 37℃培養(yang)箱放置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁細胞(bao)可(ke)以(yi)消(xiao)化(hua)，懸(xuan)浮(fu)細胞(bao)直接(jie)混(hun)勻收(shou)集(ji)細胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄(qi)上 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新(xin)鮮的(de)培養(yang)基(ji)重(zhong)懸(xuan) 細胞(bao)，並(bing)接(jie)種(zhong)到(dao)新(xin)的(de)培養(yang)瓶(ping)或培養(yang)皿(min)中(zhong)，置(zhi)於培養(yang)箱中(zhong)進(jin)行(xing)培養(yang)。

5. 請(qing)客戶用相同(tong)條件的(de)培養(yang)基(ji)用於細胞(bao)培養(yang)。

6. 建議(yi)客戶收到(dao)細胞(bao)後前(qian) 3 天(tian)各(ge)拍幾(ji)張細胞(bao)照(zhao)片(pian)，記錄(lu)細胞(bao)狀(zhuang)態，便(bian)於和我司技(ji)術(shu)部溝(gou)通 交流。由於運(yun)輸(shu)的(de)原因(yin)，個別(bie)敏感(gan)細胞(bao)會出現不穩定的(de)情況，請(qing)及時(shi)和我們(men)聯系(xi)，告知(zhi)細胞(bao) 的(de)具(ju)體(ti)情況，以(yi)便(bian)我們(men)的(de)技術人員跟(gen)蹤回訪(fang)直至(zhi)問(wen)題解(jie)決。

7. 該細胞(bao)僅(jin)供(gong)科(ke)研(yan)使用。

8. 備註：運(yun)輸(shu)用的(de)培養(yang)基(ji) (灌液培養(yang)基(ji)) 不能再(zai)用來(lai)培養(yang)細胞(bao)，請(qing)換(huan)用按照(zhao)說明書(shu)細胞(bao)培 養(yang)條(tiao)件新(xin)配(pei)制(zhi)的(de)培養(yang)基(ji)來(lai)培養(yang)細胞(bao)。     收(shou)到(dao)細胞(bao)後第壹(yi)次傳(chuan)代建議(yi) 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註(zhu)意：  1:2 傳(chuan)代就(jiu)是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個 T25 瓶(ping)或者(zhe) 2 個 6cm 皿(min)。不是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個10cm 皿(min)。

公司正(zheng)在(zai)出售的(de)產品(pin)：

MURF3： 肌肉(rou)特定環指(zhi)蛋白3抗(kang)體(ti) AsPC-1細胞(bao)，轉(zhuan)移胰(yi)腺(xian)腺(xian)癌細胞(bao) CoC1細胞(bao)耐(nai)藥亞(ya)株,CoC1/DDP細胞(bao) 人非(fei)小(xiao)細胞(bao)肺癌(ai)細胞(bao);NCI-H23

KLK6 Others Human 人 KLK6 / Kallikrein 6 / Neurosin 人細胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽性對(dui)照(zhao)) 大(da)鼠(shu)型受(shou)體(ti)α1(CHRNα1)ELISA試劑(ji)盒 Plant Vitamin D3,VD3  植物維生(sheng)3 96T

EDPF1： 腸細胞(bao)分(fen)化(hua)相關因(yin)子(zi)1抗(kang)體(ti) 人神經束(shu)膜(mo)細胞(bao)RNAHPC miRNA5 μg

Tca-8113人舌(she)鱗(lin)癌(ai)細胞(bao) Tca-8113 human tongue squamous cell carcinoma 1640+10% FBS 大(da)鼠(shu)信號(hao)轉(zhuan)導分(fen)子(zi)7(Smad7)ELISA試(shi)劑(ji)盒 ACV-A (Mouse Activin A)  小(xiao)鼠(shu)活(huo)化素A 96T

RNF62： 環指蛋白62抗(kang)體(ti) TNFRSF1B Others Human 人 TNFRSF1B / TNFR2 / CD120b 人細胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽性對(dui)照(zhao))

HDPTP： His 結構域內(nei)含酪(lao)酸0酸酶(mei)蛋白抗(kang)體(ti) FCGR3A Others Human 人 CD16a / FCGR3A CHO細胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽性對(dui)照(zhao))

人上(shang)皮(pi)細胞(bao)培養(yang)基(ji) 100mL 人復(fu)制(zhi)蛋白A(RPA-70)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 EPEC/E.coli(enteropathogenic E.coli，EPEC) 普(pu)通(tong)大(da)腸(chang)埃希菌菌體(ti)蛋白(非(fei)致(zhi)病性) 1mg

HEAB： 多聚腺苷(gan)酸因(yin)子(zi)Clp1蛋白抗(kang)體(ti) 大(da)額(e)牛(niu)腎(shen)細胞(bao);BFR-K1 骨髓(sui)瘤細胞(bao)，SP2/0細胞(bao) DU145(前(qian)列(lie)腺癌(ai)細胞(bao))

IL27 Others Mouse 小鼠 IL27 / Ierleukin-27 人細胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽性對(dui)照(zhao)) 人復(fu)合前(qian)列(lie)腺特異性抗(kang)原(yuan)(CPSA)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 EphA1 R(Ephrin A1 Receptor) EphA1-R受(shou)體(ti)抗原 0.5mg

heavy chain cardiac Myosin： 心肌肌球蛋白重(zhong)鏈(lian)抗體(ti) CL-0050Caco-2(人結(jie)直腸(chang)腺(xian)癌細胞(bao))5×106cells/瓶(ping)×2

MCF-7+luc人乳(ru)腺(xian)癌細胞(bao)熒光(guang)素(su)酶(mei)標記(ji)PIPOX： 過氧化物酶(mei)肌酸氧化(hua)酶(mei)抗體(ti) 人海(hai)馬星(xing)形(xing)膠質(zhi)細胞(bao)HA-h

VTN Protein Mouse 重(zhong)組小鼠(shu) Vionectin / VTN 蛋白 (His 標簽(qian)) 大(da)鼠(shu)分泌(mi)型卷(juan)曲相(xiang)關蛋白4(SFRP4)ELISA試(shi)劑(ji)盒 INS  大(da)鼠(shu)胰島(dao)素 96T

prox1： prox-1抗體(ti) DIRAS3 Others Human 人 ARHI / DIRAS3 人細胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽性對(dui)照(zhao))

MKN-45 低(di)分化胃(wei)癌(ai) 大(da)鼠(shu)分泌(mi)型卷(juan)曲相(xiang)關蛋白2(SFRP2)ELISA試(shi)劑(ji)盒 gp130(Human glucoprotein 130)  人糖蛋白130 96T

PMP2： 周(zhou)圍(wei)神經髓(sui)鞘蛋白2抗(kang)體(ti) Hs 181.Tes細胞(bao)，正(zheng)常(chang)人細胞(bao) 人癌(ai)細胞(bao),HCC1937細胞(bao) 平(ping)滑(hua)肌細胞(bao)培養(yang)基(ji)SMCM-sf