MDA-KB2人(ren)乳腺細(xi)胞(bao)

公司(si)產(chan)品僅供科研研究(jiu)使(shi)用、不得(de)用(yong)於臨(lin)床(chuang)診(zhen)斷(duan)！

1、細胞(bao)傳代(dai)：

1）細(xi)胞(bao)生長(chang)至覆蓋(gai)培(pei)養瓶的(de) 80%面積時，棄 25cm2培(pei)養瓶中的(de)培養液，用 PBS 清洗(xi)細(xi)胞壹次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消化(hua)液約 1ml 至(zhi)培養瓶中，倒(dao)置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡下觀(guan)察，待細胞回(hui)縮(suo)變(bian)圓(yuan)後(hou)加入(ru) 5ml 培養

液終止(zhi)消(xiao)化(hua)，再輕輕吹打細(xi)胞使(shi)之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然(ran)後(hou)將懸(xuan)液轉移至 15ml 離(li)心(xin)管中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄(qi)上清，沈澱細胞(bao)用 1-2ml 培(pei)養基(ji)重(zhong)懸(xuan)，然(ran)後(hou)按(an) 1:2 比(bi)例(li)進(jin)行分(fen)瓶(ping)傳代(dai)，最(zui)後(hou)放入(ru) 37℃，5%CO2細胞(bao)

培養箱中培(pei)養；

2、細胞凍存(cun)：

1）細(xi)胞(bao)生長(chang)至覆蓋(gai)培(pei)養瓶的(de) 80%面積時，棄 25cm2培(pei)養瓶中的(de)培養液，用 PBS 清洗(xi)細(xi)胞壹次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消化(hua)液約 1ml 至(zhi)培養瓶中，倒(dao)置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡下觀(guan)察，待細胞回(hui)縮(suo)變(bian)圓(yuan)後(hou)加入(ru)培養液終

止(zhi)消(xiao)化(hua)，輕輕吹打細(xi)胞使(shi)之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然(ran)後(hou)將懸(xuan)液轉移至 15ml 離(li)心(xin)管中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用(yong)適量的(de)凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞(bao)，並放置(zhi)於(yu)凍(dong)存管中；

4）先將細(xi)胞(bao)凍存管放置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後(hou)將其(qi)移入(ru)-80℃過夜，24h 後(hou)轉入(ru)液氮中進(jin)行長(chang)期(qi)保(bao)存。使用(yong)程序(xu)

降(jiang)溫盒可直(zhi)接(jie)放(fang)入(ru)-80℃。

二(er)、細胞(bao)培養操作

1) 復(fu)蘇(su)細(xi)胞(bao)：以(yi)下細胞(bao)培(pei)養凍存處理(li)僅供參(can)考，具(ju)體(ti)操作步驟以(yi)隨貨(huo)產(chan)品說明(ming)書為主。將(jiang)含有(you)1 mL細胞(bao)懸液的(de)凍存管在 37℃水(shui)浴中迅(xun)速(su)搖(yao)晃(huang)解(jie)凍(dong)，加(jia)4 mL培(pei)養基(ji)混(hun)合均勻(yun)。在1000 rpm條件下離(li)心(xin)3 min，棄(qi)去(qu)上清液，加1-2 mL培(pei)養基(ji)後(hou)吹勻(yun)。然後(hou)將所(suo)有(you)細胞(bao)懸液加入(ru)含適量培(pei)養基(ji)的(de)培養瓶中培(pei)養過夜（或將細(xi)胞懸液加入(ru)10 cm皿中，加(jia)入(ru)約8 mL培(pei)養基(ji)，培(pei)養過夜）。第(di)二(er)天換(huan)液並檢(jian)查(zha)細(xi)胞密(mi)度(du)。

2) 細胞(bao)傳代(dai)：如(ru)果(guo)細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)達 80%-90%，即(ji)可進(jin)行傳代(dai)培(pei)養。

a、棄去(qu)培養上清，用不含鈣、鎂(mei)離(li)子的(de)PBS潤(run)洗(xi)細(xi)胞1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(pei)養瓶中，使(shi)消(xiao)化(hua)液浸(jin)潤(run)所有(you)細胞(bao)，將培養瓶置(zhi)於(yu)37℃培(pei)養箱中消(xiao)化(hua)1-2 min（視細(xi)胞情(qing)況(kuang)而定(ding)），然(ran)後(hou)在顯(xian)微鏡下觀(guan)察細胞消化(hua)情況(kuang)，若細胞(bao)大(da)部(bu)分(fen)變(bian)圓(yuan)並脫落，迅(xun)速(su)拿回(hui)操(cao)作(zuo)臺，輕敲(qiao)幾(ji)下培養瓶後(hou)加2-3ml培(pei)養基(ji)終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)。輕輕打(da)勻(yun)後(hou)裝(zhuang)入(ru)無菌(jun)離(li)心(xin)管中，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄(qi)去(qu)上清液，補加(jia)1-2 mL培養液後(hou)吹勻(yun)。

c、將細(xi)胞懸液按(an)1:2比(bi)例(li)分到新的(de)含8 mL培(pei)養基(ji)的(de)新皿中或者瓶(ping)中，置(zhi)於(yu)培(pei)養箱中培(pei)養。 3) 細胞凍存(cun)：待(dai)細(xi)胞生長(chang)狀(zhuang)態(tai)良好時，可進(jin)行細(xi)胞(bao)凍(dong)存。下面 T25 瓶(ping)為(wei)例(li)；a、收集細(xi)胞(bao)及(ji)細胞(bao)培養液，裝(zhuang)入(ru)無菌(jun)離(li)心(xin)管中，1000 rpm條件下離(li)心(xin)4 min，棄(qi)去(qu)上清液，用PBS清洗(xi)壹(yi)遍，棄盡PBS，進(jin)行細(xi)胞(bao)計(ji)數。

b、根據(ju)細(xi)胞數量加(jia)入(ru)無血清細胞(bao)凍(dong)存液，使細(xi)胞密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕輕混(hun)勻(yun)，每(mei)支(zhi)凍存(cun)管凍存(cun)1mL細胞(bao)懸(xuan)液，註(zhu)意凍(dong)存(cun)管做(zuo)好標識。將(jiang)凍(dong)存管放入(ru)-80℃冰箱，24 h後(hou)轉入(ru)液氮灌(guan)儲(chu)存。記(ji)錄凍(dong)存管位置(zhi)以(yi)便(bian)下次(ci)拿取。

三(san)、培養註(zhu)意事(shi)項(xiang) 

1. 收(shou)到細胞(bao)後(hou)首(shou)先觀(guan)察細胞瓶是否(fou)完(wan)好(hao)，培(pei)養液是否(fou)有(you)漏液、渾(hun)濁等現(xian)象(xiang)，若有(you)上述現象(xiang) 發生請(qing)及(ji)時和我(wo)們聯系(xi)。

2. 仔細(xi)閱讀(du)細(xi)胞(bao)說明(ming)書，了(le)解(jie)細(xi)胞(bao)相(xiang)關(guan)信息，如(ru)細(xi)胞(bao)形態(tai)、所(suo)用培(pei)養基(ji)、血清比(bi)例(li)、所需(xu) 細胞因(yin)子等，確保(bao)細胞(bao)培養條件壹(yi)致(zhi)，若由於(yu)培養條件不壹致(zhi)而導致(zhi)細胞(bao)出(chu)現(xian)問題(ti)，責(ze)任由(you) 客(ke)戶(hu)自行承(cheng)擔(dan)。

3. 用(yong) 75%酒精擦(ca)拭細(xi)胞瓶(ping)表(biao)面，顯微鏡下觀(guan)察細胞狀(zhuang)態(tai)。因(yin)運(yun)輸問題(ti)，部(bu)分(fen)細(xi)胞(bao)由(you)於(yu)溫度(du) 變(bian)化(hua)及(ji)劇(ju)烈碰亡破(po)碎形成碎片，是正(zheng)常(chang)現(xian)象(xiang)。觀(guan)察好細胞狀(zhuang)態(tai)後(hou)，75%酒精消(xiao)毒瓶壁(bi)將(jiang) T25 瓶置(zhi)於(yu) 37℃培(pei)養箱放置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細(xi)胞可以(yi)消化(hua)，懸浮(fu)細胞(bao)直(zhi)接(jie)混(hun)勻(yun)收集細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄(qi)上 清。加 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用(yong)新(xin)鮮的(de)培養基(ji)重(zhong)懸(xuan) 細(xi)胞(bao)，並接(jie)種(zhong)到新的(de)培養瓶或培養皿中，置(zhi)於(yu)培(pei)養箱中進(jin)行培(pei)養。

5. 請客(ke)戶(hu)用相(xiang)同(tong)條件的(de)培養基(ji)用(yong)於細胞培(pei)養。

6. 建(jian)議客(ke)戶(hu)收到細胞(bao)後(hou)前(qian) 3 天各(ge)拍(pai)幾(ji)張(zhang)細(xi)胞照片，記錄細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)，便(bian)於(yu)和(he)我(wo)司(si)技(ji)術部(bu)溝(gou)通 交(jiao)流(liu)。由(you)於運(yun)輸(shu)的(de)原因(yin)，個別敏(min)感(gan)細胞(bao)會(hui)出(chu)現(xian)不穩(wen)定(ding)的(de)情況(kuang)，請及(ji)時和我(wo)們聯系(xi)，告(gao)知(zhi)細(xi)胞(bao) 的(de)具體(ti)情況(kuang)，以(yi)便(bian)我(wo)們(men)的(de)技(ji)術人員(yuan)跟蹤(zong)回(hui)訪直(zhi)至(zhi)問題(ti)解決。

7. 該(gai)細(xi)胞(bao)僅供科研使(shi)用(yong)。

8. 備註(zhu)：運(yun)輸(shu)用(yong)的(de)培養基(ji) (灌(guan)液培養基(ji)) 不能再(zai)用(yong)來(lai)培養細胞，請換(huan)用按(an)照(zhao)說明(ming)書細胞(bao)培 養條件新(xin)配(pei)制的(de)培養基(ji)來(lai)培養細胞。     收到細胞(bao)後(hou)第壹(yi)次(ci)傳代(dai)建(jian)議 1：2 傳代(dai) 。

9. 註(zhu)意：  1:2 傳代(dai)就(jiu)是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。

公司(si)正(zheng)在出(chu)售(shou)的(de)產品：

IL1RL1 Protein Mouse 重(zhong)組小(xiao)鼠(shu) IL1RL1 / ST2 蛋白 (His 標簽) 大(da)鼠(shu)信號轉導分(fen)子(Smad1)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 AMPK  大(da)鼠(shu)0酸(suan)化(hua)腺苷酸(suan)活化(hua)蛋白激(ji)酶(mei) 96T

Phospho-MKP1 (Ser359)： 0酸(suan)化(hua)原活化(hua)蛋白激(ji)酶(mei)0酸(suan)酶(mei)-1抗(kang)體(ti) KYNU Others Human 人 KYNU / Kynureninase 桿(gan)狀(zhuang)病(bing)毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性(xing)對照)

大(da)鼠(shu)視(shi)網(wang)膜(mo)muller細胞 100mL 大(da)鼠(shu)信號素3A(SEMA3A)ELISA試(shi)劑(ji)盒 hs-CRP (Rabbit high sensitivity C-Reactive Protein)  兔(tu)超(chao)敏(min)C反(fan)應(ying)蛋白 96T

Phospho-MKP1 (Ser296)： 0酸(suan)化(hua)原活化(hua)蛋白激(ji)酶(mei)0酸(suan)酶(mei)-1抗(kang)體(ti) U-2 OS細胞，骨肉(rou)瘤細(xi)胞(bao) 系,KMB-17細胞(bao) 小(xiao)鼠(shu)胚(pei)胎(tai)成纖維(wei)細胞(bao);NIH/3T3

TNFRSF12A Others Human 人 TNFRSF12A / FN14 / TWEAKR 人(ren)細胞(bao)裂解液 (陽性(xing)對照) 大(da)鼠(shu)信號傳導轉錄激(ji)活因(yin)子6(STAT6)ELISA試(shi)劑(ji)盒 Plant Vitamin D,VD  植(zhi)物(wu)維(wei)生 96T

Phospho-HSL (Ser959 + Ser960)： 0酸(suan)化(hua)荷爾(er)蒙(meng)敏感(gan)脂肪(fang)酶(mei)抗(kang)體(ti) 抗(kang)黴菌(jun)溶(rong)液ABAMS

CCL16 Protein Human 重(zhong)組人 CCL16 / HCC-4 / NCC4 蛋白 (His 標簽) 人(ren)風(feng)疹(zhen)病(bing)毒IGM(RV-IgM)ELISA試(shi)劑(ji)盒 MAPK1/ERK3 (Mitogen-activated protein kinase 3; P44MAPK) 原活化(hua)蛋白激(ji)酶(mei)3抗(kang)原 0.5mg

Hho1： HHO1蛋白抗(kang)體(ti) IgG Others Human 人 IgG1 Fc CHO細胞裂解液 (陽性(xing)對照)

人成纖維(wei)細胞(bao)培養基(ji) 100mL 人(ren)酚(fen)(PYD)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 MAPK4(Mitogen-activated protein kinase 4) 原活化(hua)蛋白激(ji)酶(mei)4抗(kang)原 0.5mg

Phospho-HP1 gamma (Ser93)： 0酸(suan)化(hua)染色(se)質相(xiang)關(guan)蛋白1-γ抗(kang)體(ti) 大(da)額(e)牛肺(fei)細胞;BFR-L1 中國(guo)倉(cang)鼠(shu)卵(luan)巢(chao)細胞，CHO細胞(bao) Lncap(前(qian)列腺癌(ai)細(xi)胞(bao))

MDA-KB2人乳(ru)腺細(xi)胞(bao)Prostaglandin E Receptor EP2： 前(qian)列腺素E2受體(ti)2抗(kang)體(ti) 瘤牛(niu)皮膚細胞(bao);BIN-S1

人永(yong)生化(hua)表(biao)皮細胞;HaCaT 人前(qian)列腺上皮細胞培養基(ji) 100mL 大(da)鼠(shu)肺(fei)表(biao)面活性(xing)物(wu)質(zhi)相(xiang)關(guan)蛋白C(SP-C)ELISA試(shi)劑(ji)盒 CG  大(da)鼠(shu)絨(rong)毛(mao)膜(mo) 96T

PSME3： 蛋白酶(mei)體(ti)激活因(yin)子PA28γ抗(kang)體(ti) 人少突膠(jiao)質(zhi)前(qian)體(ti)細胞-貼壁(bi)生長(chang)HOPC

ADIPOQ Protein Mouse 重(zhong)組小(xiao)鼠(shu) Adiponectin / Acrp30 / ADIPOQ 蛋白 (His 標簽) 大(da)鼠(shu)肺(fei)表(biao)面活性(xing)物(wu)質(zhi)相(xiang)關(guan)蛋白C(SP-C)ELISA 試(shi)劑(ji)盒 M-AChR M3(Human music acetylcholine receptor M3)  人(ren)毒蕈堿型(xing)乙酰受體(ti)亞型(xing)M3 96T

phospholamban： 受0蛋白/心(xin)臟0蛋白抗(kang)體(ti) TSPAN31 Others Human 人 TSPAN31 人細胞(bao)裂解液 (陽性(xing)對照)