MDA-MB-435S人黑(hei)素瘤(liu)細(xi)胞

公(gong)司產(chan)品僅供(gong)科(ke)研研(yan)究使(shi)用、不得用於臨(lin)床(chuang)診(zhen)斷(duan)！

1、細(xi)胞傳代(dai)：

1）細胞生長(chang)至覆蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶的(de) 80%面積時(shi)，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的(de)培(pei)養(yang)液，用 PBS 清洗細胞壹(yi)次(ci)；

2）添加 0.25%消化液約(yue) 1ml 至培(pei)養(yang)瓶中，倒置(zhi)顯微鏡(jing)下觀察，待(dai)細(xi)胞回(hui)縮(suo)變圓後加入 5ml 培(pei)養(yang)

液終(zhong)止(zhi)消(xiao)化，再輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細(xi)胞使(shi)之脫落(luo)，然後將懸液轉移(yi)至 15ml 離心(xin)管中，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄上清，沈澱(dian)細(xi)胞用 1-2ml 培(pei)養(yang)基(ji)重懸，然後按(an) 1:2 比例進(jin)行(xing)分瓶傳代(dai)，最後(hou)放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細胞

培(pei)養(yang)箱(xiang)中培(pei)養(yang)；

2、細(xi)胞凍存：

1）細胞生長(chang)至覆蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶的(de) 80%面積時(shi)，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的(de)培(pei)養(yang)液，用 PBS 清洗細胞壹(yi)次(ci)；

2）添加 0.25%消化液約(yue) 1ml 至培(pei)養(yang)瓶中，倒置(zhi)顯微鏡(jing)下觀察，待(dai)細(xi)胞回(hui)縮(suo)變圓後加入培(pei)養(yang)液終(zhong)

止(zhi)消(xiao)化，輕輕(qing)吹(chui)打細(xi)胞使(shi)之脫落(luo)，然後將懸液轉移(yi)至 15ml 離心(xin)管中，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用適(shi)量的(de)凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸細胞，並放(fang)置(zhi)於凍(dong)存管中；

4）先(xian)將細(xi)胞凍存管放(fang)置(zhi)於-20℃ 1.5h，然後將其(qi)移(yi)入-80℃過夜，24h 後轉入(ru)液氮(dan)中進行(xing)長(chang)期(qi)保(bao)存。使(shi)用程序(xu)

降溫(wen)盒(he)可直(zhi)接放(fang)入(ru)-80℃。

二、細(xi)胞培(pei)養(yang)操(cao)作

1) 復蘇細胞：以下細胞培(pei)養(yang)凍(dong)存處(chu)理僅供參考(kao)，具體(ti)操(cao)作步驟以(yi)隨貨(huo)產(chan)品說明書(shu)為(wei)主。將含有(you)1 mL細胞懸液的(de)凍存管在(zai) 37℃水浴中迅速(su)搖晃解(jie)凍，加4 mL培(pei)養(yang)基(ji)混(hun)合均勻。在(zai)1000 rpm條(tiao)件(jian)下離心(xin)3 min，棄去上清液，加1-2 mL培(pei)養(yang)基(ji)後吹(chui)勻。然後將所(suo)有(you)細胞懸液加入含適(shi)量培(pei)養(yang)基(ji)的(de)培(pei)養(yang)瓶中培(pei)養(yang)過夜（或將細(xi)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培(pei)養(yang)基(ji)，培(pei)養(yang)過夜）。第二天(tian)換液並(bing)檢查細胞密度(du)。

2) 細(xi)胞傳代(dai)：如(ru)果(guo)細胞密度(du)達 80%-90%，即(ji)可進(jin)行(xing)傳(chuan)代(dai)培(pei)養(yang)。

a、棄去培(pei)養(yang)上(shang)清(qing)，用不含鈣(gai)、鎂(mei)離子(zi)的(de)PBS潤洗細(xi)胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養(yang)瓶中，使(shi)消化液浸(jin)潤所有(you)細胞，將培(pei)養(yang)瓶置(zhi)於37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)中消化1-2 min（視細胞情況而定），然後在(zai)顯(xian)微鏡(jing)下觀察細(xi)胞消化情況，若細胞大部分變圓並脫落(luo)，迅(xun)速(su)拿回(hui)操(cao)作臺(tai)，輕(qing)敲(qiao)幾下培(pei)養(yang)瓶後加2-3ml培(pei)養(yang)基(ji)終止(zhi)消(xiao)化。輕輕(qing)打(da)勻後(hou)裝(zhuang)入無(wu)菌(jun)離(li)心(xin)管中，1000 rpm離心(xin)5 min，棄去上清液，補(bu)加1-2 mL培(pei)養(yang)液後(hou)吹(chui)勻。

c、將細(xi)胞懸液按(an)1:2比(bi)例分到(dao)新的(de)含8 mL培(pei)養(yang)基(ji)的(de)新皿中或者(zhe)瓶中，置(zhi)於培(pei)養(yang)箱(xiang)中培(pei)養(yang)。 3) 細(xi)胞凍存：待細(xi)胞生長(chang)狀(zhuang)態良好(hao)時，可進(jin)行(xing)細(xi)胞凍存。下面 T25 瓶為例；a、收集細胞及(ji)細(xi)胞培(pei)養(yang)液，裝(zhuang)入(ru)無菌(jun)離(li)心(xin)管中，1000 rpm條(tiao)件(jian)下離心(xin)4 min，棄去上清液，用PBS清洗壹(yi)遍(bian)，棄盡(jin)PBS，進行(xing)細(xi)胞計數(shu)。

b、根(gen)據細(xi)胞數(shu)量加入無血(xue)清細(xi)胞凍存液，使(shi)細胞密度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕混(hun)勻，每支(zhi)凍(dong)存管凍存1mL細胞懸液，註意凍存管做(zuo)好標識(shi)。將凍(dong)存管放(fang)入(ru)-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後轉入(ru)液氮(dan)灌(guan)儲(chu)存。記(ji)錄凍存管位(wei)置(zhi)以便下次拿取(qu)。

三(san)、培(pei)養(yang)註意事(shi)項(xiang) 

1. 收到細胞後首(shou)先(xian)觀察(cha)細胞瓶是否(fou)完好，培(pei)養(yang)液是否(fou)有(you)漏液、渾(hun)濁(zhuo)等現(xian)象(xiang)，若有(you)上述(shu)現(xian)象(xiang) 發(fa)生請及(ji)時(shi)和(he)我(wo)們聯系(xi)。

2. 仔細(xi)閱讀(du)細胞說明書(shu)，了(le)解(jie)細胞相(xiang)關信(xin)息(xi)，如(ru)細胞形(xing)態、所用培(pei)養(yang)基(ji)、血(xue)清比(bi)例、所(suo)需 細(xi)胞因(yin)子(zi)等(deng)，確保細胞培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)壹(yi)致，若由於(yu)培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)不壹(yi)致而導致細胞出(chu)現(xian)問(wen)題，責任(ren)由 客戶自行(xing)承擔。

3. 用 75%酒(jiu)精(jing)擦(ca)拭細胞瓶表面，顯微鏡(jing)下觀察細(xi)胞狀(zhuang)態。因(yin)運(yun)輸問(wen)題(ti)，部分細(xi)胞由於(yu)溫(wen)度(du) 變化及(ji)劇烈(lie)碰(peng)亡破(po)碎(sui)形(xing)成碎(sui)片(pian)，是正常(chang)現(xian)象(xiang)。觀察好(hao)細胞狀(zhuang)態後(hou)，75%酒(jiu)精(jing)消(xiao)毒(du)瓶壁(bi)將 T25 瓶置(zhi)於 37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁(bi)細胞可以(yi)消化，懸浮(fu)細(xi)胞直接(jie)混(hun)勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用新鮮的(de)培(pei)養(yang)基(ji)重懸 細胞，並接(jie)種到(dao)新的(de)培(pei)養(yang)瓶或培(pei)養(yang)皿(min)中，置(zhi)於培(pei)養(yang)箱(xiang)中進行(xing)培(pei)養(yang)。

5. 請客戶用相(xiang)同條(tiao)件(jian)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)用於細胞培(pei)養(yang)。

6. 建(jian)議(yi)客戶收到細胞後前(qian) 3 天各拍幾張細胞照片(pian)，記(ji)錄細胞狀(zhuang)態，便於和(he)我(wo)司技(ji)術(shu)部溝(gou)通 交(jiao)流(liu)。由於(yu)運(yun)輸的(de)原因(yin)，個別(bie)敏感細胞會(hui)出(chu)現(xian)不穩定的(de)情況，請及(ji)時(shi)和(he)我(wo)們聯系(xi)，告知(zhi)細胞 的(de)具體(ti)情(qing)況，以便我(wo)們的(de)技術人(ren)員跟蹤(zong)回(hui)訪(fang)直至問題(ti)解(jie)決。

7. 該細胞僅供(gong)科(ke)研使(shi)用。

8. 備註：運(yun)輸用的(de)培(pei)養(yang)基(ji) (灌(guan)液培(pei)養(yang)基(ji)) 不能再(zai)用來培(pei)養(yang)細(xi)胞，請換用按照說(shuo)明書(shu)細(xi)胞培(pei) 養(yang)條(tiao)件(jian)新配制的(de)培(pei)養(yang)基(ji)來培(pei)養(yang)細(xi)胞。     收到細胞後第壹(yi)次(ci)傳(chuan)代(dai)建(jian)議(yi) 1：2 傳代(dai) 。

9. 註意：  1:2 傳代(dai)就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者(zhe) 2 個 6cm 皿(min)。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿(min)。

公司(si)正在(zai)出(chu)售(shou)的(de)產(chan)品：

CL-0467WPMY-1(人(ren)正常(chang)前(qian)列(lie)腺基(ji)質永生化細胞)5×106cells/瓶×2 大鼠(shu)心(xin)型(xing)脂肪(fang)酸(suan)結合蛋白(bai)(FABP3)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) IAP(Human inhibitor of apoptosis)  人細(xi)胞雕亡抑(yi)制因(yin)子(zi) 96T

Phospho-MYPT1 (Ser507)： 0酸(suan)化肌球(qiu)蛋酸(suan)酶(mei)抗(kang)體(ti) 小(xiao)鼠(shu)B細(xi)胞雜交(jiao)瘤細(xi)胞;W6/32

NCI-H358(人(ren)非(fei)小(xiao)細(xi)胞肺癌(ai)細胞) 5×106cells/瓶×2 PC-12(腎(shen)上(shang)腺嗜(shi)鉻細(xi)胞瘤細(xi)胞) 大鼠(shu)心(xin)肽(ANP)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) BMP-4(Mouse Bone morphogenetic protein 4)  小(xiao)鼠(shu)骨成型(xing)蛋白(bai)4 96T

Phospho-MYPT1 (Ser668)： 0酸(suan)化肌球(qiu)蛋酸(suan)酶(mei)抗(kang)體(ti) 家(jia)貓(mao)肺細(xi)胞;FCA-L1

IL36G Protein Mouse 重(zhong)組小(xiao)鼠(shu) IL36G / IL1F9 蛋白(bai) (His 標簽) 大鼠(shu)心(xin)0脂(zhi)抗(kang)體(ti)IgA(ACA IgA)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) Plant 25-Dihydroxy vitamin D3,HVD3  植(zhi)物25羥(qiang)基(ji)維(wei)生3 96T

Phospho-HSL (Ser660)： 0酸(suan)化荷(he)爾蒙(meng)敏感脂肪(fang)酶(mei)抗體(ti) THY1 Others Mouse 小(xiao)鼠(shu) THY1 / CD90 人(ren)細(xi)胞裂解(jie)液 (陽(yang)性對(dui)照)

犬(quan)腎(shen)細(xi)胞;MDCK/IgR 人肺(fei)表面活性物(wu)質相(xiang)關蛋白(bai)D(SP-D)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) Ezrin/Radixin 埃茲蛋白(bai)(多肽) 0.5mg

HURP： 肝(gan)癌上調(tiao)蛋白(bai)抗(kang)體(ti) EB病(bing)毒(du)轉化的(de)人B淋巴細胞;KM9402

MA-782(小(xiao)鼠(shu)癌(ai)細(xi)胞) 5×106cells/瓶×2 食蟹(xie)猴(hou) / 恒河猴(hou) IL12A & IL12B Heterodimer 人(ren)細胞裂解(jie)液 (陽(yang)性對(dui)照) 人(ren)肺表面活性物(wu)質相(xiang)關蛋白(bai)C(SP-C)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) F1 operon positive regulatory protein(NT) 鼠疫耶爾(er)森(sen)氏菌(jun)F1莢(jia)膜(mo)蛋白(bai)(N端多肽) 0.5mg

Hrasls3： HRAS樣(yang)抑(yi)制因(yin)子(zi)3抗(kang)體(ti) 胎(tai)牛血(xue)清FBS

MDA-MB-435S人(ren)黑素瘤細胞人(ren)腦(nao)瘤(liu)細胞;SF126 大鼠(shu)非(fei)神經元(yuan)性烯醇化酶(NNE)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) trypsin  大鼠(shu) 96T

PDE4D： 0酸(suan)二酯酶4D抗體(ti) 荷(he)蘭黑(hei)白花(hua)奶(nai)牛(niu)牛肺細(xi)胞;DCL1

人(ren)上皮細胞;MCF-10A 人前(qian)列(lie)腺平滑(hua)肌細胞培(pei)養(yang)基(ji) 100mL 大鼠(shu)防(fang)禦(yu)素β1(DEFβ1)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) OXR(Human Orexin receptor)  人食欲素受體(ti) 96T

Profilin 2： 前(qian)纖(xian)維(wei)蛋白(bai)2抗(kang)體(ti) 子(zi)宮(gong)內(nei)膜(mo)上(shang)皮(pi)細胞Many types of cells包(bao)裝：5 × 105次方(1ml)

AIMP1 Protein Human 重(zhong)組人 AIMP1 / EMAP2 / SCYE1 蛋白(bai) (His 標簽) 大鼠(shu)芳香烴(ting)受體(ti)核(he)轉位(wei)因(yin)子(zi)樣(yang)蛋白(bai)(ARL)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) GHRP-Ghrelin(Human growth hormone releasing peptide-Ghrelin)  人生長(chang)激素釋(shi)放(fang)肽ghrelin 96T