786-O細胞

公(gong)司(si)產品僅(jin)供(gong)科研研究使用、不(bu)得(de)用於(yu)臨(lin)床診斷(duan)！

1、細胞傳代：

1）細胞生(sheng)長至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶的(de) 80%面(mian)積(ji)時，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的(de)培(pei)養(yang)液，用 PBS 清(qing)洗(xi)細胞壹次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化(hua)液約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶中，倒(dao)置顯(xian)微鏡下(xia)觀察，待(dai)細胞回(hui)縮(suo)變(bian)圓後加入(ru) 5ml 培(pei)養(yang)

液終止消(xiao)化(hua)，再輕(qing)輕(qing)吹打(da)細胞使之(zhi)脫落(luo)，然(ran)後將懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄(qi)上(shang)清(qing)，沈(chen)澱(dian)細胞用 1-2ml 培(pei)養(yang)基(ji)重(zhong)懸(xuan)，然(ran)後按(an) 1:2 比例進(jin)行(xing)分瓶傳(chuan)代，最後放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細胞

培養(yang)箱(xiang)中培(pei)養(yang)；

壹、商(shang)品介(jie)紹(shao)：

2、細胞凍存(cun)：

1）細胞生(sheng)長至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶的(de) 80%面(mian)積(ji)時，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的(de)培(pei)養(yang)液，用 PBS 清(qing)洗(xi)細胞壹次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化(hua)液約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶中，倒(dao)置顯(xian)微鏡下(xia)觀察，待(dai)細胞回(hui)縮(suo)變(bian)圓後加入(ru)培(pei)養(yang)液終

止消(xiao)化(hua)，輕(qing)輕(qing)吹打(da)細胞使之(zhi)脫落(luo)，然(ran)後將懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用適(shi)量(liang)的(de)凍存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細胞，並(bing)放(fang)置於(yu)凍存(cun)管(guan)中；

4）先(xian)將細胞凍存(cun)管(guan)放(fang)置於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後將其移(yi)入(ru)-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後轉(zhuan)入(ru)液氮中進(jin)行(xing)長期(qi)保存(cun)。使(shi)用程(cheng)序(xu)

降溫(wen)盒可直接(jie)放(fang)入(ru)-80℃。

二、細胞培養(yang)操(cao)作(zuo)

1) 復蘇(su)細胞：以下(xia)細胞培養(yang)凍存(cun)處(chu)理僅供(gong)參考(kao)，具體(ti)操(cao)作(zuo)步驟(zhou)以隨貨(huo)產品說(shuo)明書為主(zhu)。將含有(you)1 mL細胞懸(xuan)液的(de)凍存(cun)管(guan)在 37℃水浴中迅速(su)搖晃解凍，加4 mL培養(yang)基(ji)混合(he)均勻。在(zai)1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離(li)心(xin)3 min，棄(qi)去(qu)上清(qing)液，加1-2 mL培養(yang)基(ji)後吹勻。然(ran)後將所有細胞懸(xuan)液加入(ru)含適(shi)量(liang)培(pei)養(yang)基(ji)的培(pei)養(yang)瓶中培(pei)養(yang)過(guo)夜(ye)（或(huo)將細胞懸(xuan)液加入(ru)10 cm皿中，加入(ru)約(yue)8 mL培養(yang)基(ji)，培養(yang)過(guo)夜(ye)）。第(di)二天(tian)換液並(bing)檢查細胞密度。

2) 細胞傳代：如果細胞密度達(da) 80%-90%，即可(ke)進(jin)行(xing)傳代培養(yang)。

a、棄(qi)去(qu)培養(yang)上(shang)清(qing)，用不(bu)含鈣(gai)、鎂離子的(de)PBS潤(run)洗細胞1-2次。

b、加1 mL消(xiao)化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養(yang)瓶中，使(shi)消(xiao)化(hua)液浸(jin)潤(run)所有細胞，將培養(yang)瓶置於(yu)37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)中消(xiao)化(hua)1-2 min（視細胞情況而(er)定），然(ran)後在(zai)顯微鏡下(xia)觀察細胞消(xiao)化(hua)情況，若(ruo)細胞大部分(fen)變圓並(bing)脫落(luo)，迅速(su)拿回(hui)操(cao)作(zuo)臺，輕(qing)敲(qiao)幾下(xia)培(pei)養(yang)瓶後加2-3ml培養(yang)基(ji)終止消(xiao)化(hua)。輕(qing)輕(qing)打(da)勻(yun)後裝入(ru)無(wu)菌離(li)心管(guan)中，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄(qi)去(qu)上清(qing)液，補(bu)加1-2 mL培養(yang)液後吹勻。

c、將細胞懸(xuan)液按(an)1:2比例分到新的(de)含8 mL培(pei)養(yang)基(ji)的新(xin)皿中或(huo)者(zhe)瓶中，置於(yu)培(pei)養(yang)箱(xiang)中培(pei)養(yang)。 3) 細胞凍存(cun)：待(dai)細胞生(sheng)長狀態(tai)良好(hao)時，可進(jin)行(xing)細胞凍存(cun)。下(xia)面(mian) T25 瓶為例；a、收集細胞及細胞培養(yang)液，裝入(ru)無(wu)菌離(li)心管(guan)中，1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離(li)心(xin)4 min，棄(qi)去(qu)上清(qing)液，用PBS清(qing)洗(xi)壹遍，棄(qi)盡PBS，進(jin)行(xing)細胞計數(shu)。

b、根據細胞數量(liang)加入(ru)無(wu)血清(qing)細胞凍存(cun)液，使(shi)細胞密度5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混勻(yun)，每支(zhi)凍存(cun)管(guan)凍存(cun)1mL細胞懸(xuan)液，註(zhu)意(yi)凍存(cun)管(guan)做好(hao)標識。將凍存(cun)管(guan)放(fang)入(ru)-80℃冰箱(xiang)，24 h後轉(zhuan)入(ru)液氮灌儲(chu)存(cun)。記(ji)錄凍存(cun)管(guan)位置以(yi)便(bian)下(xia)次(ci)拿取(qu)。

公(gong)司(si)正(zheng)在(zai)出(chu)售的產品：

血(xue)清(qing)脊(ji)髓過氧(yang)化(hua)酶(mei)（MPO）活(huo)性(xing)高(gao)質(zhi)敏感(gan)比(bi)色(se)法(fa)定量檢測試(shi)劑盒

電泳(yong)分析試劑(ji)盒

通(tong)用型(xing)HSV1（HERPES SIMPLX1）病(bing)毒(du)定性(xing)檢測試(shi)劑盒

冰凍切片(pian)組(zu)織CASPASE-3蛋白(bai)表達(da)NBT顯(xian)色光(guang)學顯微鏡檢測試(shi)劑盒

通(tong)用型(xing)A含量(liang)比(bi)色法(fa)定量檢測試(shi)劑盒

免(mian)疫細胞化(hua)學AP酶(mei)聯NBT/BCIP直接(jie)檢測試(shi)劑盒（含AP壹(yi)抗）

組(zu)織SGK1激(ji)酶(mei)活(huo)性(xing)定量檢測試(shi)劑盒（A/B/C）

全組(zu)織衰(shuai)老(lao)特(te)異性(xing)早期(qi)脂褐(he)素(su)蘇(su)丹黑(hei)原位(wei)染色試劑盒

尿液壹(yi)氧(yang)化(hua)氮合(he)成(cheng)酶(mei)總(zong)活(huo)性(xing)酶(mei)動(dong)力(li)比色(se)法(fa)定量檢測試(shi)劑盒

組(zu)織中鏈(lian)脂酰脫氫酶(mei)（ACYL COA DEHYDROGENASE）活(huo)性(xing)比色(se)法(fa)定量檢測試(shi)劑盒

細胞樣(yang)品氧(yang)化(hua)酶(mei)表(biao)達(da)比色(se)法(fa)定量檢測試(shi)劑盒

正(zheng)常(chang)大鼠(shu)（Sprague Dawley）肺(fei)組(zu)織微粒體(ti)組(zu)分（5毫克(ke)/毫升(sheng)）

冰凍切片(pian)組(zu)織線(xian)粒體(ti)復合(he)物(wu)II蛋白(bai)表達(da)NBT顯(xian)色光(guang)學顯微鏡檢測試(shi)劑盒

血(xue)液樣(yang)品組(zu)織B（CATHEPSIN B）活(huo)性(xing)比色(se)法(fa)定量檢測試(shi)劑盒

Hanks鈣(gai)鎂平衡鹽(yan)緩沖溶(rong)液（HBSS）

原(yuan)鈣粘附(fu)蛋白(bai)11X抗(kang)體(ti)

鈣(gai)和整(zheng)合(he)素(su)結合(he)蛋白(bai)4抗(kang)體(ti)

抗(kang)體(ti)

IGFBP2結(jie)合(he)蛋白(bai)/遷移(yi)和(he)侵(qin)潤(run)抑制蛋白(bai)抗體(ti)

細胞表面(mian)趨化(hua)因(yin)子受(shou)體(ti)2抗(kang)體(ti)

ULK3單(dan)克隆抗(kang)體(ti)

顆(ke)粒酶(mei)K抗(kang)體(ti)

786-O細胞APC-Cy7標記(ji)人IFN-γ單(dan)克隆抗(kang)體(ti)

鋅指蛋白(bai)653抗體(ti)

三、培養(yang)註(zhu)意(yi)事項(xiang) 

1. 收(shou)到細胞後首(shou)先觀察細胞瓶是(shi)否完好(hao)，培(pei)養(yang)液是(shi)否有漏液、渾濁等現象，若(ruo)有(you)上述(shu)現象 發(fa)生(sheng)請及時和我們(men)聯系(xi)。

2. 仔細閱讀(du)細胞說(shuo)明書，了(le)解(jie)細胞相關(guan)信息，如細胞形(xing)態(tai)、所用培(pei)養(yang)基(ji)、血清(qing)比(bi)例、所需 細胞因(yin)子等，確保細胞培養(yang)條(tiao)件(jian)壹(yi)致，若由於(yu)培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)不(bu)壹(yi)致而(er)導致細胞出現(xian)問題(ti)，責(ze)任由 客戶自(zi)行(xing)承擔。

3. 用 75%酒精擦(ca)拭細胞瓶表(biao)面(mian)，顯(xian)微鏡下(xia)觀察細胞狀態(tai)。因(yin)運輸問題(ti)，部分(fen)細胞由於(yu)溫(wen)度 變化(hua)及劇烈(lie)碰亡(wang)破碎形(xing)成(cheng)碎片(pian)，是正(zheng)常(chang)現(xian)象。觀察好(hao)細胞狀態(tai)後，75%酒精消(xiao)毒(du)瓶壁(bi)將 T25 瓶置於(yu) 37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)放(fang)置 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細胞可以(yi)消(xiao)化(hua)，懸(xuan)浮(fu)細胞直接(jie)混(hun)勻收(shou)集細胞，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄(qi)上(shang) 清(qing)。加 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用新(xin)鮮(xian)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)重(zhong)懸(xuan) 細胞，並(bing)接種(zhong)到新的(de)培(pei)養(yang)瓶或(huo)培(pei)養(yang)皿中，置於(yu)培(pei)養(yang)箱(xiang)中進(jin)行(xing)培養(yang)。

5. 請(qing)客戶用相同條(tiao)件(jian)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)用於(yu)細胞培養(yang)。

6. 建議(yi)客戶收(shou)到細胞後前(qian) 3 天(tian)各拍(pai)幾張(zhang)細胞照(zhao)片，記(ji)錄細胞狀態(tai)，便於(yu)和(he)我司技(ji)術部溝通(tong) 交(jiao)流。由於(yu)運(yun)輸的原(yuan)因(yin)，個別(bie)敏感(gan)細胞會(hui)出現不(bu)穩(wen)定的情(qing)況，請(qing)及時和我們(men)聯系(xi)，告知(zhi)細胞 的具體(ti)情(qing)況，以(yi)便(bian)我們(men)的技(ji)術人(ren)員(yuan)跟(gen)蹤回(hui)訪(fang)直至(zhi)問題(ti)解決。

7. 該(gai)細胞僅供(gong)科研使用。

8. 備(bei)註(zhu)：運輸用的(de)培(pei)養(yang)基(ji) (灌液培(pei)養(yang)基(ji)) 不能再用來(lai)培(pei)養(yang)細胞，請換用按(an)照(zhao)說(shuo)明書細胞培 養(yang)條(tiao)件(jian)新(xin)配(pei)制的培養(yang)基(ji)來培(pei)養(yang)細胞。     收到細胞後第(di)壹次傳代建議(yi) 1：2 傳代 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳代就是(shi) 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶或(huo)者(zhe) 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿。