59M細胞

公司(si)產(chan)品(pin)僅供(gong)科(ke)研(yan)研究使用、不(bu)得用於(yu)臨(lin)床(chuang)診(zhen)斷(duan)！

1、細胞傳代(dai)：

1）細胞生(sheng)長(chang)至覆(fu)蓋(gai)培養瓶(ping)的(de) 80%面積時，棄(qi) 25cm2培養瓶(ping)中(zhong)的(de)培養液(ye)，用(yong) PBS 清洗細胞壹次；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至培養瓶(ping)中(zhong)，倒置顯微鏡(jing)下觀(guan)察，待(dai)細胞回縮(suo)變(bian)圓(yuan)後(hou)加入 5ml 培養

液(ye)終(zhong)止消(xiao)化(hua)，再(zai)輕(qing)輕(qing)吹(chui)打(da)細胞使之脫落，然(ran)後(hou)將懸(xuan)液(ye)轉移(yi)至 15ml 離(li)心管中，1000rpm 離(li)心 5min；

3）棄上(shang)清，沈澱細(xi)胞用 1-2ml 培養基(ji)重懸(xuan)，然(ran)後(hou)按 1:2 比例(li)進(jin)行(xing)分(fen)瓶(ping)傳(chuan)代(dai)，最後(hou)放入 37℃，5%CO2細(xi)胞

培養箱(xiang)中(zhong)培養；

壹、商品介紹：

2、細(xi)胞凍存(cun)：

1）細(xi)胞生(sheng)長(chang)至覆(fu)蓋(gai)培養瓶(ping)的(de) 80%面積時，棄(qi) 25cm2培養瓶(ping)中(zhong)的(de)培養液(ye)，用(yong) PBS 清洗細胞壹次；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至培養瓶(ping)中(zhong)，倒置顯微鏡(jing)下觀(guan)察，待(dai)細胞回縮(suo)變(bian)圓(yuan)後(hou)加入培養液(ye)終(zhong)

止消(xiao)化(hua)，輕(qing)輕吹(chui)打(da)細胞使之脫落，然(ran)後(hou)將懸(xuan)液(ye)轉移(yi)至 15ml 離(li)心管中，1000rpm 離(li)心 5min；

3）用適量(liang)的凍(dong)存(cun)液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細(xi)胞，並(bing)放(fang)置於凍(dong)存(cun)管(guan)中；

4）先(xian)將細胞凍存(cun)管(guan)放置於-20℃ 1.5h，然(ran)後(hou)將其移(yi)入-80℃過夜(ye)，24h 後(hou)轉入液(ye)氮(dan)中(zhong)進(jin)行(xing)長(chang)期保存(cun)。使用程(cheng)序(xu)

降(jiang)溫(wen)盒可(ke)直(zhi)接(jie)放入-80℃。

二(er)、細(xi)胞培養操(cao)作

1) 復蘇細胞：以下細(xi)胞培養凍(dong)存(cun)處(chu)理(li)僅供(gong)參考(kao)，具體操(cao)作步(bu)驟(zhou)以隨(sui)貨產(chan)品(pin)說明(ming)書為(wei)主(zhu)。將含有(you)1 mL細胞懸(xuan)液(ye)的凍存(cun)管(guan)在(zai) 37℃水(shui)浴(yu)中迅(xun)速(su)搖(yao)晃解(jie)凍，加4 mL培養基(ji)混(hun)合(he)均勻。在(zai)1000 rpm條(tiao)件(jian)下離(li)心3 min，棄去上(shang)清液(ye)，加(jia)1-2 mL培養基(ji)後(hou)吹(chui)勻。然(ran)後(hou)將所(suo)有(you)細胞懸(xuan)液(ye)加入含(han)適量(liang)培養基(ji)的培養瓶(ping)中(zhong)培養過夜(ye)（或將細胞懸(xuan)液(ye)加入10 cm皿(min)中，加入約(yue)8 mL培養基(ji)，培養過夜(ye)）。第(di)二(er)天換(huan)液(ye)並(bing)檢(jian)查(zha)細(xi)胞密度(du)。

2) 細(xi)胞傳代(dai)：如果細胞密度(du)達 80%-90%，即可進(jin)行(xing)傳代(dai)培養。

a、棄(qi)去培養上(shang)清，用(yong)不(bu)含鈣、鎂(mei)離子(zi)的PBS潤(run)洗細胞1-2次。

b、加1 mL消(xiao)化(hua)液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培養瓶(ping)中(zhong)，使消化(hua)液(ye)浸潤(run)所(suo)有(you)細胞，將培養瓶(ping)置於37℃培養箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化(hua)1-2 min（視細(xi)胞情況(kuang)而(er)定(ding)），然(ran)後(hou)在(zai)顯微鏡(jing)下觀(guan)察細(xi)胞消化(hua)情況(kuang)，若細胞大(da)部(bu)分(fen)變(bian)圓(yuan)並(bing)脫(tuo)落，迅(xun)速(su)拿(na)回操作臺(tai)，輕敲(qiao)幾下培養瓶(ping)後(hou)加2-3ml培養基(ji)終(zhong)止消(xiao)化(hua)。輕(qing)輕打(da)勻後(hou)裝入無菌(jun)離心管中，1000 rpm離(li)心5 min，棄去上(shang)清液(ye)，補(bu)加1-2 mL培養液(ye)後(hou)吹(chui)勻。

c、將細胞懸(xuan)液(ye)按1:2比例(li)分(fen)到(dao)新(xin)的含8 mL培養基(ji)的新(xin)皿中或(huo)者(zhe)瓶(ping)中(zhong)，置於培養箱(xiang)中(zhong)培養。 3) 細(xi)胞凍存(cun)：待(dai)細胞生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態(tai)良好(hao)時，可(ke)進(jin)行(xing)細胞凍存(cun)。下面 T25 瓶(ping)為(wei)例(li)；a、收集細胞及細胞培養液(ye)，裝(zhuang)入無菌(jun)離心管中，1000 rpm條(tiao)件(jian)下離(li)心4 min，棄去上(shang)清液(ye)，用(yong)PBS清洗壹遍(bian)，棄盡(jin)PBS，進(jin)行(xing)細胞計(ji)數。

b、根據細(xi)胞數量(liang)加入無血(xue)清細(xi)胞凍存(cun)液(ye)，使細胞密度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕混(hun)勻(yun)，每(mei)支凍存(cun)管(guan)凍存(cun)1mL細(xi)胞懸(xuan)液(ye)，註意(yi)凍存(cun)管(guan)做好(hao)標識。將凍存(cun)管(guan)放入-80℃冰(bing)箱，24 h後(hou)轉入液(ye)氮(dan)灌(guan)儲(chu)存(cun)。記(ji)錄凍(dong)存(cun)管(guan)位置以便(bian)下次(ci)拿(na)取(qu)。

公司(si)正(zheng)在(zai)出(chu)售(shou)的(de)產(chan)品(pin)：

體(ti)液(ye)脊(ji)髓(sui)過氧化(hua)酶(mei)（MPO）活(huo)性(xing)高(gao)質(zhi)敏感比色(se)法定(ding)量(liang)檢測試(shi)劑盒

晝(zhou)夜(ye)節律（circadian rhythm）通(tong)路(lu)分(fen)析(xi)檢測試(shi)劑專題

組織HSV（HERPES SIMPLX）病(bing)毒(du)定(ding)量(liang)PCR擴(kuo)增檢(jian)測試(shi)劑盒

冰(bing)凍切(qie)片組織CASPASE-3蛋(dan)白(bai)表達熒(ying)光(guang)顯微鏡(jing)檢(jian)測試(shi)劑盒

氟元素待測樣(yang)品處(chu)理(li)試(shi)劑盒

免(mian)疫(yi)細(xi)胞化(hua)學(xue)AP酶(mei)聯(lian)NBT/BCIP基(ji)礎(chu)檢測試(shi)劑盒（無壹抗和(he)二(er)抗(kang)）

細(xi)胞S6 KINASE激(ji)酶(mei)活(huo)性定(ding)量(liang)檢測試(shi)劑盒（A/B/C）

石(shi)蠟(la)切(qie)片組織衰老特異(yi)性(xing)脂(zhi)褐素靛酚(fen)原(yuan)位(wei)直接(jie)染(ran)色(se)試(shi)劑盒

細(xi)胞壹氧化(hua)氮(dan)合(he)成酶(mei)總(zong)活性(xing)酶動(dong)力(li)比色(se)法定(ding)量(liang)檢測試(shi)劑盒

細(xi)胞超長(chang)鏈(lian)脂(zhi)酰脫(tuo)氫酶(mei)（ACYL COA DEHYDROGENASE）活(huo)性(xing)比色(se)法定(ding)量(liang)檢測試(shi)劑盒

細(xi)胞樣(yang)品氧化(hua)酶(mei)表達免(mian)疫(yi)組織化(hua)學(xue)檢測試(shi)劑盒

正(zheng)常(chang)人(ren)體腸組織微粒體(ti)組分(fen)（5毫(hao)克/毫(hao)升）

冰(bing)凍切(qie)片組織線(xian)粒體(ti)復(fu)合(he)物(wu)II蛋(dan)白(bai)表達熒(ying)光(guang)顯微鏡(jing)檢(jian)測試(shi)劑盒

組織樣(yang)品組織K（CATHEPSIN K）活(huo)性(xing)比色(se)法定(ding)量(liang)檢測試(shi)劑盒

胰（0.25%）乙(yi)二(er)胺(an)四混(hun)合(he)液

原(yuan)鈣(gai)粘蛋(dan)白(bai)γC5抗(kang)體(ti)

鈣(gai)反(fan)應因(yin)子(zi)抗體(ti)

羥類固(gu)醇(chun)脫氫酶(mei)17β抗(kang)體(ti)

IAH1蛋(dan)白(bai)抗體(ti)

細(xi)胞表面趨化(hua)因(yin)子(zi)受體(ti)10抗(kang)體(ti)

UL16結(jie)合(he)蛋(dan)白(bai)1蛋(dan)白(bai)抗體(ti)

顆(ke)粒酶(mei)A抗(kang)體(ti)

59M細(xi)胞APC-Cy7標(biao)記(ji)人(ren)CD69單克隆(long)抗體

鋅指蛋(dan)白(bai)64抗體(ti)

三(san)、培養註意(yi)事(shi)項(xiang) 

1. 收到(dao)細(xi)胞後(hou)首先(xian)觀(guan)察細(xi)胞瓶(ping)是(shi)否(fou)完(wan)好(hao)，培養液(ye)是(shi)否(fou)有(you)漏(lou)液(ye)、渾(hun)濁等現(xian)象(xiang)，若有(you)上(shang)述現象(xiang) 發生(sheng)請(qing)及時和(he)我們(men)聯系(xi)。

2. 仔(zai)細閱(yue)讀(du)細胞說明(ming)書，了(le)解(jie)細胞相關信息，如(ru)細(xi)胞形態(tai)、所(suo)用(yong)培養基(ji)、血清比例(li)、所(suo)需 細胞因(yin)子(zi)等，確(que)保細胞培養條(tiao)件(jian)壹致，若由於培養條(tiao)件(jian)不(bu)壹致而(er)導致細(xi)胞出(chu)現問題(ti)，責(ze)任(ren)由(you) 客(ke)戶(hu)自行(xing)承擔。

3. 用(yong) 75%酒精(jing)擦(ca)拭(shi)細(xi)胞瓶(ping)表(biao)面，顯微鏡(jing)下觀(guan)察細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)。因(yin)運輸問題(ti)，部(bu)分(fen)細(xi)胞由於溫(wen)度(du) 變(bian)化(hua)及(ji)劇(ju)烈(lie)碰(peng)亡破(po)碎形成(cheng)碎片，是(shi)正(zheng)常現象。觀(guan)察好(hao)細胞狀(zhuang)態(tai)後(hou)，75%酒精(jing)消(xiao)毒(du)瓶(ping)壁(bi)將 T25 瓶(ping)置於 37℃培養箱(xiang)放(fang)置 2-4h。

4. 貼(tie)壁細(xi)胞可以消(xiao)化(hua)，懸(xuan)浮(fu)細胞直接(jie)混(hun)勻(yun)收集細胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上(shang) 清。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，用新(xin)鮮的培養基(ji)重懸(xuan) 細(xi)胞，並(bing)接(jie)種到(dao)新(xin)的培養瓶(ping)或(huo)培養皿(min)中(zhong)，置於培養箱(xiang)中(zhong)進(jin)行(xing)培養。

5. 請(qing)客(ke)戶(hu)用相同條(tiao)件(jian)的培養基(ji)用於(yu)細(xi)胞培養。

6. 建(jian)議(yi)客(ke)戶(hu)收到(dao)細(xi)胞後(hou)前 3 天各拍幾張(zhang)細(xi)胞照片，記(ji)錄細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)，便於(yu)和(he)我司(si)技(ji)術(shu)部(bu)溝(gou)通(tong) 交流。由(you)於運輸的原(yuan)因(yin)，個(ge)別(bie)敏感細胞會出(chu)現不(bu)穩定(ding)的情況(kuang)，請(qing)及時和(he)我們(men)聯系(xi)，告(gao)知(zhi)細(xi)胞 的具體情況(kuang)，以(yi)便(bian)我們(men)的技(ji)術(shu)人(ren)員(yuan)跟(gen)蹤回訪(fang)直至問題(ti)解(jie)決。

7. 該(gai)細(xi)胞僅供(gong)科(ke)研(yan)使用。

8. 備註：運輸用的(de)培養基(ji) (灌液(ye)培養基(ji)) 不(bu)能再(zai)用(yong)來(lai)培養細(xi)胞，請(qing)換用(yong)按照說明(ming)書細(xi)胞培 養條(tiao)件(jian)新(xin)配制的(de)培養基(ji)來(lai)培養細(xi)胞。     收到(dao)細(xi)胞後(hou)第(di)壹次傳代(dai)建(jian)議(yi) 1：2 傳代(dai) 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳代(dai)就(jiu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶(ping)或(huo)者(zhe) 2 個 6cm 皿(min)。不(bu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿。