B16-F1細胞(bao)

公(gong)司(si)產(chan)品僅(jin)供科(ke)研(yan)研(yan)究使用、不得(de)用於(yu)臨床診(zhen)斷(duan)！

1、細胞(bao)傳(chuan)代(dai)：

1）細胞(bao)生(sheng)長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培(pei)養瓶(ping)的 80%面積(ji)時，棄(qi) 25cm2培(pei)養瓶(ping)中(zhong)的培養液(ye)，用 PBS 清洗細胞(bao)壹次；

2）添加 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯微鏡下(xia)觀察(cha)，待細胞(bao)回縮變圓(yuan)後加入 5ml 培養

液(ye)終止消(xiao)化(hua)，再輕輕(qing)吹(chui)打細胞(bao)使之脫(tuo)落(luo)，然(ran)後將(jiang)懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄(qi)上(shang)清，沈澱細胞(bao)用 1-2ml 培養基(ji)重懸(xuan)，然(ran)後按(an) 1:2 比例進行(xing)分瓶(ping)傳代，最後放(fang)入 37℃，5%CO2細胞(bao)

培(pei)養箱(xiang)中(zhong)培(pei)養；

壹、商(shang)品介(jie)紹(shao)：

2、細胞(bao)凍存(cun)：

1）細胞(bao)生(sheng)長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培(pei)養瓶(ping)的 80%面積(ji)時，棄(qi) 25cm2培(pei)養瓶(ping)中(zhong)的培養液(ye)，用 PBS 清洗細胞(bao)壹次；

2）添加 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯微鏡下(xia)觀察(cha)，待細胞(bao)回縮變圓(yuan)後加入培養液(ye)終

止消(xiao)化(hua)，輕輕吹(chui)打細胞(bao)使之脫(tuo)落(luo)，然(ran)後將(jiang)懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用適量(liang)的凍存(cun)液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細胞(bao)，並(bing)放(fang)置(zhi)於(yu)凍存(cun)管(guan)中(zhong)；

4）先將(jiang)細胞(bao)凍存(cun)管(guan)放(fang)置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後將(jiang)其(qi)移入-80℃過夜(ye)，24h 後(hou)轉入液(ye)氮(dan)中(zhong)進行(xing)長(chang)期保(bao)存。使用程序

降溫(wen)盒可(ke)直接(jie)放(fang)入-80℃。

二、細胞(bao)培(pei)養操作

1) 復蘇(su)細胞(bao)：以(yi)下(xia)細胞(bao)培(pei)養凍存(cun)處(chu)理(li)僅(jin)供參考(kao)，具體(ti)操作步(bu)驟(zhou)以(yi)隨(sui)貨(huo)產(chan)品說明書為主(zhu)。將(jiang)含有(you)1 mL細胞(bao)懸(xuan)液(ye)的凍存(cun)管(guan)在 37℃水(shui)浴中(zhong)迅(xun)速(su)搖晃解(jie)凍，加(jia)4 mL培(pei)養基(ji)混(hun)合均(jun)勻。在1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離(li)心(xin)3 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清液(ye)，加(jia)1-2 mL培養基(ji)後(hou)吹(chui)勻(yun)。然(ran)後將(jiang)所(suo)有(you)細胞(bao)懸(xuan)液(ye)加(jia)入含適量(liang)培養基(ji)的培養瓶(ping)中(zhong)培(pei)養過(guo)夜(ye)（或(huo)將(jiang)細胞(bao)懸(xuan)液(ye)加(jia)入10 cm皿中(zhong)，加(jia)入約(yue)8 mL培養基(ji)，培(pei)養過(guo)夜(ye)）。第(di)二天換液(ye)並(bing)檢查(zha)細胞(bao)密(mi)度。

2) 細胞(bao)傳(chuan)代(dai)：如(ru)果(guo)細胞(bao)密(mi)度達 80%-90%，即(ji)可(ke)進行(xing)傳代(dai)培養。

a、棄(qi)去(qu)培(pei)養上(shang)清，用不含鈣(gai)、鎂離(li)子(zi)的PBS潤(run)洗細胞(bao)1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化(hua)液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，使消(xiao)化(hua)液(ye)浸(jin)潤(run)所有(you)細胞(bao)，將(jiang)培(pei)養瓶(ping)置(zhi)於(yu)37℃培(pei)養箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化(hua)1-2 min（視細胞(bao)情(qing)況而定），然(ran)後在顯微鏡下(xia)觀察(cha)細胞(bao)消(xiao)化(hua)情況，若細胞(bao)大部分變(bian)圓(yuan)並(bing)脫落(luo)，迅(xun)速拿回操作臺(tai)，輕(qing)敲幾下(xia)培(pei)養瓶(ping)後(hou)加2-3ml培(pei)養基(ji)終止消(xiao)化(hua)。輕輕打勻後裝入無菌離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清液(ye)，補(bu)加1-2 mL培養液(ye)後(hou)吹(chui)勻(yun)。

c、將(jiang)細胞(bao)懸(xuan)液(ye)按(an)1:2比例分到新的含8 mL培養基(ji)的新皿中(zhong)或(huo)者(zhe)瓶(ping)中(zhong)，置(zhi)於(yu)培(pei)養箱(xiang)中(zhong)培(pei)養。 3) 細胞(bao)凍存(cun)：待(dai)細胞(bao)生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態良好時，可進行(xing)細胞(bao)凍存(cun)。下(xia)面 T25 瓶(ping)為(wei)例；a、收集細胞(bao)及細胞(bao)培(pei)養液(ye)，裝(zhuang)入無菌離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離(li)心(xin)4 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清液(ye)，用PBS清洗壹遍，棄(qi)盡(jin)PBS，進行(xing)細胞(bao)計數。

b、根據細胞(bao)數量(liang)加入無血清(qing)細胞(bao)凍存(cun)液(ye)，使細胞(bao)密(mi)度5×106~1×107/mL，輕輕(qing)混勻，每(mei)支(zhi)凍存(cun)管(guan)凍存(cun)1mL細胞(bao)懸(xuan)液(ye)，註(zhu)意(yi)凍存(cun)管(guan)做(zuo)好標(biao)識(shi)。將(jiang)凍存(cun)管(guan)放(fang)入-80℃冰箱(xiang)，24 h後(hou)轉入液(ye)氮(dan)灌儲(chu)存。記錄(lu)凍存(cun)管(guan)位(wei)置(zhi)以便下(xia)次(ci)拿取(qu)。

公(gong)司(si)正(zheng)在出(chu)售(shou)的產(chan)品：

血液(ye)結構(gou)型(xing)神(shen)經(jing)元(yuan)壹氧化(hua)氮(dan)合成酶(mei)（cNOS/NOS1/nNOS）活(huo)性(xing)比色(se)法(fa)定(ding)量(liang)檢測(ce)試劑盒

組織(zhi)可(ke)溶(rong)性(xing)總(zong)蛋白制備(bei)試(shi)劑盒

組織(zhi)VZV（VARICELLA ZOSTER）病毒(du)定量(liang)PCR擴(kuo)增檢(jian)測(ce)試劑盒

石(shi)蠟(la)切(qie)片(pian)組織(zhi)CASPASE-8蛋白表(biao)達(da)熒光(guang)顯微鏡檢(jian)測(ce)試劑盒

酵母B1高(gao)效液(ye)相(xiang)色譜(pu)法(fa)定(ding)量(liang)檢測(ce)試劑盒

TEM電(dian)鏡冰凍切(qie)片(pian)免疫組織(zhi)化(hua)學HRP酶(mei)聯DAB基(ji)礎檢測(ce)試劑盒

組織(zhi)CSK激酶(mei)活性(xing)定量(liang)檢測(ce)試劑盒（A/B/C）

冰凍切(qie)片(pian)組織(zhi)衰(shuai)老特異(yi)性(xing)晚期脂褐素鐵還(hai)原(yuan)法

體(ti)液(ye)羥(qiang)脯(pu)（HYP）比(bi)色法(fa)定量(liang)檢測(ce)試劑盒

細胞(bao)磷(lin)脂酶(mei)C（Phospholipase C）活(huo)性(xing)比色(se)法(fa)定(ding)量(liang)檢測(ce)試劑盒

細胞(bao)等(deng)密(mi)度離(li)心(xin)法高(gao)純分(fen)離(li)試(shi)劑盒

體(ti)外非細胞(bao)系(xi)統細胞(bao)色(se)素P450亞(ya)酶(mei)CYP3A（END）活(huo)性(xing)

冰凍切(qie)片(pian)組織(zhi)線(xian)粒(li)體(ti)復合物IV蛋白表(biao)達(da)NBT顯色(se)光(guang)學顯微鏡檢(jian)測(ce)試劑盒

血液(ye)血管(guan)緊(jin)張素Ⅰ轉化(hua)酶(mei)1（ACE1）活(huo)性(xing)比色(se)法(fa)定(ding)量(liang)檢測(ce)試劑盒

細胞(bao)培(pei)養汙(wu)染(ran)性(xing)支原(yuan)體(ti)M.hominis鑒(jian)定16S rDNA

原(yuan)肌(ji)球蛋白抗體(ti)

鈣(gai)結合蛋白D28K抗(kang)體

鞘(qiao)磷(lin)脂合成酶(mei)2抗(kang)體

Intersectin 2抗(kang)體

細胞(bao)雕(diao)亡抑(yi)制因(yin)子(zi)單(dan)克(ke)隆抗(kang)體

WBP2單(dan)克(ke)隆抗(kang)體

口(kou)蹄疫病毒(du)A1型(xing)VP1抗(kang)體

B16-F1細胞(bao)APC標記人(ren)CD138 (Syndecan-1)單(dan)克(ke)隆抗(kang)體

鋅(xin)指蛋白689抗體(ti)

三、培養註(zhu)意(yi)事(shi)項(xiang) 

1. 收(shou)到(dao)細胞(bao)後(hou)首(shou)先觀察(cha)細胞(bao)瓶(ping)是(shi)否(fou)完好，培(pei)養液(ye)是(shi)否(fou)有(you)漏(lou)液(ye)、渾濁等現(xian)象(xiang)，若(ruo)有(you)上(shang)述現(xian)象(xiang) 發生請(qing)及時和我(wo)們(men)聯(lian)系(xi)。

2. 仔細閱讀細胞(bao)說明書，了解(jie)細胞(bao)相(xiang)關(guan)信息，如(ru)細胞(bao)形態、所用培養基(ji)、血清(qing)比例、所需(xu) 細胞(bao)因(yin)子(zi)等(deng)，確保(bao)細胞(bao)培(pei)養條(tiao)件(jian)壹致，若由(you)於(yu)培(pei)養條(tiao)件(jian)不(bu)壹致而導(dao)致細胞(bao)出(chu)現(xian)問(wen)題(ti)，責(ze)任由(you) 客戶(hu)自(zi)行(xing)承擔。

3. 用 75%酒精(jing)擦拭(shi)細胞(bao)瓶(ping)表(biao)面，顯微鏡下(xia)觀察(cha)細胞(bao)狀(zhuang)態。因運輸(shu)問(wen)題(ti)，部分細胞(bao)由(you)於(yu)溫(wen)度 變化(hua)及劇(ju)烈(lie)碰亡破(po)碎(sui)形成碎(sui)片(pian)，是(shi)正(zheng)常(chang)現(xian)象(xiang)。觀察(cha)好細胞(bao)狀(zhuang)態後，75%酒精(jing)消(xiao)毒(du)瓶壁將(jiang) T25 瓶(ping)置(zhi)於(yu) 37℃培(pei)養箱(xiang)放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁細胞(bao)可(ke)以(yi)消(xiao)化(hua)，懸浮(fu)細胞(bao)直接(jie)混(hun)勻收集細胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄(qi)上(shang) 清。加(jia) 5 mL PBS 重懸(xuan)細胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用新鮮的培養基(ji)重懸(xuan) 細胞(bao)，並(bing)接種(zhong)到(dao)新的培養瓶(ping)或(huo)培養皿中(zhong)，置(zhi)於(yu)培(pei)養箱(xiang)中(zhong)進行(xing)培養。

5. 請(qing)客(ke)戶用相(xiang)同條件(jian)的培養基(ji)用於(yu)細胞(bao)培(pei)養。

6. 建(jian)議(yi)客戶(hu)收到(dao)細胞(bao)後(hou)前(qian) 3 天各(ge)拍(pai)幾張細胞(bao)照片(pian)，記錄(lu)細胞(bao)狀(zhuang)態，便於(yu)和(he)我(wo)司(si)技(ji)術(shu)部溝通(tong) 交流(liu)。由(you)於(yu)運輸(shu)的原因(yin)，個別敏(min)感(gan)細胞(bao)會出現(xian)不(bu)穩(wen)定(ding)的情況，請及時和我(wo)們(men)聯(lian)系(xi)，告(gao)知細胞(bao) 的具體(ti)情況，以便我(wo)們(men)的技術(shu)人(ren)員跟蹤回訪直至(zhi)問(wen)題(ti)解(jie)決(jue)。

7. 該(gai)細胞(bao)僅(jin)供科(ke)研(yan)使用。

8. 備註(zhu)：運輸(shu)用的培養基(ji) (灌液(ye)培(pei)養基(ji)) 不(bu)能再(zai)用來(lai)培(pei)養細胞(bao)，請(qing)換(huan)用按(an)照說明書細胞(bao)培(pei) 養條(tiao)件(jian)新配(pei)制(zhi)的培養基(ji)來(lai)培(pei)養細胞(bao)。     收(shou)到(dao)細胞(bao)後(hou)第(di)壹次傳代建(jian)議(yi) 1：2 傳代(dai) 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳(chuan)代(dai)就是 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個 T25 瓶或(huo)者 2 個 6cm 皿。不(bu)是 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個10cm 皿。