Ca9-22細(xi)胞(bao)

公(gong)司(si)產(chan)品(pin)僅(jin)供科研(yan)研(yan)究(jiu)使(shi)用(yong)、不(bu)得用(yong)於(yu)臨(lin)床診(zhen)斷(duan)！

1、細(xi)胞(bao)傳代：

1）細(xi)胞(bao)生長(chang)至覆(fu)蓋培養瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積(ji)時，棄(qi) 25cm2培養瓶(ping)中(zhong)的(de)培養液(ye)，用(yong) PBS 清洗細(xi)胞(bao)壹次；

2）添加(jia) 0.25%消化液(ye)約 1ml 至培養瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置顯微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察(cha)，待(dai)細(xi)胞(bao)回(hui)縮變(bian)圓後加(jia)入(ru) 5ml 培養

液(ye)終(zhong)止消化，再輕輕吹(chui)打細(xi)胞(bao)使之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然(ran)後將懸(xuan)液(ye)轉移(yi)至 15ml 離(li)心管(guan)中，1000rpm 離(li)心 5min；

3）棄(qi)上(shang)清(qing)，沈(chen)澱(dian)細(xi)胞(bao)用 1-2ml 培養基重(zhong)懸(xuan)，然(ran)後按 1:2 比例(li)進(jin)行分(fen)瓶(ping)傳(chuan)代(dai)，最(zui)後放入 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)

培養箱(xiang)中(zhong)培養；

壹(yi)、商品(pin)介紹(shao)：

2、細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)：

1）細(xi)胞(bao)生長(chang)至覆(fu)蓋培養瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積(ji)時，棄(qi) 25cm2培養瓶(ping)中(zhong)的(de)培養液(ye)，用(yong) PBS 清洗細(xi)胞(bao)壹次；

2）添加(jia) 0.25%消化液(ye)約 1ml 至培養瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置顯微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察(cha)，待(dai)細(xi)胞(bao)回(hui)縮變(bian)圓後加(jia)入(ru)培養液(ye)終(zhong)

止消化，輕輕吹(chui)打細(xi)胞(bao)使之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然(ran)後將懸(xuan)液(ye)轉移(yi)至 15ml 離(li)心管(guan)中，1000rpm 離(li)心 5min；

3）用(yong)適量(liang)的(de)凍(dong)存(cun)液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細(xi)胞(bao)，並(bing)放置於凍(dong)存(cun)管(guan)中；

4）先將細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)管(guan)放置於-20℃ 1.5h，然後將其(qi)移(yi)入-80℃過(guo)夜，24h 後轉入液(ye)氮中進(jin)行長期(qi)保存(cun)。使(shi)用程(cheng)序

降溫(wen)盒可直接放入-80℃。

二、細(xi)胞(bao)培養操(cao)作

1) 復蘇(su)細(xi)胞(bao)：以下細(xi)胞(bao)培養凍(dong)存(cun)處(chu)理僅(jin)供(gong)參考(kao)，具(ju)體(ti)操(cao)作步(bu)驟(zhou)以隨(sui)貨產(chan)品(pin)說(shuo)明(ming)書(shu)為主。將含有1 mL細(xi)胞(bao)懸液的(de)凍(dong)存(cun)管(guan)在(zai) 37℃水浴中(zhong)迅(xun)速搖(yao)晃解凍(dong)，加(jia)4 mL培養基混合(he)均(jun)勻(yun)。在(zai)1000 rpm條件(jian)下離(li)心3 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液，加(jia)1-2 mL培養基後吹(chui)勻(yun)。然(ran)後將所(suo)有細(xi)胞(bao)懸液加(jia)入(ru)含適量(liang)培養基的(de)培養瓶(ping)中(zhong)培養過(guo)夜（或將細(xi)胞(bao)懸液加(jia)入(ru)10 cm皿中，加(jia)入(ru)約8 mL培養基，培養過(guo)夜）。第二(er)天換(huan)液(ye)並(bing)檢(jian)查(zha)細(xi)胞(bao)密度。

2) 細(xi)胞(bao)傳代：如果細(xi)胞(bao)密度達 80%-90%，即可(ke)進(jin)行傳代(dai)培養。

a、棄(qi)去(qu)培養上(shang)清(qing)，用不含鈣、鎂(mei)離(li)子的(de)PBS潤(run)洗細(xi)胞(bao)1-2次。

b、加(jia)1 mL消化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培養瓶(ping)中(zhong)，使(shi)消化液(ye)浸(jin)潤(run)所(suo)有細(xi)胞(bao)，將培養瓶(ping)置(zhi)於(yu)37℃培養箱(xiang)中(zhong)消化1-2 min（視(shi)細(xi)胞(bao)情(qing)況而(er)定(ding)），然後在(zai)顯微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)消化情(qing)況，若(ruo)細(xi)胞(bao)大(da)部分(fen)變(bian)圓並(bing)脫(tuo)落，迅(xun)速拿(na)回(hui)操(cao)作臺，輕敲幾下(xia)培養瓶(ping)後加(jia)2-3ml培養基終(zhong)止消化。輕輕打勻後裝入(ru)無(wu)菌(jun)離(li)心管(guan)中，1000 rpm離(li)心5 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液，補加(jia)1-2 mL培養液(ye)後吹(chui)勻(yun)。

c、將細(xi)胞(bao)懸液按1:2比例(li)分(fen)到(dao)新(xin)的(de)含8 mL培養基的(de)新(xin)皿中或者瓶(ping)中(zhong)，置(zhi)於(yu)培養箱(xiang)中(zhong)培養。 3) 細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)：待(dai)細(xi)胞(bao)生長(chang)狀態(tai)良好(hao)時(shi)，可(ke)進(jin)行細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)。下(xia)面(mian) T25 瓶(ping)為例(li)；a、收(shou)集細(xi)胞(bao)及細(xi)胞(bao)培養液(ye)，裝入(ru)無(wu)菌(jun)離(li)心管(guan)中，1000 rpm條件(jian)下離(li)心4 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液，用PBS清洗壹(yi)遍，棄(qi)盡(jin)PBS，進(jin)行細(xi)胞(bao)計(ji)數。

b、根(gen)據(ju)細(xi)胞(bao)數量(liang)加(jia)入(ru)無(wu)血清(qing)細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)液(ye)，使細(xi)胞(bao)密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻(yun)，每支凍(dong)存(cun)管(guan)凍(dong)存(cun)1mL細(xi)胞(bao)懸液，註意(yi)凍(dong)存(cun)管(guan)做好(hao)標(biao)識。將凍(dong)存(cun)管(guan)放入-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後轉入液(ye)氮灌儲存(cun)。記錄凍(dong)存(cun)管(guan)位(wei)置(zhi)以便下次(ci)拿取(qu)。

公(gong)司(si)正在(zai)出售的(de)產(chan)品(pin)：

細(xi)胞(bao)單胺氧化(hua)酶(mei)B型(xing)（MAO－B）活(huo)性比色(se)法定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試劑盒

石(shi)蠟(la)切(qie)片組(zu)織(zhi)蛋(dan)白(bai)（化(hua)學處(chu)理II）萃(cui)取(qu)試劑盒

細(xi)胞(bao)KSHV（KAPOSI SARCOMA-ASSOCIATED HERPESVIRUS）病(bing)毒定(ding)性檢測(ce)試劑盒

載玻片細(xi)胞(bao)MYC蛋(dan)白(bai)表(biao)達熒光顯微(wei)鏡(jing)檢測(ce)試劑盒

細(xi)胞(bao)遊離(li)氨基酸含量(liang)比色(se)法定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試劑盒

全(quan)組(zu)織(zhi)免(mian)疫組(zu)織(zhi)化(hua)學HRP酶(mei)聯(lian)DAB間(jian)接(jie)檢(jian)測(ce)試劑盒（含壹抗(kang)和(he)HRP二(er)抗(kang)）

組(zu)織(zhi)HCK激(ji)酶(mei)活(huo)性定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試劑盒（A/B/C）

通(tong)用(yong)型(xing)動物細(xi)胞(bao)周期(qi)（G1/S和(he)G2/M期(qi)）同步(bu)（SYNCHRONY）處(chu)理試劑盒

人(ren)體(ti)液(ye)微(wei)量(liang)白(bai)蛋(dan)白(bai)（microalbumin）免(mian)疫(yi)比濁(zhuo)法定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試劑盒

組(zu)織(zhi)乙(yi)酰(xian)酯酶(mei)活(huo)性比色(se)法定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試劑盒

形態肖爾（shorr）染(ran)色試劑盒

細(xi)胞(bao)色素P450亞酶(mei)2C9（TOBUTAMIDE）活(huo)性高效液(ye)相色(se)譜(pu)法（HPLC）定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試劑盒

石(shi)蠟(la)切(qie)片組(zu)織(zhi)鈣(gai)ATP酶(mei)SERCA蛋(dan)白(bai)表(biao)達熒光顯微(wei)鏡(jing)檢測(ce)試劑盒

組(zu)織(zhi)（PROTEASE）活(huo)性比色(se)法定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試劑盒

明(ming)膠(jiao)法人體(ti)胚(pei)胎(tai)幹(gan)細(xi)胞(bao)繁(fan)殖試劑盒

載脂(zhi)蛋(dan)白(bai)B抗(kang)體(ti)

鈣(gai)調神(shen)經磷酸酶(mei)調節蛋(dan)白(bai)3抗(kang)體(ti)（唐(tang)氏綜合征候選(xuan)區(qu)域蛋白(bai)1樣(yang)蛋(dan)白(bai)3）

清(qing)道(dao)夫脫(tuo)帽(mao)酶(mei)/熱休克蛋白(bai)1抗(kang)體(ti)

ITPRIP蛋(dan)白(bai)抗(kang)體(ti)

細(xi)胞(bao)分(fen)裂周期(qi)蛋白(bai)25抗(kang)體(ti)

X連鎖(suo)腦(nao)特異(yi)性BPX蛋(dan)白(bai)抗(kang)體(ti)

跨(kua)膜蛋白(bai)174抗(kang)體(ti)

Ca9-22細(xi)胞(bao)APC標(biao)記人(ren)CD45RO單克隆(long)抗(kang)體(ti)

鋅(xin)指蛋白(bai)754抗(kang)體(ti)

三、培養註意(yi)事(shi)項 

1. 收到(dao)細(xi)胞(bao)後首(shou)先觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)瓶(ping)是(shi)否完好(hao)，培養液(ye)是(shi)否有漏(lou)液、渾(hun)濁(zhuo)等現(xian)象(xiang)，若有上(shang)述(shu)現(xian)象(xiang) 發生請及(ji)時(shi)和(he)我(wo)們(men)聯(lian)系。

2. 仔(zai)細(xi)閱(yue)讀細(xi)胞(bao)說(shuo)明(ming)書(shu)，了解細(xi)胞(bao)相關(guan)信息，如細(xi)胞(bao)形態、所(suo)用(yong)培養基、血清(qing)比例(li)、所(suo)需(xu) 細(xi)胞(bao)因子等，確保細(xi)胞(bao)培養條件(jian)壹致(zhi)，若(ruo)由於培養條件(jian)不壹致(zhi)而(er)導致(zhi)細(xi)胞(bao)出現問題，責任由 客戶自(zi)行(xing)承(cheng)擔。

3. 用(yong) 75%酒(jiu)精擦(ca)拭細(xi)胞(bao)瓶(ping)表(biao)面(mian)，顯微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)狀態(tai)。因運輸問題，部分(fen)細(xi)胞(bao)由於溫(wen)度 變(bian)化及劇(ju)烈碰(peng)亡破碎(sui)形成碎片，是(shi)正常現(xian)象(xiang)。觀(guan)察(cha)好(hao)細(xi)胞(bao)狀態(tai)後，75%酒精(jing)消毒瓶(ping)壁(bi)將 T25 瓶(ping)置(zhi)於(yu) 37℃培養箱(xiang)放置 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細(xi)胞(bao)可以消化，懸(xuan)浮細(xi)胞(bao)直接混勻(yun)收(shou)集細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，棄(qi)上(shang) 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸細(xi)胞(bao)，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，用(yong)新(xin)鮮(xian)的(de)培養基重(zhong)懸(xuan) 細(xi)胞(bao)，並(bing)接(jie)種到(dao)新(xin)的(de)培養瓶(ping)或培養皿(min)中(zhong)，置於培養箱(xiang)中(zhong)進(jin)行培養。

5. 請客戶用(yong)相同條件(jian)的(de)培養基用(yong)於(yu)細(xi)胞(bao)培養。

6. 建(jian)議(yi)客戶收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後前(qian) 3 天各拍幾張細(xi)胞(bao)照片，記錄細(xi)胞(bao)狀態(tai)，便於和(he)我(wo)司(si)技術(shu)部溝(gou)通(tong) 交流。由於運輸的(de)原(yuan)因，個別(bie)敏(min)感(gan)細(xi)胞(bao)會出現不穩(wen)定(ding)的(de)情(qing)況，請及(ji)時(shi)和(he)我(wo)們(men)聯(lian)系，告知(zhi)細(xi)胞(bao) 的(de)具(ju)體(ti)情(qing)況，以便我(wo)們(men)的(de)技術(shu)人員(yuan)跟蹤(zong)回(hui)訪(fang)直至問題解決。

7. 該細(xi)胞(bao)僅供科研(yan)使用(yong)。

8. 備(bei)註：運輸用的(de)培養基 (灌液培養基) 不(bu)能再用(yong)來(lai)培養細(xi)胞(bao)，請換(huan)用(yong)按照說(shuo)明(ming)書(shu)細(xi)胞(bao)培 養條件(jian)新(xin)配(pei)制的(de)培養基來(lai)培養細(xi)胞(bao)。     收到(dao)細(xi)胞(bao)後第壹(yi)次傳(chuan)代建(jian)議(yi) 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳(chuan)代(dai)就(jiu)是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個 T25 瓶(ping)或者 2 個 6cm 皿。不(bu)是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個10cm 皿。