CCD-1068Sk細胞

公(gong)司產品(pin)僅(jin)供科(ke)研(yan)研(yan)究使用、不得(de)用於臨床(chuang)診(zhen)斷！

1、細胞傳(chuan)代：

1）細胞生長至覆(fu)蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶(ping)的(de) 80%面積時，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)的(de)培(pei)養(yang)液，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細胞壹次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消化液約(yue) 1ml 至培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒置顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀察，待細胞回縮變(bian)圓後加入 5ml 培(pei)養(yang)

液終止消(xiao)化(hua)，再輕(qing)輕(qing)吹(chui)打(da)細胞使之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然後將懸液轉(zhuan)移至 15ml 離心管中(zhong)，1000rpm 離心 5min；

3）棄上清，沈澱(dian)細胞用 1-2ml 培(pei)養(yang)基(ji)重懸，然(ran)後按 1:2 比(bi)例(li)進行分(fen)瓶(ping)傳(chuan)代，最後放(fang)入 37℃，5%CO2細胞

培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)培(pei)養(yang)；

壹、商品(pin)介(jie)紹(shao)：

2、細胞凍存(cun)：

1）細胞生長至覆(fu)蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶(ping)的(de) 80%面積時，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)的(de)培(pei)養(yang)液，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細胞壹次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消化液約(yue) 1ml 至培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒置顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀察，待細胞回縮變(bian)圓後加入培(pei)養(yang)液終

止消(xiao)化(hua)，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打(da)細胞使之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然後將懸液轉(zhuan)移至 15ml 離心管中(zhong)，1000rpm 離心 5min；

3）用適(shi)量(liang)的(de)凍存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，並放(fang)置於凍存(cun)管中(zhong)；

4）先將細胞凍存(cun)管放(fang)置於-20℃ 1.5h，然後將其(qi)移入-80℃過夜，24h 後轉入液氮(dan)中(zhong)進行長期保(bao)存(cun)。使用程(cheng)序

降(jiang)溫(wen)盒(he)可(ke)直(zhi)接放(fang)入-80℃。

二、細胞培(pei)養(yang)操(cao)作(zuo)

1) 復蘇細胞：以下(xia)細胞培(pei)養(yang)凍(dong)存(cun)處理(li)僅供(gong)參考，具體操(cao)作(zuo)步驟(zhou)以隨貨(huo)產品(pin)說(shuo)明(ming)書為(wei)主。將(jiang)含(han)有1 mL細胞懸液的(de)凍存(cun)管在 37℃水(shui)浴(yu)中(zhong)迅速搖(yao)晃解(jie)凍(dong)，加(jia)4 mL培(pei)養(yang)基(ji)混合(he)均(jun)勻。在1000 rpm條件下(xia)離心3 min，棄去(qu)上清液，加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)基(ji)後吹勻。然後將所(suo)有(you)細胞懸液加(jia)入含(han)適量培(pei)養(yang)基(ji)的(de)培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)培(pei)養(yang)過(guo)夜（或將細胞懸液加(jia)入10 cm皿中(zhong)，加入約8 mL培(pei)養(yang)基(ji)，培(pei)養(yang)過(guo)夜）。第二天(tian)換(huan)液並檢(jian)查(zha)細胞密度。

2) 細胞傳(chuan)代：如果(guo)細胞密度達(da) 80%-90%，即(ji)可進行傳(chuan)代培(pei)養(yang)。

a、棄(qi)去培(pei)養(yang)上清，用(yong)不含(han)鈣(gai)、鎂(mei)離子的(de)PBS潤洗(xi)細胞1-2次。

b、加1 mL消(xiao)化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，使消化(hua)液浸(jin)潤所(suo)有(you)細胞，將培(pei)養(yang)瓶(ping)置於37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)消化1-2 min（視(shi)細胞情況而定），然(ran)後在顯微鏡(jing)下(xia)觀察細胞消化情況，若(ruo)細胞大(da)部(bu)分(fen)變(bian)圓並脫(tuo)落(luo)，迅速拿回操(cao)作(zuo)臺(tai)，輕(qing)敲(qiao)幾(ji)下(xia)培(pei)養(yang)瓶(ping)後加2-3ml培(pei)養(yang)基(ji)終止消(xiao)化(hua)。輕(qing)輕(qing)打(da)勻後裝入無(wu)菌離心管中(zhong)，1000 rpm離心5 min，棄去(qu)上清液，補(bu)加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)液後吹勻。

c、將細胞懸液按(an)1:2比(bi)例(li)分(fen)到(dao)新(xin)的(de)含(han)8 mL培(pei)養(yang)基(ji)的(de)新皿中(zhong)或者瓶(ping)中(zhong)，置於培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)培(pei)養(yang)。 3) 細胞凍存(cun)：待細胞生長狀(zhuang)態良(liang)好時(shi)，可進行細胞凍存(cun)。下(xia)面 T25 瓶(ping)為(wei)例；a、收集(ji)細胞及細胞培(pei)養(yang)液，裝(zhuang)入無(wu)菌離心管中(zhong)，1000 rpm條件下(xia)離心4 min，棄去(qu)上清液，用(yong)PBS清(qing)洗(xi)壹遍(bian)，棄(qi)盡PBS，進行細胞計數。

b、根據(ju)細胞數量(liang)加(jia)入無(wu)血清細胞凍存(cun)液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混(hun)勻，每支凍(dong)存(cun)管凍(dong)存(cun)1mL細胞懸液，註(zhu)意(yi)凍(dong)存(cun)管做(zuo)好(hao)標(biao)識。將凍存(cun)管放(fang)入-80℃冰箱，24 h後轉入液氮(dan)灌儲存(cun)。記錄(lu)凍存(cun)管位(wei)置(zhi)以便下(xia)次拿(na)取。

公(gong)司正在出售(shou)的(de)產品(pin)：

組(zu)織(zhi)單(dan)胺氧化酶(mei)（MAO）總(zong)活性熒(ying)光定量(liang)檢(jian)測試(shi)劑盒

同(tong)位(wei)素－蛋(dan)白結(jie)合(he)凝(ning)膠(jiao)電泳(yong)定量(liang)分(fen)析(xi)（McKay）試(shi)劑盒

細胞KSHV（KAPOSI SARCOMA-ASSOCIATED HERPESVIRUS）病毒定量(liang)PCR擴(kuo)增(zeng)檢(jian)測試(shi)劑盒

冰(bing)凍(dong)切片(pian)組織MYC蛋(dan)白表(biao)達NBT顯(xian)色(se)光學(xue)顯微鏡(jing)檢(jian)測試(shi)劑盒

植物(wu)遊離氨(an)基酸(suan)含(han)量比色(se)法定量(liang)檢(jian)測試(shi)劑盒

全(quan)組(zu)織(zhi)免疫組織(zhi)化(hua)學AP酶(mei)聯NBT/BCIP間接檢(jian)測試(shi)劑盒（含(han)壹抗(kang)和(he)AP二抗(kang)）

組(zu)織(zhi)INSULIN R激(ji)酶(mei)活性定量(liang)檢(jian)測試(shi)劑盒（A/B/C）

植物(wu)細胞周(zhou)期G1後期同(tong)步（SYNCHRONY）處(chu)理(li)試劑盒

血小板相關(guan)性抗(kang)體（PA IgG）細胞流式(shi)儀(yi)檢(jian)測試(shi)劑盒

通(tong)用(yong)型乙酰(xian)酯(zhi)酶(mei)活性熒(ying)光法定量(liang)檢(jian)測試(shi)劑盒

精(jing)漿(jiang)中(zhong)性α-糖(tang)苷(gan)酶(mei)（α-glucosidase）活性比(bi)色法定量(liang)檢(jian)測試(shi)劑盒

活性高效(xiao)液相色(se)譜法（HPLC）定量(liang)檢(jian)測試(shi)劑盒

細胞鈣(gai)ATP酶(mei)SERCA蛋(dan)白表(biao)達比(bi)色法定量(liang)檢(jian)測試(shi)劑盒

血液逆(ni)轉錄(lu)酶(mei)（REVERSE TRANSCREPTASE）活性熒(ying)光定量(liang)

基(ji)質(zhi)膠(jiao)體法小鼠胚胎幹(gan)細胞繁殖試劑盒

載脂(zhi)蛋(dan)白C4抗(kang)體

鈣(gai)網(wang)蛋白單(dan)克隆抗(kang)體

丘腦分(fen)泌(mi)素受體1抗(kang)體

IWS1蛋(dan)白抗(kang)體

細胞分(fen)裂(lie)周(zhou)期蛋(dan)白5抗(kang)體

X染(ran)色(se)體開(kai)放(fang)閱讀框(kuang)21抗(kang)體

跨(kua)膜(mo)蛋白180抗(kang)體

CCD-1068Sk細胞APC標(biao)記人CD57單(dan)克隆抗(kang)體

鋅指蛋(dan)白763抗(kang)體

三、培(pei)養(yang)註(zhu)意(yi)事(shi)項(xiang) 

1. 收到(dao)細胞後首先(xian)觀(guan)察細胞瓶(ping)是(shi)否(fou)完(wan)好(hao)，培(pei)養(yang)液是(shi)否(fou)有(you)漏(lou)液、渾(hun)濁(zhuo)等(deng)現(xian)象，若(ruo)有上述現(xian)象 發(fa)生請(qing)及時和(he)我(wo)們聯(lian)系。

2. 仔細閱讀細胞說(shuo)明(ming)書，了解(jie)細胞相關(guan)信(xin)息，如細胞形態、所(suo)用培(pei)養(yang)基(ji)、血清比例、所(suo)需(xu) 細胞因子等(deng)，確保(bao)細胞培(pei)養(yang)條(tiao)件壹致(zhi)，若(ruo)由(you)於培(pei)養(yang)條(tiao)件不壹致(zhi)而(er)導致(zhi)細胞出現問(wen)題(ti)，責(ze)任由(you) 客(ke)戶(hu)自行(xing)承(cheng)擔(dan)。

3. 用(yong) 75%酒(jiu)精(jing)擦(ca)拭細胞瓶(ping)表(biao)面，顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀察細胞狀態。因(yin)運輸(shu)問(wen)題，部分(fen)細胞由(you)於溫(wen)度(du) 變(bian)化及(ji)劇(ju)烈(lie)碰亡(wang)破碎(sui)形成碎片(pian)，是(shi)正(zheng)常(chang)現(xian)象(xiang)。觀察好細胞狀態後，75%酒精(jing)消(xiao)毒瓶(ping)壁(bi)將(jiang) T25 瓶(ping)置於 37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)放(fang)置 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細胞可以消化，懸浮(fu)細胞直接混(hun)勻收集(ji)細胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加(jia) 5 mL PBS 重懸細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新(xin)鮮(xian)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)重懸 細胞，並接種(zhong)到(dao)新的(de)培(pei)養(yang)瓶(ping)或培(pei)養(yang)皿(min)中(zhong)，置於培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)進行培(pei)養(yang)。

5. 請(qing)客(ke)戶(hu)用相同(tong)條件的(de)培(pei)養(yang)基(ji)用於細胞培(pei)養(yang)。

6. 建(jian)議(yi)客(ke)戶(hu)收到(dao)細胞後前 3 天(tian)各拍幾(ji)張細胞照(zhao)片(pian)，記錄(lu)細胞狀態，便於和(he)我(wo)司技術(shu)部溝(gou)通 交流。由(you)於運輸(shu)的(de)原(yuan)因，個(ge)別敏感細胞會(hui)出現不穩(wen)定的(de)情況，請(qing)及時和(he)我(wo)們聯(lian)系，告(gao)知(zhi)細胞 的(de)具體情況，以便我(wo)們的(de)技術(shu)人員(yuan)跟蹤(zong)回訪(fang)直至問(wen)題(ti)解(jie)決。

7. 該(gai)細胞僅供科(ke)研(yan)使用。

8. 備(bei)註(zhu)：運(yun)輸(shu)用(yong)的(de)培(pei)養(yang)基(ji) (灌液培(pei)養(yang)基(ji)) 不能(neng)再用來培(pei)養(yang)細胞，請(qing)換用按(an)照(zhao)說(shuo)明(ming)書細胞培(pei) 養(yang)條(tiao)件新配制(zhi)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)來培(pei)養(yang)細胞。     收到(dao)細胞後第壹次(ci)傳(chuan)代建(jian)議(yi) 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳(chuan)代就(jiu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶(ping)或者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿。不是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿。