SH-4細胞(bao)

公司產(chan)品僅供科(ke)研(yan)研(yan)究(jiu)使用(yong)、不(bu)得(de)用(yong)於臨床(chuang)診斷(duan)！

壹(yi)、商(shang)品介紹(shao)：

1、細胞傳(chuan)代(dai)：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)至覆(fu)蓋(gai)培養(yang)瓶的 80%面(mian)積時(shi)，棄 25cm2培養(yang)瓶中的培養(yang)液，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細胞壹(yi)次；

2）添(tian)加 0.25%消化(hua)液約 1ml 至培養(yang)瓶中，倒(dao)置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察(cha)，待細胞(bao)回縮(suo)變圓(yuan)後加入 5ml 培養(yang)

液終止(zhi)消化(hua)，再輕(qing)輕吹打(da)細(xi)胞使(shi)之(zhi)脫落，然(ran)後(hou)將(jiang)懸(xuan)液轉移至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄(qi)上(shang)清(qing)，沈(chen)澱細(xi)胞用(yong) 1-2ml 培養(yang)基重懸(xuan)，然(ran)後(hou)按(an) 1:2 比例進行分(fen)瓶傳(chuan)代(dai)，最(zui)後放(fang)入 37℃，5%CO2細(xi)胞培養(yang)箱(xiang)中培養(yang)；

2、細胞凍(dong)存(cun)：

1）細胞生(sheng)長(chang)至覆(fu)蓋(gai)培養(yang)瓶的 80%面(mian)積時(shi)，棄 25cm2培養(yang)瓶中的培養(yang)液，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細胞壹(yi)次；

2）添(tian)加 0.25%消化(hua)液約 1ml 至培養(yang)瓶中，倒(dao)置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察(cha)，待細胞(bao)回縮(suo)變圓(yuan)後加入培養(yang)液終

止(zhi)消化(hua)，輕輕(qing)吹打(da)細(xi)胞使(shi)之(zhi)脫落，然(ran)後(hou)將(jiang)懸(xuan)液轉移至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用(yong)適(shi)量的凍存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細(xi)胞(bao)，並放(fang)置(zhi)於凍存(cun)管(guan)中；

4）先(xian)將(jiang)細(xi)胞凍存(cun)管(guan)放置(zhi)於-20℃ 1.5h，然後將(jiang)其移入(ru)-80℃過夜(ye)，24h 後轉(zhuan)入(ru)液氮(dan)中(zhong)進行長(chang)期保存(cun)。使用(yong)程(cheng)序(xu)降(jiang)溫(wen)盒可(ke)直接(jie)放入(ru)-80℃。

二、細(xi)胞(bao)培養(yang)操(cao)作(zuo)

1) 復(fu)蘇細胞(bao)：以下細(xi)胞(bao)培養(yang)凍存(cun)處理僅供參考(kao)，具體(ti)操(cao)作(zuo)步驟以隨(sui)貨(huo)產(chan)品說(shuo)明(ming)書為主。將(jiang)含有1 mL細胞(bao)懸(xuan)液的凍存(cun)管(guan)在 37℃水(shui)浴中迅(xun)速(su)搖晃解凍(dong)，加4 mL培養(yang)基混合均勻(yun)。在1000 rpm條(tiao)件下離(li)心(xin)3 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液，加1-2 mL培養(yang)基後吹(chui)勻(yun)。然後(hou)將(jiang)所(suo)有細胞(bao)懸(xuan)液加入(ru)含適(shi)量培養(yang)基的培養(yang)瓶中培養(yang)過夜(ye)（或將(jiang)細(xi)胞懸(xuan)液加入(ru)10 cm皿(min)中，加入(ru)約8 mL培養(yang)基，培養(yang)過夜(ye)）。第二(er)天(tian)換液並檢查(zha)細胞(bao)密(mi)度(du)。

2) 細胞(bao)傳(chuan)代(dai)：如果細胞密(mi)度(du)達(da) 80%-90%，即(ji)可(ke)進行傳(chuan)代(dai)培養(yang)。

a、棄去培養(yang)上清(qing)，用(yong)不(bu)含鈣(gai)、鎂離(li)子的PBS潤洗(xi)細胞(bao)1-2次。

b、加1 mL消化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培養(yang)瓶中，使(shi)消化(hua)液浸(jin)潤所有細胞(bao)，將(jiang)培養(yang)瓶置於37℃培養(yang)箱(xiang)中消化(hua)1-2 min（視(shi)細胞(bao)情況(kuang)而定），然(ran)後在顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察(cha)細胞消化(hua)情況(kuang)，若細(xi)胞(bao)大(da)部(bu)分(fen)變圓(yuan)並脫落，迅(xun)速(su)拿回(hui)操(cao)作(zuo)臺(tai)，輕(qing)敲(qiao)幾(ji)下培養(yang)瓶後加(jia)2-3ml培養(yang)基終止(zhi)消化(hua)。輕輕(qing)打(da)勻(yun)後裝入(ru)無菌離(li)心(xin)管(guan)中，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液，補加1-2 mL培養(yang)液後吹(chui)勻(yun)。

c、將(jiang)細(xi)胞懸(xuan)液按(an)1:2比例分(fen)到新(xin)的含8 mL培養(yang)基的新(xin)皿中或(huo)者(zhe)瓶中，置(zhi)於培養(yang)箱(xiang)中培養(yang)。 3) 細胞凍(dong)存(cun)：待細胞(bao)生(sheng)長(chang)狀態良好時(shi)，可進行細胞凍(dong)存(cun)。下面(mian) T25 瓶(ping)為例；a、收集細胞(bao)及細胞(bao)培養(yang)液，裝入(ru)無菌離(li)心(xin)管(guan)中，1000 rpm條(tiao)件下離(li)心(xin)4 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液，用(yong)PBS清(qing)洗(xi)壹(yi)遍，棄盡PBS，進行細胞計(ji)數。

b、根據細胞數量(liang)加(jia)入(ru)無血清(qing)細(xi)胞凍存(cun)液，使細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕輕(qing)混(hun)勻(yun)，每支凍存(cun)管(guan)凍存(cun)1mL細胞懸(xuan)液，註(zhu)意(yi)凍存(cun)管(guan)做好標識(shi)。將(jiang)凍(dong)存(cun)管(guan)放入(ru)-80℃冰箱(xiang)，24 h後轉入(ru)液氮(dan)灌儲(chu)存(cun)。記錄(lu)凍(dong)存(cun)管(guan)位(wei)置以便下(xia)次拿取(qu)。

三(san)、培養(yang)註(zhu)意(yi)事(shi)項(xiang) 

1. 收到細胞後(hou)首(shou)先(xian)觀察(cha)細胞瓶(ping)是否(fou)完好，培養(yang)液是否(fou)有漏(lou)液、渾(hun)濁等(deng)現象(xiang)，若有上述(shu)現象(xiang) 發生(sheng)請(qing)及時(shi)和(he)我們聯(lian)系(xi)。

2. 仔細(xi)閱(yue)讀細(xi)胞說(shuo)明(ming)書，了(le)解細(xi)胞相關信息，如細胞(bao)形(xing)態、所用(yong)培養(yang)基、血清(qing)比例、所(suo)需 細胞(bao)因(yin)子等(deng)，確保細(xi)胞培養(yang)條件壹(yi)致(zhi)，若由(you)於培養(yang)條件不(bu)壹(yi)致(zhi)而(er)導(dao)致(zhi)細(xi)胞出現問(wen)題(ti)，責(ze)任(ren)由(you) 客戶(hu)自(zi)行承擔。

3. 用(yong) 75%酒(jiu)精(jing)擦拭(shi)細胞(bao)瓶表面(mian)，顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察(cha)細胞狀態。因運(yun)輸(shu)問(wen)題(ti)，部(bu)分(fen)細胞由於溫(wen)度(du) 變化(hua)及劇烈碰亡破(po)碎形(xing)成碎片(pian)，是正(zheng)常(chang)現象(xiang)。觀察(cha)好細胞(bao)狀態後，75%酒(jiu)精(jing)消毒(du)瓶(ping)壁將(jiang) T25 瓶(ping)置於 37℃培養(yang)箱(xiang)放置 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細胞可以消化(hua)，懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞(bao)直接(jie)混勻(yun)收集細胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄(qi)上(shang) 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重懸(xuan)細(xi)胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用(yong)新(xin)鮮的培養(yang)基重懸(xuan) 細(xi)胞(bao)，並接(jie)種(zhong)到新(xin)的培養(yang)瓶或培養(yang)皿中，置(zhi)於培養(yang)箱(xiang)中進行培養(yang)。

5. 請(qing)客戶(hu)用(yong)相(xiang)同(tong)條件的培養(yang)基用(yong)於細胞培養(yang)。

6. 建(jian)議客戶(hu)收到細胞後(hou)前 3 天(tian)各拍(pai)幾(ji)張細(xi)胞(bao)照片(pian)，記錄(lu)細(xi)胞(bao)狀態，便於和(he)我司(si)技(ji)術(shu)部(bu)溝(gou)通(tong) 交(jiao)流。由(you)於運輸(shu)的原因，個(ge)別敏(min)感細(xi)胞(bao)會(hui)出現不(bu)穩定(ding)的情況(kuang)，請(qing)及時(shi)和(he)我們聯(lian)系(xi)，告(gao)知細(xi)胞 的具體(ti)情況(kuang)，以便我們的技術(shu)人員(yuan)跟(gen)蹤(zong)回(hui)訪(fang)直至(zhi)問題(ti)解決。

7. 該細胞(bao)僅供科(ke)研(yan)使(shi)用(yong)。

8. 備(bei)註(zhu)：運(yun)輸(shu)用(yong)的培養(yang)基 (灌液培養(yang)基) 不(bu)能再(zai)用(yong)來(lai)培養(yang)細胞，請(qing)換用(yong)按(an)照說(shuo)明(ming)書細胞培 養(yang)條件新(xin)配制的培養(yang)基來(lai)培養(yang)細胞。     收到細胞後(hou)第(di)壹(yi)次傳(chuan)代(dai)建(jian)議 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳(chuan)代(dai)就(jiu)是 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶(ping)或(huo)者(zhe) 2 個 6cm 皿。不(bu)是 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿(min)。

公司正(zheng)在出(chu)售(shou)的產品：

CLIAKitforLDL(Humanlowdensitylipoprotein)ELISAKit人低(di)密(mi)度(du)脂蛋(dan)白規(gui)格(ge)：48T/96T

ELISA 小(xiao)鼠心(xin)肌鈣(gai)蛋白T(mouse c) 48T/96T 進口(kou)分(fen)裝

通(tong)用(yong)型LB細菌(jun)培養(yang)液500毫升

ELISAKitLMA猴抗肝細(xi)胞(bao)膜(mo)抗體(ti)規格(ge)：48T/96T

大(da)鼠超(chao)敏(min)C反應蛋白(hs-CRP)ELISA 試劑(ji)盒(he) 96T/48T 試劑(ji)盒(he) 組裝/原裝

弧菌(O1)檢測(ce)試劑盒(PCR-熒(ying)光探針法(fa)) 48T

humanS100calciumbindingproteinA9/calgranulinB,S100A9ELISA試劑(ji)盒(he)人(ren)S100鈣(gai)結合蛋白A9/鈣(gai)粒蛋白B(S100A9)ELISA試劑(ji)盒(he)規(gui)格：96T/48T

ELISAKitANG-R-Tie2小(xiao)鼠血管(guan)生(sheng)成素受(shou)體(ti)Tie2規格(ge)：48T/96T

HumancathepsinD,cath-DELISAKit人組(zu)織(zhi)D(cath-D)ELISA試劑(ji)盒(he)規(gui)格：96T/48T

人糖(tang)60酸異(yi)構(gou)酶(GPI)ELISA 試劑(ji)盒(he) 96T/48T 試劑(ji)盒(he) 組裝/原裝

人纖(xian)維膠(jiao)凝(ning)蛋白3(FCN3)免疫試劑(ji)盒 Human FCN3 ELISA Kit

超(chao)氧陰離(li)子測試(shi)盒 可見(jian)分(fen)光光度(du)法 50管(guan)/24樣

RatMyoglobin,MYO/MBELISA試劑(ji)盒(he)大(da)鼠肌紅蛋(dan)白(MYO/MB)ELISA試劑(ji)盒(he)規(gui)格：96T/48T

Humanhepatocytegrowthfactor,HGFELISA試劑(ji)盒(he)人(ren)肝細胞(bao)生(sheng)長(chang)因子(zi)(HGF)ELISA試劑(ji)盒(he)規(gui)格：96T/48T

Humanleoopichormone，LHELISAKit(LH)ELISA試劑(ji)盒(he)規(gui)格：96T/48T

腫(zhong)瘤(liu)壞(huai)死因(yin)子(zi)受(shou)體(ti)相關(guan)因(yin)子(zi)7抗體(ti)

關節(jie)炎(yan)相(xiang)關(guan)基(ji)因抗體(ti)

肉豆(dou)蔻(kou)酰基轉(zhuan)移酶(mei)2-N端肽(tai)抗體(ti)

MSI2蛋白抗體(ti)

線粒(li)體(ti)雕亡誘(you)導(dao)因子(zi)2抗體(ti)

白細(xi)胞(bao)介素(su)1受(shou)體(ti)相關(guan)蛋(dan)白激酶(mei)M抗體(ti)

磷酸化(hua)p38調節/激活(huo)蛋白激酶(mei)抗體(ti)

SH-4細胞CD86抗體(ti)

血小(xiao)板源性生(sheng)長(chang)因子(zi)C抗體(ti)