SK-N-FI細(xi)胞(bao)

公(gong)司(si)產品僅供科研(yan)研(yan)究使用(yong)、不(bu)得用(yong)於(yu)臨床(chuang)診斷(duan)！

壹(yi)、商品介紹(shao)：

1、細(xi)胞(bao)傳(chuan)代：

1）細(xi)胞(bao)生長至(zhi)覆蓋培(pei)養(yang)瓶的(de) 80%面(mian)積時，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的(de)培(pei)養(yang)液(ye)，用 PBS 清(qing)洗細(xi)胞(bao)壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化(hua)液約(yue) 1ml 至培(pei)養(yang)瓶中，倒(dao)置(zhi)顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)，待細胞(bao)回(hui)縮變(bian)圓後加入(ru) 5ml 培(pei)養(yang)

液終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)，再輕輕吹(chui)打(da)細胞(bao)使之脫落(luo)，然後將(jiang)懸(xuan)液(ye)轉移(yi)至(zhi) 15ml 離心(xin)管中，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄上清(qing)，沈澱細(xi)胞(bao)用(yong) 1-2ml 培養基重懸(xuan)，然(ran)後按 1:2 比例進行(xing)分瓶傳(chuan)代，最後放(fang)入 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)培(pei)養箱中培養；

2、細胞(bao)凍(dong)存：

1）細胞(bao)生長至(zhi)覆蓋培(pei)養(yang)瓶的(de) 80%面(mian)積時，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的(de)培(pei)養(yang)液(ye)，用 PBS 清(qing)洗細(xi)胞(bao)壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化(hua)液約(yue) 1ml 至培(pei)養(yang)瓶中，倒(dao)置(zhi)顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)，待細胞(bao)回(hui)縮變(bian)圓後加入(ru)培(pei)養(yang)液終(zhong)

止(zhi)消(xiao)化(hua)，輕輕吹(chui)打(da)細胞(bao)使之脫落(luo)，然後將(jiang)懸(xuan)液(ye)轉移(yi)至(zhi) 15ml 離心(xin)管中，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用(yong)適量的(de)凍(dong)存(cun)液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細(xi)胞(bao)，並放(fang)置(zhi)於(yu)凍(dong)存管中；

4）先(xian)將(jiang)細(xi)胞(bao)凍(dong)存管放(fang)置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後將(jiang)其(qi)移(yi)入(ru)-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後轉入(ru)液氮(dan)中進行長期保存(cun)。使用(yong)程(cheng)序(xu)降(jiang)溫(wen)盒可直(zhi)接(jie)放(fang)入-80℃。

二(er)、細(xi)胞(bao)培(pei)養操作(zuo)

1) 復蘇(su)細胞(bao)：以(yi)下(xia)細(xi)胞(bao)培(pei)養凍存處理僅(jin)供(gong)參考，具(ju)體(ti)操作(zuo)步(bu)驟以隨貨產品說明書(shu)為(wei)主(zhu)。將(jiang)含有1 mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)的(de)凍(dong)存(cun)管在 37℃水(shui)浴中迅(xun)速(su)搖(yao)晃解(jie)凍(dong)，加4 mL培(pei)養(yang)基混(hun)合均勻。在1000 rpm條(tiao)件下(xia)離(li)心(xin)3 min，棄去(qu)上清(qing)液，加1-2 mL培(pei)養(yang)基後吹(chui)勻。然後將(jiang)所(suo)有細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)加入(ru)含適量培(pei)養基的(de)培(pei)養(yang)瓶(ping)中培養過(guo)夜(ye)（或將(jiang)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)加入(ru)10 cm皿(min)中，加入(ru)約(yue)8 mL培養(yang)基，培養過(guo)夜(ye)）。第二(er)天換液(ye)並檢查(zha)細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)。

2) 細胞(bao)傳(chuan)代：如(ru)果細胞(bao)密(mi)度(du)達 80%-90%，即(ji)可進(jin)行傳(chuan)代培(pei)養(yang)。

a、棄去(qu)培(pei)養上清(qing)，用不(bu)含鈣、鎂離(li)子的(de)PBS潤(run)洗(xi)細(xi)胞(bao)1-2次(ci)。

b、加1 mL消(xiao)化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養瓶中，使消(xiao)化(hua)液浸(jin)潤所(suo)有(you)細(xi)胞(bao)，將(jiang)培(pei)養瓶(ping)置(zhi)於(yu)37℃培(pei)養箱中消化(hua)1-2 min（視細(xi)胞(bao)情況(kuang)而定），然(ran)後在顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)消(xiao)化(hua)情況(kuang)，若細胞(bao)大部分變(bian)圓並脫(tuo)落(luo)，迅(xun)速(su)拿回(hui)操作(zuo)臺，輕敲幾下(xia)培(pei)養(yang)瓶後加2-3ml培(pei)養(yang)基終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)。輕輕打(da)勻後裝入(ru)無(wu)菌離(li)心(xin)管中，1000 rpm離心(xin)5 min，棄去(qu)上清(qing)液，補(bu)加1-2 mL培(pei)養(yang)液(ye)後吹(chui)勻。

c、將(jiang)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)按1:2比例分到(dao)新的(de)含8 mL培養(yang)基的(de)新皿(min)中或者瓶中，置(zhi)於(yu)培(pei)養箱中培養。 3) 細胞(bao)凍(dong)存：待細胞(bao)生長狀(zhuang)態良好時，可進行細(xi)胞(bao)凍(dong)存。下(xia)面(mian) T25 瓶(ping)為例；a、收(shou)集細胞(bao)及(ji)細胞(bao)培(pei)養液，裝入(ru)無(wu)菌離(li)心(xin)管中，1000 rpm條件下(xia)離(li)心(xin)4 min，棄去(qu)上清(qing)液，用(yong)PBS清(qing)洗壹(yi)遍，棄盡(jin)PBS，進(jin)行細(xi)胞(bao)計(ji)數。

b、根(gen)據(ju)細(xi)胞(bao)數量(liang)加入(ru)無(wu)血(xue)清(qing)細胞(bao)凍(dong)存液，使細(xi)胞(bao)密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕輕混(hun)勻，每支(zhi)凍存(cun)管凍存(cun)1mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)，註(zhu)意(yi)凍(dong)存(cun)管做好(hao)標(biao)識。將(jiang)凍(dong)存管放(fang)入-80℃冰(bing)箱，24 h後轉入(ru)液氮(dan)灌儲(chu)存(cun)。記錄(lu)凍存管位(wei)置(zhi)以(yi)便(bian)下(xia)次(ci)拿取(qu)。

三、培養(yang)註(zhu)意(yi)事(shi)項(xiang) 

1. 收(shou)到(dao)細胞(bao)後首先(xian)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)瓶(ping)是否完(wan)好(hao)，培(pei)養液(ye)是(shi)否有漏(lou)液(ye)、渾濁等現(xian)象(xiang)，若有上述現(xian)象(xiang) 發(fa)生請及(ji)時和我(wo)們聯系(xi)。

2. 仔細(xi)閱讀細胞(bao)說(shuo)明書(shu)，了(le)解細胞(bao)相(xiang)關信息，如(ru)細(xi)胞(bao)形(xing)態、所用培(pei)養(yang)基、血清(qing)比例、所需(xu) 細(xi)胞(bao)因(yin)子等，確保(bao)細(xi)胞(bao)培(pei)養條件壹致，若由(you)於(yu)培(pei)養條件不壹致而導(dao)致細胞(bao)出(chu)現(xian)問題(ti)，責(ze)任由(you) 客戶(hu)自行(xing)承(cheng)擔(dan)。

3. 用 75%酒精(jing)擦拭細(xi)胞(bao)瓶(ping)表(biao)面(mian)，顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態。因運輸(shu)問題(ti)，部分細胞(bao)由(you)於(yu)溫(wen)度(du) 變(bian)化(hua)及劇烈碰(peng)亡(wang)破碎形成碎片(pian)，是正(zheng)常現(xian)象(xiang)。觀(guan)察(cha)好(hao)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態後，75%酒精(jing)消毒(du)瓶(ping)壁(bi)將(jiang) T25 瓶(ping)置(zhi)於(yu) 37℃培(pei)養箱放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁細(xi)胞(bao)可(ke)以消化(hua)，懸(xuan)浮細(xi)胞(bao)直(zhi)接混(hun)勻收(shou)集細胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄上 清(qing)。加 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，用(yong)新鮮(xian)的(de)培(pei)養(yang)基重懸(xuan) 細(xi)胞(bao)，並接(jie)種(zhong)到(dao)新的(de)培(pei)養(yang)瓶(ping)或培養皿中，置(zhi)於(yu)培(pei)養箱中進行培養(yang)。

5. 請客(ke)戶(hu)用(yong)相同(tong)條件的(de)培(pei)養(yang)基用於(yu)細(xi)胞(bao)培(pei)養。

6. 建議客(ke)戶收(shou)到(dao)細胞(bao)後前(qian) 3 天各拍(pai)幾(ji)張細(xi)胞(bao)照片(pian)，記錄(lu)細胞(bao)狀(zhuang)態，便(bian)於(yu)和我(wo)司(si)技(ji)術(shu)部溝(gou)通 交(jiao)流(liu)。由(you)於(yu)運(yun)輸的(de)原(yuan)因，個(ge)別(bie)敏(min)感細(xi)胞(bao)會(hui)出現(xian)不(bu)穩定的(de)情況(kuang)，請(qing)及(ji)時和我(wo)們聯系(xi)，告知細(xi)胞(bao) 的(de)具(ju)體(ti)情況(kuang)，以(yi)便(bian)我(wo)們的(de)技(ji)術(shu)人(ren)員跟蹤(zong)回訪直至問題(ti)解(jie)決。

7. 該細(xi)胞(bao)僅(jin)供科研(yan)使用(yong)。

8. 備(bei)註(zhu)：運(yun)輸用(yong)的(de)培(pei)養(yang)基 (灌液培養(yang)基) 不能(neng)再(zai)用來(lai)培養(yang)細(xi)胞(bao)，請(qing)換用(yong)按照說明書(shu)細(xi)胞(bao)培(pei) 養條件新配(pei)制的(de)培(pei)養(yang)基來(lai)培養(yang)細(xi)胞(bao)。     收(shou)到(dao)細胞(bao)後第壹(yi)次(ci)傳(chuan)代建(jian)議 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳(chuan)代就(jiu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶(ping)或(huo)者 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不(bu)是 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿(min)。

公(gong)司正(zheng)在出(chu)售(shou)的(de)產品：

大鼠叉頭(tou)框(kuang)蛋白M1(FOXM1)ELISA試劑(ji)盒 ，英(ying)文名： FOXM1 ELISA Kit

RatC-telopeptideoftypeⅠcollagen,CTX-ⅠELISAKit大鼠Ⅰ型膠(jiao)原(yuan)C端(duan)肽(CTX-Ⅰ)ELISA試劑(ji)盒規格：96T/48T

Rat compleme fragme 5A (C5a) ELISA Kit 大鼠補體(ti)片(pian)斷5a(C5a)ELISA試劑(ji)盒

RatmajorhistocompatibilitycomplexⅢ,MHCⅢ/AgBⅢ/H-1ⅢELISAKit 大鼠主要(yao)組(zu)織相(xiang)容性(xing)復合體(ti)Ⅲ類(MHCⅢ/AgBⅢ/H-1Ⅲ)ELISA試劑(ji)盒 96T/48T 進口(kou)分裝

CLIAKitforCpG-ODN(HumanCpGoligodeoxynucleotide)ELISAKit人未甲基化(hua)寡聚脫(tuo)氧(yang)核(he)苷酸規格：48T/96T

HumanCaspase3,Casp-3ELISAKit人胱(guang)天3(Casp-3)ELISA試劑(ji)盒規格：96T/48T

人皮(pi)質(zhi)/腺(xian)(CO)ELISA 試劑(ji)盒 96T/48T 試劑(ji)盒 組(zu)裝/原(yuan)裝

小鼠纖溶酶抗纖(xian)溶酶復合物(wu)(PAP)免疫試(shi)劑(ji)盒 Mouse plasmin-aiplasmin complex,PAP ELISA Kit

產腸毒(du)素(su)性大腸桿(gan)菌(jun)(ETEC)檢測試(shi)劑(ji)盒(PCR-熒(ying)光(guang)探針法(fa)) 48T

HumansecretedphospholipaseA2,sPLA2ELISA試劑(ji)盒人分泌(mi)型0脂酶A2(sPLA2)ELISA試劑(ji)盒規格：96T/48T

Humanheterogeneousnuclearribonucleoproteincompies/ai-RA33-aibody,hNP/RA33ELISA試劑(ji)盒人異質(zhi)型核(he)糖核(he)蛋白復合物(wu)/抗RA33抗體(ti)(hNP/RA33)ELISA試劑(ji)盒規格：96T/48T

Humanlymphocytefunctionassociatedaigen3,LFA-3ELISAKit人淋(lin)巴細(xi)胞(bao)功(gong)能(neng)相(xiang)關抗原(yuan)3(LFA-3/CD58)ELISA試劑(ji)盒規格：96T/48T

大鼠血栓(shuan)素(su)合成酶(TXAS)ELISA試劑(ji)盒 ，英(ying)文名： TXAS ELISA Kit

人補(bu)體(ti)7(C7)ELISA檢測試(shi)劑(ji)盒HumanCompleme7,C7ELISAKit 96T/48T

大鼠N-甲基-D-天門(men)冬(dong)(NMDA)受體(ti)亞單位(wei)2 免疫試(shi)劑(ji)盒 Rat N-Methyl-D-Aspaate (NMDA) Receptor 2 (2) ELISA Kit

腫瘤(liu)排斥(chi)抗原(yuan)gp96 1 變(bian)異體(ti)抗體(ti)

9/半(ban)抑制(zhi)劑9抗體(ti)

乳(ru)酸(suan)菌(jun)菌(jun)體(ti)表(biao)面(mian)蛋白抗(kang)體(ti)

mTOR相關(guan)調(tiao)控(kong)蛋白單克(ke)隆(long)抗(kang)體(ti)

線粒(li)體(ti)復合物(wu)NDUFS7蛋白抗(kang)體(ti)

白細(xi)胞(bao)介素(su)28抗體(ti)

磷酸(suan)化(hua)Ras蛋白特異鳥(niao)核(he)苷酸釋(shi)放(fang)因子(zi)3抗體(ti)

SK-N-FI細(xi)胞(bao)CD98重(zhong)鏈(lian)抗(kang)原(yuan)抗體(ti)

血(xue)影(ying)蛋白A鏈(lian)非紅細胞(bao)型(xing)抗體(ti)