SNU-1066細胞

公司(si)產(chan)品(pin)僅(jin)供(gong)科研(yan)研(yan)究(jiu)使用(yong)、不(bu)得(de)用(yong)於(yu)臨床診(zhen)斷！

1、細(xi)胞(bao)傳代(dai)：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)至覆蓋培養(yang)瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積時(shi)，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)的(de)培(pei)養(yang)液，用(yong) PBS 清洗(xi)細(xi)胞(bao)壹(yi)次；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化液(ye)約(yue) 1ml 至培養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置顯(xian)微(wei)鏡下觀察，待細胞(bao)回(hui)縮(suo)變圓(yuan)後加(jia)入 5ml 培養(yang)

液終(zhong)止(zhi)消化，再(zai)輕(qing)輕吹(chui)打(da)細胞(bao)使之脫落(luo)，然(ran)後將懸液轉(zhuan)移至 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄上清，沈(chen)澱(dian)細胞(bao)用(yong) 1-2ml 培(pei)養(yang)基重懸，然(ran)後按(an) 1:2 比(bi)例(li)進(jin)行(xing)分(fen)瓶(ping)傳代(dai)，最(zui)後放(fang)入 37℃，5%CO2細胞培養(yang)箱中培(pei)養(yang)；

2、細胞(bao)凍(dong)存(cun)：

1）細胞(bao)生長至覆蓋培養(yang)瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積時(shi)，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)的(de)培(pei)養(yang)液，用(yong) PBS 清洗(xi)細(xi)胞(bao)壹(yi)次；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化液(ye)約(yue) 1ml 至培養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置顯(xian)微(wei)鏡下觀察，待細胞(bao)回(hui)縮(suo)變圓(yuan)後加(jia)入培養(yang)液終(zhong)

止(zhi)消化，輕(qing)輕(qing)吹打細(xi)胞使之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然(ran)後將懸液轉(zhuan)移至 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用(yong)適(shi)量的(de)凍(dong)存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞(bao)，並放(fang)置於(yu)凍(dong)存(cun)管(guan)中(zhong)；

4）先(xian)將細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)管(guan)放(fang)置於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後將其(qi)移(yi)入-80℃過夜(ye)，24h 後轉(zhuan)入液氮中進(jin)行(xing)長(chang)期(qi)保存(cun)。使用(yong)程(cheng)序(xu)降溫(wen)盒可直接放入-80℃。

壹、商品(pin)介紹(shao)：

二、細胞(bao)培(pei)養(yang)操(cao)作

1) 復(fu)蘇(su)細(xi)胞：以(yi)下細胞(bao)培(pei)養(yang)凍(dong)存(cun)處(chu)理(li)僅(jin)供(gong)參(can)考，具(ju)體操(cao)作步驟(zhou)以(yi)隨(sui)貨(huo)產(chan)品(pin)說(shuo)明書為主。將含有1 mL細(xi)胞(bao)懸液的(de)凍(dong)存(cun)管(guan)在(zai) 37℃水(shui)浴(yu)中(zhong)迅速(su)搖晃(huang)解(jie)凍(dong)，加(jia)4 mL培(pei)養(yang)基混合(he)均勻(yun)。在(zai)1000 rpm條件(jian)下(xia)離(li)心(xin)3 min，棄去上清液(ye)，加1-2 mL培(pei)養(yang)基後吹(chui)勻(yun)。然(ran)後將所(suo)有(you)細胞(bao)懸液加(jia)入含適(shi)量培(pei)養(yang)基的(de)培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)培(pei)養(yang)過夜(ye)（或將細(xi)胞(bao)懸液加(jia)入10 cm皿(min)中，加入約8 mL培養(yang)基，培(pei)養(yang)過夜(ye)）。第(di)二天(tian)換(huan)液並(bing)檢查(zha)細(xi)胞(bao)密度。

2) 細胞(bao)傳代(dai)：如(ru)果(guo)細胞(bao)密度達 80%-90%，即可進(jin)行(xing)傳代(dai)培(pei)養(yang)。

a、棄去培養(yang)上清，用(yong)不(bu)含鈣、鎂(mei)離(li)子的(de)PBS潤洗(xi)細(xi)胞(bao)1-2次。

b、加1 mL消(xiao)化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培養(yang)瓶(ping)中(zhong)，使(shi)消(xiao)化液(ye)浸(jin)潤所有細胞，將培(pei)養(yang)瓶(ping)置於(yu)37℃培養(yang)箱中消(xiao)化1-2 min（視(shi)細(xi)胞情況而(er)定(ding)），然(ran)後在(zai)顯微(wei)鏡下觀察細胞消(xiao)化情(qing)況(kuang)，若細胞大(da)部分(fen)變(bian)圓(yuan)並脫(tuo)落(luo)，迅速(su)拿(na)回操(cao)作臺(tai)，輕(qing)敲幾下培(pei)養(yang)瓶(ping)後加(jia)2-3ml培(pei)養(yang)基終(zhong)止(zhi)消化。輕(qing)輕(qing)打勻(yun)後裝(zhuang)入無菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄去上清液(ye)，補加(jia)1-2 mL培養(yang)液後吹(chui)勻(yun)。

c、將細(xi)胞(bao)懸液按(an)1:2比例(li)分(fen)到(dao)新的(de)含8 mL培養(yang)基的(de)新皿(min)中或者瓶(ping)中(zhong)，置於(yu)培養(yang)箱中培(pei)養(yang)。 3) 細胞(bao)凍(dong)存(cun)：待細(xi)胞生長(chang)狀(zhuang)態(tai)良(liang)好(hao)時(shi)，可進(jin)行(xing)細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)。下面(mian) T25 瓶(ping)為(wei)例(li)；a、收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)及(ji)細胞(bao)培養(yang)液，裝(zhuang)入無菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離(li)心(xin)4 min，棄去上清液(ye)，用(yong)PBS清洗(xi)壹(yi)遍(bian)，棄(qi)盡(jin)PBS，進(jin)行(xing)細(xi)胞(bao)計(ji)數(shu)。

b、根據細胞(bao)數量加入無血清細(xi)胞凍(dong)存(cun)液，使(shi)細胞密(mi)度5×106~1×107/mL，輕輕(qing)混勻(yun)，每支(zhi)凍(dong)存(cun)管(guan)凍(dong)存(cun)1mL細胞(bao)懸液，註意(yi)凍(dong)存(cun)管(guan)做好(hao)標識。將凍(dong)存(cun)管(guan)放(fang)入-80℃冰箱，24 h後轉(zhuan)入液氮灌(guan)儲(chu)存(cun)。記(ji)錄(lu)凍(dong)存(cun)管(guan)位(wei)置以(yi)便下次拿(na)取。

三、培養(yang)註意(yi)事項 

1. 收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後首(shou)先(xian)觀察(cha)細胞瓶(ping)是(shi)否(fou)完(wan)好(hao)，培養(yang)液是(shi)否(fou)有(you)漏(lou)液(ye)、渾濁(zhuo)等現(xian)象(xiang)，若有上述現(xian)象(xiang) 發生請(qing)及(ji)時(shi)和(he)我們(men)聯(lian)系(xi)。

2. 仔(zai)細(xi)閱(yue)讀(du)細(xi)胞說明書(shu)，了(le)解(jie)細胞(bao)相關(guan)信息，如(ru)細(xi)胞形態(tai)、所(suo)用(yong)培(pei)養(yang)基、血清比(bi)例(li)、所(suo)需(xu) 細(xi)胞(bao)因子等，確保細胞(bao)培(pei)養(yang)條件(jian)壹(yi)致，若由於(yu)培養(yang)條件(jian)不(bu)壹致(zhi)而(er)導致細(xi)胞(bao)出現(xian)問(wen)題，責任由 客戶(hu)自(zi)行(xing)承(cheng)擔(dan)。

3. 用(yong) 75%酒(jiu)精擦(ca)拭(shi)細(xi)胞(bao)瓶(ping)表(biao)面(mian)，顯(xian)微(wei)鏡下觀察細胞狀(zhuang)態(tai)。因運(yun)輸問(wen)題，部(bu)分細(xi)胞由於(yu)溫度 變化及(ji)劇烈(lie)碰(peng)亡破(po)碎形成碎片，是(shi)正(zheng)常現(xian)象(xiang)。觀(guan)察(cha)好(hao)細胞(bao)狀態(tai)後，75%酒(jiu)精(jing)消(xiao)毒瓶(ping)壁將 T25 瓶(ping)置於(yu) 37℃培養(yang)箱放置 2-4h。

4. 貼(tie)壁細胞可以(yi)消化，懸浮(fu)細(xi)胞(bao)直(zhi)接混勻(yun)收集(ji)細胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄上 清。加(jia) 5 mL PBS 重懸細胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用(yong)新鮮的(de)培(pei)養(yang)基重懸 細胞(bao)，並接種到(dao)新的(de)培(pei)養(yang)瓶(ping)或(huo)培(pei)養(yang)皿(min)中，置於(yu)培養(yang)箱中進(jin)行(xing)培(pei)養(yang)。

5. 請(qing)客戶(hu)用(yong)相同(tong)條件(jian)的(de)培(pei)養(yang)基用(yong)於(yu)細胞(bao)培養(yang)。

6. 建議(yi)客戶(hu)收(shou)到(dao)細(xi)胞後前(qian) 3 天(tian)各拍(pai)幾(ji)張細胞照(zhao)片，記(ji)錄(lu)細(xi)胞(bao)狀態(tai)，便於(yu)和(he)我司(si)技術部(bu)溝(gou)通 交流(liu)。由於(yu)運輸的(de)原(yuan)因，個別敏(min)感細胞(bao)會出現(xian)不穩(wen)定(ding)的(de)情(qing)況，請(qing)及(ji)時(shi)和(he)我們(men)聯(lian)系(xi)，告知(zhi)細(xi)胞(bao) 的(de)具(ju)體情況(kuang)，以(yi)便我們(men)的(de)技術人(ren)員(yuan)跟蹤(zong)回訪直至問(wen)題解(jie)決。

7. 該(gai)細胞(bao)僅(jin)供(gong)科研(yan)使(shi)用(yong)。

8. 備(bei)註：運(yun)輸用(yong)的(de)培(pei)養(yang)基 (灌(guan)液培(pei)養(yang)基) 不(bu)能再(zai)用(yong)來培(pei)養(yang)細胞(bao)，請(qing)換用(yong)按(an)照說明書細胞培 養(yang)條件(jian)新配制的(de)培(pei)養(yang)基來培(pei)養(yang)細胞(bao)。     收(shou)到細(xi)胞(bao)後第(di)壹次傳代(dai)建(jian)議(yi) 1：2 傳代(dai) 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳代(dai)就(jiu)是 1 個 T25 瓶(ping)傳 2 個 T25 瓶(ping)或(huo)者 2 個 6cm 皿(min)。不是 1 個 T25 瓶(ping)傳 2 個10cm 皿(min)。

公司(si)正(zheng)在(zai)出售(shou)的(de)產(chan)品：

同(tong)位(wei)素(su)(PCR產(chan)物)蛋白(bai)結(jie)合(he)DNA酶(mei)足(zu)跡法分析(xi)試劑盒(he)10次

CLIAKitforHumanox-LDLELISAKit人(ren)氧(yang)化低(di)密度脂蛋白(bai)規(gui)格：48T/96T

ELISAKitLFA-3/CD58大(da)鼠淋(lin)巴(ba)細胞功(gong)能相關(guan)抗原3規(gui)格：48T/96T

大(da)鼠層(ceng)粘(zhan)蛋白(bai)α1(LAMA1)ELISA試劑盒(he) ，英(ying)文(wen)名： LAMA1 ELISA Kit

Mouse N- acetyl beta -D- Glucosaminidase (NAG) ELISA Kit 小(xiao)鼠(shu)N-乙(yi)酰-β-D-氨基(ji)糖苷酶(mei)(NAG)ELISA試劑盒(he)

Humansecretoryleukocyteproteaseinhibitor,SLPIELISA試劑盒(he)人(ren)分(fen)泌性(xing)白細胞抑制因子(SLPI)ELISA試劑盒(he)規(gui)格：96T/48T

ELISAKitVEGF小(xiao)鼠(shu)血管(guan)內皮細胞(bao)生長(chang)因子規格：48T/96T

HumancardiacoponinⅠ，cTn-ⅠELISAKit人(ren)(cTn-Ⅰ)ELISA試劑盒(he)規(gui)格：96T/48T

人(ren)皰(pao)疹抗體(ti)(HG)ELISA 試劑盒(he) 96T/48T 試劑盒(he) 組裝/原(yuan)裝(zhuang)

小(xiao)鼠(shu)酰(xian)胺腺嘌呤二核苷酸(suan)0酸(suan)(NADPH)免疫(yi)試劑盒(he) Mouse nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH ELISA Kit

大(da)鼠NAD(P)H脫(tuo)氫(qing)酶(mei)(醌(kun))1(NQO1)免疫(yi)試劑盒(he) Rat NAD(P)H dehydrogenase[quinone]1(NQO1)ELISA kit

CLIAKitforsMHC-2(Mousesolublemyosinheavychain2)ELISAKit小(xiao)鼠(shu)可溶(rong)性(xing)肌球蛋白(bai)重鏈規格：48T/96T

乳(ru)酸(suan)桿(gan)菌(jun)(Lactobacillus)鑒(jian)定(ding)16SrDNAPCR擴增(zeng)檢測(ce)試劑盒(he)20次

ELISAKitGDNF人(ren)膠質(zhi)細(xi)胞(bao)系(xi)來源(yuan)的(de)神(shen)經營(ying)養(yang)因子規格：48T/96T

大(da)鼠血清總(zong)補體(ti)(CH50)ELISA 試劑盒(he) 96T/48T 試劑盒(he) 組裝/原(yuan)裝(zhuang)

腫(zhong)瘤相關(guan)抗原L6抗(kang)體(ti)

C單(dan)克(ke)隆(long)抗(kang)體(ti)（檢測(ce)）

乳(ru)糖神(shen)經酰胺4-α-半(ban)乳(ru)糖基(ji)轉(zhuan)移酶(mei)抗(kang)體

MX1抗(kang)體(ti)

線(xian)粒(li)體核糖體(ti)蛋白(bai)L12抗(kang)體(ti)

白(bai)細(xi)胞介素(su)36γ抗(kang)體(ti)

磷酸(suan)化Rho鳥(niao)苷酸(suan)交換(huan)因子2抗(kang)體(ti)

SNU-1066細胞CDK5和(he)ABL1酶(mei)底(di)物1抗體

牙本質(zhi)基(ji)質蛋白(bai)1抗(kang)體