SUP-T1細胞(bao)

公(gong)司產(chan)品(pin)僅供(gong)科(ke)研(yan)研究使(shi)用(yong)、不(bu)得用(yong)於(yu)臨床(chuang)診(zhen)斷(duan)！

壹(yi)、商(shang)品(pin)介(jie)紹(shao)：

1、細胞(bao)傳(chuan)代：

1）細胞(bao)生(sheng)長(chang)至覆(fu)蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶的 80%面積時，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的培(pei)養(yang)液(ye)，用(yong) PBS 清洗(xi)細胞(bao)壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化液(ye)約(yue) 1ml 至培(pei)養(yang)瓶中，倒置顯(xian)微鏡下(xia)觀察，待(dai)細胞(bao)回(hui)縮(suo)變(bian)圓後加入 5ml 培(pei)養(yang)

液(ye)終止消(xiao)化，再(zai)輕輕(qing)吹打細胞(bao)使(shi)之脫(tuo)落，然後將懸液轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）棄上(shang)清，沈澱(dian)細胞(bao)用(yong) 1-2ml 培(pei)養(yang)基(ji)重(zhong)懸，然後按 1:2 比(bi)例進行(xing)分瓶傳(chuan)代，最(zui)後放入 37℃，5%CO2細胞(bao)培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)培(pei)養(yang)；

2、細胞(bao)凍(dong)存(cun)：

1）細胞(bao)生(sheng)長(chang)至覆(fu)蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶的 80%面積時，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的培(pei)養(yang)液(ye)，用(yong) PBS 清洗(xi)細胞(bao)壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化液(ye)約(yue) 1ml 至培(pei)養(yang)瓶中，倒置顯(xian)微鏡下(xia)觀察，待(dai)細胞(bao)回(hui)縮(suo)變(bian)圓後加入培(pei)養(yang)液(ye)終

止消(xiao)化，輕(qing)輕吹打細胞(bao)使(shi)之脫(tuo)落，然後將懸液轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）用(yong)適(shi)量的(de)凍(dong)存液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞(bao)，並(bing)放置於(yu)凍存(cun)管中(zhong)；

4）先將細胞(bao)凍(dong)存(cun)管放置於(yu)-20℃ 1.5h，然後將其(qi)移(yi)入-80℃過(guo)夜，24h 後轉入液(ye)氮(dan)中進(jin)行(xing)長(chang)期(qi)保(bao)存。使(shi)用(yong)程(cheng)序(xu)降(jiang)溫盒(he)可(ke)直(zhi)接(jie)放入-80℃。

二(er)、細胞(bao)培(pei)養(yang)操(cao)作

1) 復蘇(su)細胞(bao)：以(yi)下(xia)細胞(bao)培(pei)養(yang)凍(dong)存(cun)處理僅供(gong)參考(kao)，具體(ti)操(cao)作步(bu)驟(zhou)以(yi)隨(sui)貨產(chan)品(pin)說(shuo)明(ming)書為主(zhu)。將含有1 mL細胞(bao)懸液的(de)凍(dong)存管在 37℃水(shui)浴中(zhong)迅(xun)速搖晃解(jie)凍，加4 mL培(pei)養(yang)基(ji)混合(he)均(jun)勻。在1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離心3 min，棄去(qu)上(shang)清液，加1-2 mL培(pei)養(yang)基(ji)後吹勻。然後將所(suo)有細胞(bao)懸液加入含適(shi)量培(pei)養(yang)基(ji)的(de)培(pei)養(yang)瓶中培(pei)養(yang)過(guo)夜（或(huo)將(jiang)細胞(bao)懸液加入10 cm皿(min)中(zhong)，加入約(yue)8 mL培(pei)養(yang)基(ji)，培(pei)養(yang)過(guo)夜）。第(di)二(er)天(tian)換液並(bing)檢(jian)查細胞(bao)密(mi)度(du)。

2) 細胞(bao)傳(chuan)代：如(ru)果(guo)細胞(bao)密(mi)度(du)達(da) 80%-90%，即可(ke)進(jin)行(xing)傳(chuan)代培(pei)養(yang)。

a、棄去(qu)培(pei)養(yang)上(shang)清，用(yong)不(bu)含鈣(gai)、鎂離子(zi)的PBS潤(run)洗(xi)細胞(bao)1-2次(ci)。

b、加1 mL消(xiao)化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養(yang)瓶中，使(shi)消(xiao)化液(ye)浸潤(run)所有細胞(bao)，將(jiang)培(pei)養(yang)瓶置於(yu)37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化1-2 min（視(shi)細胞(bao)情(qing)況而定），然(ran)後在顯(xian)微鏡下(xia)觀察細胞(bao)消(xiao)化情(qing)況，若細胞(bao)大(da)部分變(bian)圓並(bing)脫(tuo)落，迅(xun)速拿(na)回(hui)操(cao)作臺(tai)，輕(qing)敲(qiao)幾(ji)下(xia)培(pei)養(yang)瓶後加2-3ml培(pei)養(yang)基(ji)終止消(xiao)化。輕(qing)輕打勻後裝(zhuang)入無菌(jun)離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去(qu)上(shang)清液，補(bu)加1-2 mL培(pei)養(yang)液(ye)後吹勻。

c、將細胞(bao)懸液按(an)1:2比(bi)例分到(dao)新(xin)的(de)含8 mL培(pei)養(yang)基(ji)的(de)新(xin)皿(min)中或者(zhe)瓶中，置於(yu)培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)培(pei)養(yang)。 3) 細胞(bao)凍(dong)存(cun)：待(dai)細胞(bao)生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態良好(hao)時，可(ke)進(jin)行(xing)細胞(bao)凍(dong)存(cun)。下(xia)面 T25 瓶為例；a、收(shou)集細胞(bao)及(ji)細胞(bao)培(pei)養(yang)液(ye)，裝(zhuang)入無菌(jun)離心管中，1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離心4 min，棄去(qu)上(shang)清液，用(yong)PBS清洗(xi)壹(yi)遍，棄盡(jin)PBS，進行(xing)細胞(bao)計數(shu)。

b、根(gen)據(ju)細胞(bao)數(shu)量加入無血(xue)清細胞(bao)凍(dong)存(cun)液，使(shi)細胞(bao)密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕混勻，每支凍存(cun)管凍存(cun)1mL細胞(bao)懸液，註意(yi)凍(dong)存管(guan)做(zuo)好(hao)標識。將凍存管(guan)放入-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後轉入液(ye)氮(dan)灌儲(chu)存(cun)。記(ji)錄凍存管(guan)位置以(yi)便下(xia)次(ci)拿(na)取(qu)。

三、培(pei)養(yang)註意(yi)事(shi)項 

1. 收(shou)到細胞(bao)後首先觀察細胞(bao)瓶是(shi)否(fou)完(wan)好(hao)，培(pei)養(yang)液(ye)是(shi)否(fou)有漏液、渾(hun)濁等(deng)現象(xiang)，若有上(shang)述現(xian)象 發(fa)生(sheng)請及時和(he)我(wo)們聯系。

2. 仔(zai)細閱(yue)讀(du)細胞(bao)說(shuo)明(ming)書，了解(jie)細胞(bao)相關信(xin)息(xi)，如細胞(bao)形(xing)態、所用(yong)培(pei)養(yang)基(ji)、血(xue)清比(bi)例、所需(xu) 細胞(bao)因(yin)子(zi)等，確(que)保(bao)細胞(bao)培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)壹(yi)致(zhi)，若由(you)於(yu)培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)不(bu)壹(yi)致(zhi)而導致細胞(bao)出現問題(ti)，責(ze)任(ren)由(you) 客戶自行(xing)承(cheng)擔。

3. 用(yong) 75%酒精(jing)擦(ca)拭細胞(bao)瓶表面，顯(xian)微鏡下(xia)觀察細胞(bao)狀(zhuang)態。因(yin)運輸(shu)問題(ti)，部分細胞(bao)由(you)於(yu)溫度(du) 變(bian)化及(ji)劇烈碰亡破(po)碎(sui)形(xing)成碎片(pian)，是(shi)正(zheng)常(chang)現象(xiang)。觀察好(hao)細胞(bao)狀(zhuang)態後，75%酒精(jing)消(xiao)毒瓶壁(bi)將(jiang) T25 瓶置於(yu) 37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)放置 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細胞(bao)可(ke)以(yi)消(xiao)化，懸浮(fu)細胞(bao)直(zhi)接(jie)混勻收(shou)集細胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上(shang) 清。加 5 mL PBS 重懸細胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用(yong)新(xin)鮮的培(pei)養(yang)基(ji)重(zhong)懸 細胞(bao)，並(bing)接(jie)種到新(xin)的(de)培(pei)養(yang)瓶或培(pei)養(yang)皿(min)中(zhong)，置於(yu)培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)進(jin)行(xing)培(pei)養(yang)。

5. 請(qing)客戶用(yong)相同條(tiao)件(jian)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)用(yong)於(yu)細胞(bao)培(pei)養(yang)。

6. 建(jian)議(yi)客戶收(shou)到細胞(bao)後前 3 天(tian)各拍(pai)幾(ji)張細胞(bao)照片(pian)，記(ji)錄(lu)細胞(bao)狀(zhuang)態，便於(yu)和(he)我(wo)司(si)技術部溝通 交(jiao)流(liu)。由(you)於(yu)運輸(shu)的原因(yin)，個別敏感細胞(bao)會(hui)出現不(bu)穩(wen)定的(de)情況，請及(ji)時和(he)我(wo)們聯系，告知細胞(bao) 的(de)具體(ti)情(qing)況，以(yi)便我們的技術人(ren)員跟(gen)蹤回訪(fang)直(zhi)至問題(ti)解(jie)決(jue)。

7. 該(gai)細胞(bao)僅供(gong)科(ke)研(yan)使(shi)用(yong)。

8. 備(bei)註：運(yun)輸(shu)用(yong)的(de)培(pei)養(yang)基(ji) (灌液培(pei)養(yang)基(ji)) 不(bu)能(neng)再用(yong)來培(pei)養(yang)細胞(bao)，請(qing)換(huan)用(yong)按(an)照說(shuo)明(ming)書細胞(bao)培(pei) 養(yang)條(tiao)件(jian)新(xin)配制的(de)培(pei)養(yang)基(ji)來培(pei)養(yang)細胞(bao)。     收(shou)到細胞(bao)後第壹(yi)次(ci)傳(chuan)代建(jian)議(yi) 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳(chuan)代就是(shi) 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個 T25 瓶或者(zhe) 2 個 6cm 皿。不是(shi) 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個10cm 皿。

公(gong)司正(zheng)在出售(shou)的(de)產(chan)品(pin)：

CLIAKitforConA(HumanconcanavalinA)ELISAKit人(ren)刀(dao)A規(gui)格：48T/96T

RatdopamineD2receptor,D2RELISAKit 大(da)鼠(shu)多(duo)巴(ba)胺D2受(shou)體(ti)(D2R)ELISA試(shi)劑盒(he) 96T/48T 進(jin)口(kou)分(fen)裝(zhuang)

細胞(bao)乙(yi)脫(tuo)氫(qing)酶3活性(xing)熒(ying)光(guang)定量檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒(he)20次(ci)

RatcoagulationfactorⅧrelatedaigen,FⅧ-AgELISAKit大(da)鼠(shu)Ⅷ相關抗(kang)原(FⅧ-Ag)ELISA試(shi)劑盒(he)規格：96T/48T

大(da)鼠(shu)表(biao)面活性(xing)物(wu)質關(guan)聯蛋白A(SPA)ELISA試(shi)劑盒(he) ，英(ying)文名(ming)： SPA ELISA Kit

轉(zhuan)基(ji)因(yin)植物(wu)NPTⅡ基(ji)因(yin)檢測(ce)試(shi)劑盒(he)(PCR-熒(ying)光(guang)探(tan)針法) 48T

HumansolubleendothelialproteinCreceptor,sEPCRELISA試(shi)劑盒(he)人可(ke)溶性(xing)血(xue)管內(nei)皮細胞(bao)蛋白C受(shou)體(ti)(sEPCR)ELISA試(shi)劑盒(he)規格：96T/48T

ELISAKitVD2小鼠D2規(gui)格：48T/96T

HumanBradykinin，BKELISAKit人(ren)血(xue)管(guan)舒(shu)緩(huan)激肽(BK)ELISA試(shi)劑盒(he)規格：96T/48T

人(ren)腦(nao)素/腦(nao)尿肽(BNP)ELISA 試(shi)劑盒(he) 96T/48T 試(shi)劑盒(he) 組裝(zhuang)/原裝(zhuang)

人(ren)細胞(bao)色素P450c21A/21-羥(qiang)化酶(mei)(CYP21A)免疫試(shi)劑盒(he) Human Cytochrome P450c21/21-hydroxylase,CYP21A ELISA Kit

脯(pu)酸(suan)(PRO)含量測(ce)試(shi)盒(he) 可(ke)見分(fen)光(guang)光(guang)度(du)法(fa) 可(ke)見分(fen)光(guang)光(guang)度(du)法(fa)

RatN-terminalpro-brainnaiureticpeptide,-proBNPELISA試(shi)劑盒(he)大(da)鼠(shu)N端前腦(nao)素(-proBNP)ELISA試(shi)劑盒(he)規格：96T/48T

HumanHomocysteicacid,HcyELISA試(shi)劑盒(he)人同型(xing)半胱(guang)(Hcy)ELISA試(shi)劑盒(he)規格：96T/48T

HumanMacrophage-DerivedChemokine，MDCELISAKit人(ren)巨(ju)噬細胞(bao)來源的(de)趨化因(yin)子(zi)(MDC/CCL22)ELISA試(shi)劑盒(he)規格：96T/48T

周期(qi)素A2單(dan)克(ke)隆體(ti)

過(guo)氧(yang)化物(wu)酶體(ti)合(he)成因(yin)子(zi)14抗(kang)體(ti)

軟(ruan)骨(gu)外胚(pei)層發(fa)育(yu)不良相關蛋白抗(kang)體(ti)

NBPF11蛋白抗(kang)體(ti)

線粒(li)體(ti)核(he)糖(tang)體(ti)蛋白S5抗(kang)體(ti)

半(ban)乳(ru)糖(tang)腦(nao)苷脂酶抗(kang)體(ti)

磷(lin)酸(suan)化表(biao)皮生(sheng)長(chang)因(yin)子(zi)受體(ti)抗(kang)體(ti)

SUP-T1細胞(bao)CREB轉(zhuan)錄共(gong)激(ji)活因(yin)子(zi)TORC2抗(kang)體(ti)

陽(yang)離子(zi)通道相關蛋白2抗(kang)體(ti)