UACC-3199細(xi)胞(bao)

公(gong)司產(chan)品僅供科研(yan)研(yan)究(jiu)使用、不(bu)得(de)用於(yu)臨(lin)床診(zhen)斷(duan)！

壹、商品介(jie)紹：

1、細胞(bao)傳(chuan)代：

1）細胞(bao)生(sheng)長至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培養瓶的 80%面(mian)積時(shi)，棄 25cm2培養瓶中(zhong)的培養液(ye)，用 PBS 清洗細胞(bao)壹次(ci)；

2）添加 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約 1ml 至(zhi)培養瓶中(zhong)，倒(dao)置顯微(wei)鏡下(xia)觀察，待細胞(bao)回(hui)縮(suo)變圓後(hou)加(jia)入(ru) 5ml 培養

液(ye)終(zhong)止消化(hua)，再輕輕(qing)吹打細胞(bao)使(shi)之(zhi)脫落(luo)，然(ran)後(hou)將懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄上清，沈澱(dian)細胞(bao)用 1-2ml 培養基(ji)重(zhong)懸(xuan)，然(ran)後(hou)按(an) 1:2 比(bi)例(li)進行(xing)分(fen)瓶傳(chuan)代，最(zui)後(hou)放入(ru) 37℃，5%CO2細胞(bao)培養箱中培養；

2、細(xi)胞(bao)凍(dong)存：

1）細胞(bao)生(sheng)長至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培養瓶的 80%面(mian)積時(shi)，棄 25cm2培養瓶中(zhong)的培養液(ye)，用 PBS 清洗細胞(bao)壹次(ci)；

2）添加 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約 1ml 至(zhi)培養瓶中(zhong)，倒(dao)置顯微(wei)鏡下(xia)觀察，待細胞(bao)回(hui)縮(suo)變圓後(hou)加(jia)入(ru)培養液(ye)終(zhong)

止消化(hua)，輕(qing)輕吹打細胞(bao)使(shi)之(zhi)脫落(luo)，然(ran)後(hou)將懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞(bao)，並(bing)放置於(yu)凍存管(guan)中(zhong)；

4）先(xian)將細(xi)胞(bao)凍(dong)存管(guan)放置於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後(hou)將其(qi)移(yi)入(ru)-80℃過夜，24h 後(hou)轉(zhuan)入(ru)液氮(dan)中(zhong)進(jin)行(xing)長期(qi)保存。使用程(cheng)序(xu)降溫(wen)盒(he)可直(zhi)接(jie)放入(ru)-80℃。

二(er)、細(xi)胞(bao)培養操(cao)作(zuo)

1) 復(fu)蘇細胞(bao)：以(yi)下(xia)細(xi)胞(bao)培養凍(dong)存處理僅供參考(kao)，具(ju)體操(cao)作(zuo)步驟(zhou)以隨貨(huo)產(chan)品說明書為(wei)主(zhu)。將含有(you)1 mL細胞(bao)懸(xuan)液(ye)的凍存管(guan)在(zai) 37℃水浴中迅速搖(yao)晃解凍(dong)，加(jia)4 mL培養基(ji)混(hun)合(he)均(jun)勻(yun)。在(zai)1000 rpm條(tiao)件(jian)下離(li)心(xin)3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養基(ji)後(hou)吹勻(yun)。然(ran)後(hou)將所(suo)有(you)細胞(bao)懸(xuan)液(ye)加(jia)入(ru)含適量培養基(ji)的培養瓶中(zhong)培養過(guo)夜（或將細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)加(jia)入(ru)10 cm皿中，加入(ru)約8 mL培養基(ji)，培養過(guo)夜）。第(di)二(er)天(tian)換(huan)液(ye)並檢(jian)查(zha)細胞(bao)密度。

2) 細(xi)胞(bao)傳(chuan)代：如果(guo)細(xi)胞(bao)密度達 80%-90%，即(ji)可(ke)進(jin)行(xing)傳(chuan)代培養。

a、棄(qi)去培養上清，用不(bu)含鈣(gai)、鎂離子(zi)的PBS潤(run)洗細(xi)胞(bao)1-2次(ci)。

b、加1 mL消化(hua)液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培養瓶中(zhong)，使(shi)消(xiao)化液浸(jin)潤(run)所(suo)有(you)細胞(bao)，將培養瓶置於(yu)37℃培養箱中消(xiao)化1-2 min（視(shi)細胞(bao)情(qing)況(kuang)而(er)定），然(ran)後(hou)在(zai)顯微(wei)鏡下(xia)觀察細(xi)胞(bao)消(xiao)化(hua)情(qing)況，若細胞(bao)大部(bu)分(fen)變圓並(bing)脫落(luo)，迅(xun)速(su)拿回(hui)操(cao)作(zuo)臺(tai)，輕(qing)敲(qiao)幾(ji)下(xia)培養瓶後(hou)加(jia)2-3ml培養基(ji)終(zhong)止消化(hua)。輕(qing)輕打勻(yun)後(hou)裝(zhuang)入(ru)無菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄去上清液，補(bu)加(jia)1-2 mL培養液(ye)後(hou)吹勻(yun)。

c、將細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)按(an)1:2比(bi)例(li)分到新的含8 mL培養基(ji)的新皿中或者瓶中(zhong)，置於(yu)培養箱中培養。 3) 細(xi)胞(bao)凍(dong)存：待細胞(bao)生(sheng)長狀(zhuang)態(tai)良好(hao)時，可進(jin)行(xing)細(xi)胞(bao)凍(dong)存。下面(mian) T25 瓶為(wei)例(li)；a、收(shou)集(ji)細胞(bao)及細胞(bao)培養液(ye)，裝(zhuang)入(ru)無菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件(jian)下離(li)心(xin)4 min，棄去上清液，用PBS清洗壹遍(bian)，棄盡(jin)PBS，進行(xing)細(xi)胞(bao)計數。

b、根據(ju)細胞(bao)數量加入(ru)無血(xue)清細胞(bao)凍(dong)存液，使(shi)細胞(bao)密度5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混勻(yun)，每(mei)支凍存管(guan)凍(dong)存1mL細胞(bao)懸(xuan)液(ye)，註意凍(dong)存管(guan)做(zuo)好(hao)標(biao)識。將凍(dong)存管(guan)放入(ru)-80℃冰箱，24 h後(hou)轉(zhuan)入(ru)液氮(dan)灌(guan)儲存。記錄(lu)凍存管(guan)位(wei)置以便下次(ci)拿取(qu)。

三、培養註意事(shi)項(xiang) 

1. 收(shou)到(dao)細胞(bao)後(hou)首先觀(guan)察細(xi)胞(bao)瓶是(shi)否(fou)完(wan)好，培養液(ye)是(shi)否(fou)有(you)漏(lou)液、渾(hun)濁等現(xian)象，若有(you)上述現象 發(fa)生(sheng)請及時和(he)我(wo)們聯系(xi)。

2. 仔(zai)細閱讀細(xi)胞(bao)說明書，了解細(xi)胞(bao)相(xiang)關(guan)信(xin)息(xi)，如(ru)細胞(bao)形態、所(suo)用培養基(ji)、血(xue)清比(bi)例(li)、所(suo)需(xu) 細胞(bao)因子(zi)等(deng)，確(que)保細胞(bao)培養條(tiao)件(jian)壹致，若由(you)於(yu)培養條(tiao)件(jian)不(bu)壹致而(er)導致細胞(bao)出(chu)現(xian)問(wen)題(ti)，責任(ren)由(you) 客戶自(zi)行(xing)承擔(dan)。

3. 用 75%酒精(jing)擦拭細胞(bao)瓶表(biao)面(mian)，顯微(wei)鏡下(xia)觀察細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)。因運輸(shu)問(wen)題(ti)，部(bu)分(fen)細(xi)胞(bao)由(you)於(yu)溫度 變化及劇烈碰(peng)亡(wang)破碎(sui)形成碎(sui)片(pian)，是(shi)正(zheng)常(chang)現象(xiang)。觀察好(hao)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)後(hou)，75%酒(jiu)精(jing)消(xiao)毒瓶壁將 T25 瓶置於(yu) 37℃培養箱放置 2-4h。

4. 貼壁細(xi)胞(bao)可(ke)以(yi)消(xiao)化，懸(xuan)浮細胞(bao)直(zhi)接(jie)混勻(yun)收(shou)集(ji)細胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸(xuan)細(xi)胞(bao)，再 900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，用新鮮的培養基(ji)重(zhong)懸(xuan) 細(xi)胞(bao)，並(bing)接(jie)種(zhong)到新的培養瓶或(huo)培養皿中，置於(yu)培養箱中進(jin)行(xing)培養。

5. 請客戶用相同(tong)條(tiao)件(jian)的培養基(ji)用於(yu)細胞(bao)培養。

6. 建(jian)議(yi)客(ke)戶收(shou)到(dao)細胞(bao)後(hou)前 3 天各(ge)拍幾(ji)張細(xi)胞(bao)照片(pian)，記(ji)錄(lu)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)，便(bian)於(yu)和我(wo)司技(ji)術部(bu)溝通 交(jiao)流。由(you)於(yu)運輸(shu)的原(yuan)因，個(ge)別敏(min)感(gan)細胞(bao)會出(chu)現(xian)不(bu)穩(wen)定(ding)的情況，請及時和(he)我(wo)們聯系(xi)，告(gao)知(zhi)細(xi)胞(bao) 的具體情況，以(yi)便(bian)我(wo)們的技(ji)術人員跟蹤(zong)回(hui)訪(fang)直(zhi)至(zhi)問(wen)題(ti)解決(jue)。

7. 該細(xi)胞(bao)僅供科研(yan)使(shi)用。

8. 備註：運輸(shu)用的培養基(ji) (灌(guan)液(ye)培養基(ji)) 不(bu)能(neng)再用來培養細(xi)胞(bao)，請換用按(an)照說明書細(xi)胞(bao)培 養條(tiao)件(jian)新配制的培養基(ji)來培養細(xi)胞(bao)。     收(shou)到(dao)細胞(bao)後(hou)第(di)壹次(ci)傳代建(jian)議(yi) 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註意：  1:2 傳(chuan)代就(jiu)是 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶或(huo)者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿。不(bu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿。

公(gong)司正在(zai)出(chu)售(shou)的產(chan)品：

Mouseα1-microglobulin,α1-MGELISAKit 小(xiao)鼠(shu)α1微(wei)球蛋白(α1-MG)ELISA試(shi)劑盒(he) 96T/48T 進(jin)口分裝(zhuang)

Mouse macrophage inflammatory protein 3 alpha (MIP-3 alpha /CCL20) ELISA Kit 小(xiao)鼠(shu)巨噬(shi)細胞(bao)炎(yan)性蛋(dan)白3α(MIP-3α/CCL20)ELISA試(shi)劑盒(he)

CLIAKitforHumanOncogeneProteinp190/bcr-ablELISAKit人(ren)癌(ai)基因蛋白質p190/bcr-abl規(gui)格：48T/96T

同(tong)位(wei)素蛋(dan)白結合反(fan)應試(shi)劑盒(he)20次(ci)

sPECAM-1大鼠(shu)可溶性血(xue)小(xiao)板(ban)內(nei)皮細胞(bao)粘(zhan)附(fu)分(fen)子(zi)1規(gui)格：48T/96T

小(xiao)鼠(shu)水通(tong)道(dao)蛋白2(AQP-2)免(mian)疫試(shi)劑盒(he) Mouse Aquaporin 2,AQP-2 ELISA Kit

馬(ma)特(te)定(ding)基因序列(lie)(Hor)檢(jian)測(ce)試劑盒(he) 48T

HumansubstancePreceptor,SP-RELISA試(shi)劑盒(he)人P物(wu)質受(shou)體(ti)(SP-R)ELISA試(shi)劑盒(he)規(gui)格：96T/48T

ELISAKitGH小(xiao)鼠(shu)生(sheng)長因子(zi)規(gui)格：48T/96T

HumanAialNaiureticPeptide，ANPELISAKit人(ren)心(xin)肽(tai)(ANP)ELISA試(shi)劑盒(he)規(gui)格：96T/48T

大鼠(shu)血(xue)管(guan)緊(jin)張素(su)Ⅱ轉(zhuan)化酶(mei)(ACEⅡ)ELISA試(shi)劑盒(he) ，英文(wen)名(ming)： ACEⅡ ELISA Kit

人(ren)旋毛蟲(chong)抗體(ti)(ichinellaAb)ELISA檢(jian)測(ce)試劑盒(he)HumanichinellaaibodyELISAKit 96T/48T

大鼠(shu)c-fos 免(mian)疫試(shi)劑盒(he) Rat c-fos ELISA Kit

CLIAKitforsE-selectin(HumansolubleE-selectin)ELISAKit人(ren)可溶性E選(xuan)擇素(su)規(gui)格：48T/96T

素(su)蛋白結合反(fan)應試(shi)劑盒(he)20次(ci)

周(zhou)期素依(yi)賴性激(ji)酶(mei)11抗體(ti)

含脯(pu)突觸相(xiang)關(guan)蛋白相互作(zuo)用蛋白1抗體(ti)

三磷酸腺苷(gan)受(shou)體(ti)P2X5b抗體(ti)

NDUFS2抗體(ti)

線(xian)粒體外(wai)膜(mo)孔(kong)蛋(dan)白3/電(dian)壓依(yi)賴(lai)陰(yin)離(li)子(zi)通(tong)道蛋(dan)白3抗體(ti)

胞(bao)漿(jiang)動(dong)力蛋(dan)白中間鏈(lian)1抗體(ti)

磷酸化蛋(dan)白激酶(mei)AKT1抗體(ti)

UACC-3199細胞(bao)Cy5.5標記(ji)的巨噬(shi)細胞(bao)清道夫受體(ti)1抗體(ti)

液泡(pao)蛋白分選蛋(dan)白11抗體(ti)