MKN1細胞

公司產(chan)品(pin)僅供(gong)科(ke)研(yan)研(yan)究(jiu)使用、不得用於(yu)臨床(chuang)診斷(duan)！

壹(yi)、商(shang)品(pin)介紹(shao)：

1、細胞傳代：

1）細胞生(sheng)長至覆蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積(ji)時(shi)，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶(ping)中的(de)培(pei)養(yang)液(ye)，用 PBS 清(qing)洗(xi)細胞壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化液(ye)約 1ml 至培養(yang)瓶(ping)中，倒置(zhi)顯微(wei)鏡下觀(guan)察，待細胞回縮變圓(yuan)後加(jia)入 5ml 培(pei)養(yang)

液(ye)終止(zhi)消(xiao)化，再輕(qing)輕(qing)吹打細胞使之脫(tuo)落，然後將懸液(ye)轉移至 15ml 離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄上(shang)清(qing)，沈(chen)澱(dian)細胞用 1-2ml 培養(yang)基(ji)重懸，然後按 1:2 比(bi)例進行分(fen)瓶傳(chuan)代，最(zui)後放(fang)入 37℃，5%CO2細胞

培養(yang)箱(xiang)中培養(yang)；

2、細胞凍存：

1）細胞生(sheng)長至覆蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積(ji)時(shi)，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶(ping)中的(de)培(pei)養(yang)液(ye)，用 PBS 清(qing)洗(xi)細胞壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化液(ye)約 1ml 至培養(yang)瓶(ping)中，倒置(zhi)顯微(wei)鏡下觀(guan)察，待細胞回縮變圓(yuan)後加(jia)入培(pei)養(yang)液(ye)終

止(zhi)消(xiao)化，輕(qing)輕(qing)吹打細胞使之脫(tuo)落，然後將懸液(ye)轉移至 15ml 離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用適(shi)量的(de)凍存液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，並放(fang)置(zhi)於(yu)凍存管(guan)中(zhong)；

4）先(xian)將細胞凍存管(guan)放(fang)置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後將其移(yi)入-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後轉入液(ye)氮(dan)中進行長(chang)期(qi)保存。使用程序(xu)

降(jiang)溫盒可直接(jie)放(fang)入-80℃。

二(er)、細胞培養(yang)操(cao)作(zuo)

1) 復蘇(su)細胞：以下細胞培養(yang)凍存處(chu)理(li)僅(jin)供(gong)參(can)考(kao)，具(ju)體(ti)操(cao)作(zuo)步(bu)驟(zhou)以隨貨產品(pin)說(shuo)明書(shu)為(wei)主。將含有1 mL細胞懸液(ye)的(de)凍存管(guan)在(zai) 37℃水浴(yu)中迅(xun)速搖(yao)晃(huang)解凍，加(jia)4 mL培(pei)養(yang)基(ji)混合(he)均(jun)勻。在1000 rpm條(tiao)件(jian)下離(li)心3 min，棄去(qu)上清(qing)液(ye)，加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)基(ji)後吹勻。然後將所(suo)有細胞懸液(ye)加(jia)入含適(shi)量培(pei)養(yang)基(ji)的(de)培(pei)養(yang)瓶(ping)中培養(yang)過(guo)夜(ye)（或(huo)將細胞懸液(ye)加(jia)入10 cm皿(min)中，加(jia)入約8 mL培(pei)養(yang)基(ji)，培養(yang)過(guo)夜(ye)）。第二天換液(ye)並檢(jian)查(zha)細胞密度。

2) 細胞傳代：如果(guo)細胞密度達 80%-90%，即(ji)可進行傳(chuan)代(dai)培養(yang)。

a、棄去(qu)培養(yang)上(shang)清(qing)，用不含鈣、鎂(mei)離子(zi)的(de)PBS潤(run)洗(xi)細胞1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養(yang)瓶(ping)中，使消(xiao)化液(ye)浸潤(run)所(suo)有細胞，將培養(yang)瓶(ping)置(zhi)於(yu)37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)中消(xiao)化1-2 min（視細胞情(qing)況(kuang)而(er)定(ding)），然後在顯微(wei)鏡下觀(guan)察細胞消(xiao)化情(qing)況(kuang)，若(ruo)細胞大(da)部(bu)分(fen)變圓(yuan)並脫(tuo)落，迅(xun)速拿(na)回操(cao)作(zuo)臺，輕(qing)敲(qiao)幾(ji)下(xia)培(pei)養(yang)瓶(ping)後加(jia)2-3ml培(pei)養(yang)基(ji)終止(zhi)消(xiao)化。輕(qing)輕(qing)打勻後裝入無(wu)菌(jun)離心管(guan)中，1000 rpm離心(xin)5 min，棄去(qu)上清(qing)液(ye)，補加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)液(ye)後吹勻。

c、將細胞懸液(ye)按1:2比(bi)例分(fen)到新(xin)的(de)含8 mL培養(yang)基(ji)的(de)新(xin)皿中(zhong)或(huo)者(zhe)瓶中(zhong)，置(zhi)於(yu)培(pei)養(yang)箱(xiang)中培養(yang)。 3) 細胞凍存：待細胞生(sheng)長狀(zhuang)態(tai)良(liang)好時(shi)，可(ke)進行細胞凍存。下(xia)面(mian) T25 瓶(ping)為(wei)例；a、收集細胞及細胞培養(yang)液(ye)，裝入無(wu)菌(jun)離心管(guan)中，1000 rpm條件(jian)下離(li)心4 min，棄去(qu)上清(qing)液(ye)，用PBS清(qing)洗(xi)壹(yi)遍(bian)，棄盡PBS，進行(xing)細胞計數。

b、根據(ju)細胞數量加(jia)入無(wu)血清(qing)細胞凍存液(ye)，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混勻，每支凍存管(guan)凍存1mL細胞懸液(ye)，註(zhu)意凍存管(guan)做(zuo)好標識。將凍存管(guan)放(fang)入-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後轉入液(ye)氮(dan)灌儲存。記(ji)錄(lu)凍存管(guan)位(wei)置(zhi)以(yi)便(bian)下次(ci)拿(na)取。

公司正在(zai)出(chu)售的(de)產(chan)品(pin)：

組(zu)織谷氨酰(xian)半合(he)成(cheng)酶（glutamyl systeine synthetase）活(huo)性比(bi)色法(fa)定量(liang)檢(jian)測(ce)試劑盒

RNA樣(yang)品儲存液(ye)

植(zhi)物種子(zi)高(gao)質(zhi)純(chun)化葉綠(lv)體(ti)分(fen)離試劑盒

細胞GSK-3BETA蛋(dan)白(bai)表(biao)達(da)流式(shi)細胞儀檢(jian)測(ce)試劑盒

通(tong)用型魚傳(chuan)染(ran)性胰(yi)腺壞(huai)疽(ju)病(bing)（Infectious Pancreatic Necrosis）

組(zu)織鉀離子(zi)（K）濃(nong)度化學比(bi)色法(fa)定量(liang)檢(jian)測(ce)試劑盒

組(zu)織無機(ji)磷(lin)/遊(you)離(li)磷(lin)酸(suan)根離(li)子(zi)比(bi)色法(fa)定量(liang)檢(jian)測(ce)試劑盒

細胞內(nei)氧化8-氧(yang)鳥苷（8-oxo-G）比(bi)色法(fa)測(ce)定試劑盒

Carnoy固(gu)著液(ye)

空(kong)腸(chang)彎曲(qu)菌(jun)（Campylobacter jejuni）鑒(jian)定

P38蛋(dan)白(bai)表(biao)達(da)西(xi)方雜(za)交分(fen)析試劑盒

乳(ru)制(zhi)品(pin)乳(ru)糖含量酶連續(xu)反應光譜法(fa)定量(liang)檢(jian)測(ce)試劑盒

植(zhi)物DNA甲基轉移酶-1（MET-1）活(huo)性酶連續(xu)循環(huan)比(bi)色法(fa)

組(zu)織IRAK1激(ji)酶活性定量檢(jian)測(ce)試劑盒（A/B/C）

CD56-APC

脂(zhi)肪酸酰(xian)胺(an)水解(jie)酶1抗體(ti)

睪丸蛋(dan)白(bai)聚(ju)糖2抗體(ti)

人(ren)胎(tai)盤(pan)泌乳(ru)素(su)抗體(ti)

LRWD1蛋(dan)白(bai)抗體(ti)

細胞外基質(zhi)底(di)物(wu)反應蛋(dan)白(bai)1抗體(ti)

阿(e)米洛利(li)結合(he)蛋(dan)白(bai)1抗體(ti)

淋(lin)巴(ba)細胞抗原(yuan)6H抗體(ti)

MKN1細胞B和T淋(lin)巴(ba)細胞衰減(jian)蛋(dan)白(bai)抗體(ti)

嗅(xiu)覺受體(ti)5AS1抗體(ti)

三、培(pei)養(yang)註(zhu)意事項(xiang) 

1. 收(shou)到細胞後首先觀(guan)察細胞瓶是否完好，培養(yang)液(ye)是否(fou)有漏液(ye)、渾(hun)濁(zhuo)等(deng)現象，若(ruo)有上述(shu)現象 發(fa)生(sheng)請及(ji)時(shi)和(he)我們聯(lian)系(xi)。

2. 仔(zai)細閱(yue)讀細胞說(shuo)明書(shu)，了解(jie)細胞相關(guan)信(xin)息(xi)，如細胞形態(tai)、所(suo)用培養(yang)基(ji)、血清(qing)比(bi)例、所(suo)需(xu) 細胞因(yin)子(zi)等(deng)，確保細胞培養(yang)條(tiao)件(jian)壹(yi)致，若(ruo)由(you)於(yu)培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)不壹(yi)致而(er)導致細胞出(chu)現問題，責任(ren)由 客(ke)戶(hu)自行(xing)承(cheng)擔。

3. 用 75%酒精擦(ca)拭(shi)細胞瓶表(biao)面(mian)，顯微(wei)鏡下觀(guan)察細胞狀(zhuang)態(tai)。因(yin)運(yun)輸問題，部分(fen)細胞由於(yu)溫(wen)度 變化及劇烈碰(peng)亡(wang)破(po)碎形成碎片，是正常現象。觀(guan)察好細胞狀(zhuang)態(tai)後，75%酒精消(xiao)毒(du)瓶壁(bi)將 T25 瓶置(zhi)於(yu) 37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細胞可以消(xiao)化，懸浮(fu)細胞直接(jie)混勻收集(ji)細胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上(shang) 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重懸細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用新(xin)鮮的(de)培(pei)養(yang)基(ji)重懸 細胞，並接(jie)種(zhong)到新(xin)的(de)培(pei)養(yang)瓶(ping)或(huo)培養(yang)皿(min)中，置(zhi)於(yu)培(pei)養(yang)箱(xiang)中進行培(pei)養(yang)。

5. 請(qing)客戶(hu)用相同條(tiao)件(jian)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)用於(yu)細胞培養(yang)。

6. 建議客(ke)戶(hu)收到細胞後前 3 天各拍(pai)幾(ji)張(zhang)細胞照片，記(ji)錄(lu)細胞狀(zhuang)態(tai)，便(bian)於(yu)和(he)我司技(ji)術部溝(gou)通(tong) 交流。由於(yu)運(yun)輸的(de)原(yuan)因(yin)，個別(bie)敏(min)感(gan)細胞會出(chu)現不穩(wen)定(ding)的(de)情(qing)況(kuang)，請(qing)及(ji)時(shi)和(he)我們聯(lian)系(xi)，告(gao)知細胞 的(de)具(ju)體(ti)情(qing)況(kuang)，以(yi)便(bian)我們的(de)技(ji)術人員跟蹤(zong)回訪(fang)直至問題解決(jue)。

7. 該細胞僅供(gong)科(ke)研(yan)使用。

8. 備註(zhu)：運輸用的(de)培(pei)養(yang)基(ji) (灌液(ye)培養(yang)基(ji)) 不能再用來培(pei)養(yang)細胞，請換用按照說(shuo)明書(shu)細胞培 養(yang)條(tiao)件(jian)新(xin)配制(zhi)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)來培(pei)養(yang)細胞。     收到細胞後第壹(yi)次(ci)傳(chuan)代(dai)建議 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註(zhu)意：  1:2 傳代(dai)就(jiu)是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個 T25 瓶(ping)或(huo)者(zhe) 2 個 6cm 皿(min)。不(bu)是 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個10cm 皿(min)。