Hs688(A)T細胞

公司(si)產(chan)品僅供(gong)科(ke)研(yan)研(yan)究(jiu)使(shi)用(yong)、不(bu)得用(yong)於臨床(chuang)診斷！

壹、商(shang)品介紹(shao)：

1、細胞傳(chuan)代：

1）細胞生(sheng)長至覆蓋培養瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積(ji)時(shi)，棄 25cm2培養瓶(ping)中(zhong)的(de)培養液(ye)，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細胞壹次；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至培養瓶(ping)中(zhong)，倒置顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀察，待細胞回(hui)縮(suo)變圓(yuan)後(hou)加入(ru) 5ml 培養

液(ye)終(zhong)止消(xiao)化(hua)，再(zai)輕輕吹打(da)細胞使(shi)之脫(tuo)落(luo)，然(ran)後(hou)將懸(xuan)液(ye)轉移至 15ml 離心(xin)管(guan)中，1000rpm 離心 5min；

3）棄上(shang)清(qing)，沈澱細胞用(yong) 1-2ml 培養基重懸(xuan)，然(ran)後(hou)按 1:2 比例進行(xing)分(fen)瓶(ping)傳(chuan)代，最(zui)後(hou)放入 37℃，5%CO2細胞

培養箱中培養；

2、細胞凍(dong)存：

1）細胞生(sheng)長至覆蓋培養瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積(ji)時(shi)，棄 25cm2培養瓶(ping)中(zhong)的(de)培養液(ye)，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細胞壹次；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至培養瓶(ping)中(zhong)，倒置顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀察，待細胞回(hui)縮(suo)變圓(yuan)後(hou)加入(ru)培養液(ye)終(zhong)

止消(xiao)化(hua)，輕輕吹打(da)細胞使(shi)之脫(tuo)落(luo)，然(ran)後(hou)將懸(xuan)液(ye)轉移至 15ml 離心(xin)管(guan)中，1000rpm 離心 5min；

3）用(yong)適(shi)量(liang)的(de)凍(dong)存液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細胞，並(bing)放置於凍(dong)存管(guan)中；

4）先(xian)將細胞凍(dong)存管(guan)放置於-20℃ 1.5h，然(ran)後(hou)將其移入-80℃過夜(ye)，24h 後(hou)轉入液(ye)氮(dan)中進行(xing)長期(qi)保(bao)存。使(shi)用程(cheng)序

降(jiang)溫(wen)盒(he)可直接(jie)放入-80℃。

二(er)、細胞培養操作

1) 復蘇(su)細胞：以下(xia)細胞培養凍(dong)存處理僅供(gong)參考(kao)，具體操(cao)作步驟(zhou)以隨(sui)貨(huo)產(chan)品說明(ming)書(shu)為主。將含有(you)1 mL細胞懸(xuan)液(ye)的(de)凍(dong)存管(guan)在 37℃水浴(yu)中迅速搖晃解(jie)凍(dong)，加4 mL培養基混合均勻(yun)。在1000 rpm條件(jian)下離(li)心(xin)3 min，棄去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，加(jia)1-2 mL培養基後(hou)吹勻(yun)。然(ran)後(hou)將所有(you)細胞懸(xuan)液(ye)加(jia)入含適(shi)量(liang)培養基的(de)培養瓶(ping)中(zhong)培養過夜(ye)（或(huo)將細胞懸(xuan)液(ye)加(jia)入10 cm皿中(zhong)，加(jia)入(ru)約(yue)8 mL培養基，培養過夜(ye)）。第二(er)天(tian)換(huan)液(ye)並(bing)檢查(zha)細胞密(mi)度。

2) 細胞傳(chuan)代：如果(guo)細胞密(mi)度達(da) 80%-90%，即(ji)可進行(xing)傳(chuan)代培養。

a、棄去(qu)培養上清(qing)，用(yong)不(bu)含鈣(gai)、鎂(mei)離(li)子(zi)的(de)PBS潤洗(xi)細胞1-2次(ci)。

b、加1 mL消(xiao)化(hua)液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培養瓶(ping)中(zhong)，使(shi)消(xiao)化(hua)液(ye)浸潤所有(you)細胞，將培養瓶(ping)置於37℃培養箱中消(xiao)化(hua)1-2 min（視細胞情(qing)況(kuang)而(er)定(ding)），然(ran)後(hou)在顯微(wei)鏡下(xia)觀察細胞消(xiao)化(hua)情(qing)況(kuang)，若細胞大(da)部分(fen)變圓(yuan)並(bing)脫(tuo)落(luo)，迅(xun)速拿(na)回操(cao)作臺，輕敲幾下(xia)培養瓶(ping)後(hou)加2-3ml培養基終(zhong)止消(xiao)化(hua)。輕輕打(da)勻後(hou)裝入(ru)無菌(jun)離心(xin)管中，1000 rpm離心(xin)5 min，棄去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，補(bu)加1-2 mL培養液(ye)後(hou)吹勻(yun)。

c、將細胞懸(xuan)液(ye)按(an)1:2比例分(fen)到新(xin)的(de)含(han)8 mL培養基的(de)新(xin)皿中(zhong)或(huo)者(zhe)瓶(ping)中(zhong)，置於培養箱中培養。 3) 細胞凍(dong)存：待細胞生(sheng)長狀態(tai)良(liang)好(hao)時，可進行(xing)細胞凍(dong)存。下(xia)面(mian) T25 瓶(ping)為(wei)例(li)；a、收(shou)集(ji)細胞及(ji)細胞培養液(ye)，裝(zhuang)入無菌(jun)離心(xin)管中，1000 rpm條件(jian)下(xia)離心(xin)4 min，棄去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，用(yong)PBS清(qing)洗(xi)壹遍，棄盡(jin)PBS，進行(xing)細胞計(ji)數(shu)。

b、根(gen)據細胞數(shu)量加(jia)入無血清(qing)細胞凍(dong)存液(ye)，使(shi)細胞密(mi)度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍(dong)存管(guan)凍(dong)存1mL細胞懸(xuan)液(ye)，註意(yi)凍(dong)存管(guan)做(zuo)好(hao)標識。將凍(dong)存管(guan)放入-80℃冰箱(xiang)，24 h後(hou)轉入液(ye)氮(dan)灌儲存。記(ji)錄凍(dong)存管(guan)位(wei)置以便下次拿(na)取。

公司(si)正在出(chu)售(shou)的(de)產(chan)品：

發(fa)酵產(chan)物(wu)酶（glutaminase）活性比色法(fa)（405）定(ding)量(liang)檢測試劑(ji)盒(he)

免(mian)疫(yi)組化(hua)AP－BCIP/NBT底(di)物(wu)顯色(se)試劑(ji)盒(he)

大量(liang)（文庫）酵母(mu)細胞轉化(hua)試劑(ji)盒(he)

TRAIL 蛋白(bai)免(mian)疫(yi)共(gong)沈澱分(fen)析試劑(ji)盒(he)

通用型(xing)諾(nuo)瓦(wa)克(ke)病(bing)毒(du)Norovirus基因檢測試劑(ji)盒(he)

石蠟(la)切片組織蛋(dan)白(bai)表達(da)熒光(guang)顯微(wei)鏡檢測試劑(ji)盒(he)-LEPTIN

動(dong)物(wu)細胞鈉/鉀ATP酶(mei)（Na＋/K＋ －ATPase）活性比色法(fa)

單線(xian)態(tai)氧(yang)氣(qi)清(qing)除(chu)（scavenging）活性比色法(fa)篩(shai)選試劑(ji)盒(he)

石蠟(la)切片總高氯(lv)酸萘(nai)醌（PAN）直接(jie)染色試劑(ji)盒(he)

體液(ye)脯(pu)羥(qiang)化(hua)酶(mei)（prolil hydroxylase）活性比色法(fa)定(ding)量(liang)檢測試劑(ji)盒(he)

冰凍(dong)切片組織CDK4蛋白(bai)表達(da)NBT顯色光(guang)學顯(xian)微(wei)鏡檢測試劑(ji)盒(he)

糖(tang)果(guo)糖(tang)精比色法(fa)定(ding)量(liang)檢測試劑(ji)盒(he)

非同(tong)位(wei)素AP－BCIP/NBT法(fa)DNA南(nan)方雜交(jiao)印(yin)跡試劑(ji)盒(he)

體液(ye)肌酸激酶同(tong)工酶(mei)腦(nao)型(xing)（CK--BB）活性比色法(fa)定(ding)量(liang)檢測試劑(ji)盒(he)

動(dong)物(wu)血小(xiao)板線(xian)粒(li)體DNA萃(cui)取試劑(ji)盒(he)

著(zhe)絲粒(li)蛋(dan)白抗(kang)體(ti)

桿菌(jun)PirA抗(kang)體(ti)

染色質修飾(shi)蛋(dan)白1B抗(kang)體(ti)

KIAA1609蛋白抗(kang)體(ti)

細胞色(se)素B561結構(gou)域(yu)蛋白(bai)1抗(kang)體(ti)

β-taxilin蛋白(bai)抗(kang)體(ti)

酪蛋白激酶受體A8抗(kang)體(ti)

Hs688(A)T細胞A激酶錨定(ding)蛋(dan)白(bai)14抗(kang)體(ti)

信(xin)號傳(chuan)導(dao)抑制蛋白WD重復蛋(dan)白2抗(kang)體(ti)

三(san)、培養註意(yi)事項 

1. 收(shou)到(dao)細胞後(hou)首(shou)先觀(guan)察(cha)細胞瓶(ping)是(shi)否(fou)完好(hao)，培養液(ye)是(shi)否(fou)有(you)漏(lou)液(ye)、渾濁(zhuo)等現(xian)象(xiang)，若有(you)上(shang)述(shu)現(xian)象(xiang) 發(fa)生(sheng)請及(ji)時(shi)和(he)我們聯系(xi)。

2. 仔(zai)細閱(yue)讀(du)細胞說(shuo)明書(shu)，了解(jie)細胞相(xiang)關信(xin)息(xi)，如細胞形(xing)態(tai)、所(suo)用(yong)培養基、血清(qing)比例、所需(xu) 細胞因子(zi)等，確保(bao)細胞培養條件壹致(zhi)，若由(you)於培養條件不(bu)壹致(zhi)而(er)導(dao)致(zhi)細胞出(chu)現(xian)問題(ti)，責(ze)任(ren)由 客戶自行(xing)承(cheng)擔。

3. 用 75%酒(jiu)精擦(ca)拭(shi)細胞瓶(ping)表(biao)面(mian)，顯(xian)微(wei)鏡下(xia)觀察細胞狀(zhuang)態(tai)。因運輸(shu)問(wen)題(ti)，部(bu)分(fen)細胞由(you)於溫(wen)度(du) 變化(hua)及(ji)劇(ju)烈碰亡(wang)破(po)碎形成碎片，是(shi)正常(chang)現(xian)象(xiang)。觀察(cha)好(hao)細胞狀(zhuang)態(tai)後(hou)，75%酒(jiu)精消(xiao)毒瓶(ping)壁(bi)將 T25 瓶(ping)置於 37℃培養箱放置 2-4h。

4. 貼壁細胞可以消(xiao)化(hua)，懸(xuan)浮細胞直接(jie)混勻收(shou)集(ji)細胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，棄上(shang) 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重懸(xuan)細胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用(yong)新(xin)鮮(xian)的(de)培養基重懸(xuan) 細胞，並(bing)接(jie)種到新(xin)的(de)培養瓶(ping)或(huo)培養皿中(zhong)，置於培養箱中進行(xing)培養。

5. 請客戶用相同條(tiao)件(jian)的(de)培養基用於細胞培養。

6. 建(jian)議客戶收(shou)到(dao)細胞後(hou)前 3 天(tian)各(ge)拍幾張(zhang)細胞照(zhao)片，記(ji)錄細胞狀(zhuang)態(tai)，便於和(he)我司技術部(bu)溝通 交流。由(you)於運輸(shu)的(de)原(yuan)因，個別(bie)敏(min)感(gan)細胞會(hui)出(chu)現(xian)不(bu)穩定(ding)的(de)情(qing)況(kuang)，請及(ji)時(shi)和(he)我們聯系(xi)，告(gao)知細胞 的(de)具體情(qing)況(kuang)，以便我們的(de)技術人員(yuan)跟蹤(zong)回(hui)訪直至(zhi)問題(ti)解(jie)決。

7. 該(gai)細胞僅供(gong)科(ke)研(yan)使(shi)用。

8. 備註：運(yun)輸(shu)用(yong)的(de)培養基 (灌液(ye)培養基) 不(bu)能再(zai)用(yong)來培養細胞，請換用(yong)按照(zhao)說(shuo)明(ming)書(shu)細胞培 養條件新(xin)配制的(de)培養基來培養細胞。     收(shou)到(dao)細胞後(hou)第壹次傳(chuan)代建(jian)議 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳(chuan)代就是 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個 T25 瓶(ping)或(huo)者(zhe) 2 個 6cm 皿。不(bu)是 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個10cm 皿。