HCC2218細(xi)胞(bao)

公(gong)司(si)產品(pin)僅(jin)供科(ke)研(yan)研(yan)究使用(yong)、不得(de)用(yong)於(yu)臨(lin)床診(zhen)斷(duan)！

壹(yi)、商(shang)品(pin)介紹(shao)：

1、細(xi)胞(bao)傳(chuan)代(dai)：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長至(zhi)覆蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶的(de) 80%面積時(shi)，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的培(pei)養(yang)液，用(yong) PBS 清洗細胞(bao)壹(yi)次；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶中，倒置顯微鏡(jing)下觀察(cha)，待細胞(bao)回(hui)縮變(bian)圓後加(jia)入 5ml 培(pei)養(yang)

液終止消(xiao)化(hua)，再(zai)輕(qing)輕吹打細(xi)胞(bao)使之(zhi)脫(tuo)落，然後將(jiang)懸(xuan)液轉移至(zhi) 15ml 離(li)心管中，1000rpm 離(li)心 5min；

3）棄上(shang)清，沈澱細胞(bao)用(yong) 1-2ml 培(pei)養(yang)基重懸(xuan)，然後按(an) 1:2 比例(li)進(jin)行(xing)分瓶(ping)傳(chuan)代(dai)，最(zui)後(hou)放(fang)入 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)

培(pei)養(yang)箱中培(pei)養(yang)；

2、細胞(bao)凍(dong)存：

1）細胞(bao)生(sheng)長至(zhi)覆蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶的(de) 80%面積時(shi)，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的培(pei)養(yang)液，用(yong) PBS 清洗細胞(bao)壹(yi)次；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶中，倒置顯微鏡(jing)下觀察(cha)，待細胞(bao)回(hui)縮變(bian)圓後加(jia)入培(pei)養(yang)液終

止消(xiao)化(hua)，輕輕吹(chui)打(da)細(xi)胞(bao)使之(zhi)脫(tuo)落，然後將(jiang)懸(xuan)液轉移至(zhi) 15ml 離(li)心管中，1000rpm 離(li)心 5min；

3）用(yong)適量的(de)凍存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細胞(bao)，並(bing)放置於(yu)凍(dong)存管中；

4）先將(jiang)細胞(bao)凍(dong)存管放置於(yu)-20℃ 1.5h，然後將(jiang)其移入-80℃過(guo)夜，24h 後轉入液氮中進行(xing)長期保存(cun)。使用(yong)程(cheng)序(xu)

降(jiang)溫盒(he)可直接放(fang)入-80℃。

二(er)、細胞(bao)培(pei)養(yang)操作(zuo)

1) 復蘇(su)細胞(bao)：以(yi)下細胞(bao)培(pei)養(yang)凍存(cun)處理僅(jin)供參考(kao)，具(ju)體(ti)操(cao)作步(bu)驟以(yi)隨(sui)貨(huo)產品(pin)說明(ming)書為主(zhu)。將(jiang)含(han)有1 mL細胞(bao)懸(xuan)液的凍(dong)存(cun)管在(zai) 37℃水浴(yu)中迅速搖晃解凍，加(jia)4 mL培(pei)養(yang)基混(hun)合(he)均(jun)勻。在(zai)1000 rpm條件(jian)下離(li)心3 min，棄去(qu)上(shang)清液，加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)基後吹(chui)勻。然後將(jiang)所(suo)有細胞(bao)懸(xuan)液加(jia)入含(han)適量培(pei)養(yang)基的培(pei)養(yang)瓶中培(pei)養(yang)過(guo)夜（或將(jiang)細胞(bao)懸(xuan)液加(jia)入10 cm皿中，加(jia)入約(yue)8 mL培(pei)養(yang)基，培(pei)養(yang)過(guo)夜）。第二(er)天(tian)換液並檢查(zha)細胞(bao)密(mi)度。

2) 細(xi)胞(bao)傳(chuan)代(dai)：如(ru)果(guo)細(xi)胞(bao)密(mi)度達(da) 80%-90%，即(ji)可進行(xing)傳(chuan)代(dai)培(pei)養(yang)。

a、棄去(qu)培(pei)養(yang)上清，用(yong)不含(han)鈣(gai)、鎂離(li)子的(de)PBS潤洗細胞(bao)1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養(yang)瓶中，使消(xiao)化(hua)液浸潤所(suo)有細胞(bao)，將(jiang)培(pei)養(yang)瓶置於(yu)37℃培(pei)養(yang)箱中消化1-2 min（視細胞(bao)情(qing)況而(er)定），然後在(zai)顯微鏡(jing)下觀察(cha)細(xi)胞(bao)消(xiao)化情(qing)況，若(ruo)細(xi)胞(bao)大(da)部分變(bian)圓並脫(tuo)落(luo)，迅速拿回(hui)操作(zuo)臺(tai)，輕(qing)敲(qiao)幾(ji)下培(pei)養(yang)瓶後(hou)加(jia)2-3ml培(pei)養(yang)基終止消(xiao)化(hua)。輕輕打(da)勻(yun)後(hou)裝(zhuang)入無(wu)菌(jun)離(li)心管中，1000 rpm離(li)心5 min，棄去(qu)上(shang)清液，補加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)液後吹(chui)勻(yun)。

c、將(jiang)細胞(bao)懸(xuan)液按(an)1:2比例(li)分到新(xin)的含(han)8 mL培(pei)養(yang)基的新(xin)皿中或者(zhe)瓶(ping)中，置於(yu)培(pei)養(yang)箱中培(pei)養(yang)。 3) 細胞(bao)凍(dong)存：待細胞(bao)生(sheng)長狀(zhuang)態(tai)良(liang)好(hao)時(shi)，可進行(xing)細(xi)胞(bao)凍(dong)存。下面 T25 瓶為(wei)例(li)；a、收集(ji)細胞(bao)及(ji)細胞(bao)培(pei)養(yang)液，裝(zhuang)入無(wu)菌(jun)離(li)心管中，1000 rpm條件(jian)下離(li)心4 min，棄去(qu)上(shang)清液，用(yong)PBS清洗壹遍，棄盡(jin)PBS，進行(xing)細(xi)胞(bao)計(ji)數。

b、根據(ju)細(xi)胞(bao)數量加(jia)入無(wu)血(xue)清細胞(bao)凍(dong)存液，使細(xi)胞(bao)密(mi)度5×106~1×107/mL，輕(qing)輕混(hun)勻，每(mei)支凍存(cun)管凍存1mL細胞(bao)懸(xuan)液，註意(yi)凍存(cun)管做好(hao)標(biao)識(shi)。將(jiang)凍存管放入-80℃冰(bing)箱，24 h後(hou)轉入液氮灌(guan)儲(chu)存。記(ji)錄(lu)凍(dong)存管位(wei)置以便下次拿取(qu)。

公(gong)司(si)正(zheng)在(zai)出售的(de)產品(pin)：

細(xi)胞(bao)硫(liu)-β-合(he)成酶（Cystathionine-β-synthase；CBS）活(huo)性比色(se)法(fa)定量(liang)檢測試劑盒(he)

麥(mai)黃(huang)酮蛋白(bai)電泳考(kao)馬(ma)斯亮藍(lan)染(ran)色(se)試劑盒(he)

細菌(jun)－抑(yi)制劑混(hun)合(he)溶(rong)液

冰(bing)凍切片組(zu)織(zhi)CASPASE-6蛋白(bai)表(biao)達(da)NBT顯(xian)色(se)光學(xue)顯(xian)微鏡(jing)檢測試劑盒(he)

飼料(liao)三聚胺快(kuai)速顯色定性(xing)檢測試劑盒(he)（家(jia)用(yong)型(xing)/工(gong)業型(xing)）

組(zu)織(zhi)樣品(pin)陽(yang)性染(ran)色(se)試劑盒(he)

血(xue)液磷酸(suan)二(er)酯酶2（PDE2）活性(xing)酶連(lian)續(xu)循環光譜法定量(liang)檢測試劑盒(he)

活體細胞(bao)氧(yang)化應激活(huo)性(xing)氧(yang)（ROS）原(yuan)位(wei)熒光染(ran)色(se)試劑盒(he)（羥自由基）

冰(bing)凍切片網硬蛋(dan)白(bai)（RETICULIN）染(ran)色(se)試劑盒(he)

芳族氨(an)基酸脫(tuo)羧酶（Aromatic Amino Acid Decarboxylase）活性(xing)

載(zai)玻(bo)片細(xi)胞(bao)CDK2蛋白(bai)表(biao)達(da)熒(ying)光顯(xian)微鏡(jing)檢測試劑盒(he)

化妝(zhuang)品(pin)氨(an)壹步(bu)法定量(liang)檢測試劑盒(he)

石蠟切片組(zu)織(zhi)COLLAGEN II蛋白(bai)表(biao)達(da)NBT顯(xian)色(se)光學(xue)顯(xian)微鏡(jing)檢測試劑盒(he)

組(zu)織(zhi)基質金(jin)屬 125I同(tong)位(wei)素(su)標(biao)記(ji)檢測試劑盒(he)

線粒(li)體功能(neng)詹納斯綠(lv)B（JGB）染(ran)色(se)試劑盒(he)

長壽(shou)相(xiang)關(guan)基因lASS3抗體

肝特異(yi)性有機陰(yin)離(li)子轉運蛋(dan)白(bai)LST1抗(kang)體

染(ran)色(se)盒(he)同源(yuan)物4重組(zu)兔單(dan)克(ke)隆(long)抗體(ti)

KIAA0859蛋白(bai)抗(kang)體

細胞(bao)角(jiao)蛋白(bai)81抗(kang)體

α-甲基酰(xian)基消旋(xuan)酶抗(kang)體(ti)

賴(lai)酮戊(wu)二酸(suan)還原酶抗(kang)體(ti)

HCC2218細(xi)胞(bao)ATP-依賴(lai)的RNA解旋酶3抗(kang)體(ti)

鋅(xin)指(zhi)蛋白(bai)結(jie)構域(yu)ZFYVE21抗體(ti)

三(san)、培(pei)養(yang)註意(yi)事項 

1. 收到細(xi)胞(bao)後(hou)首先觀察(cha)細(xi)胞(bao)瓶(ping)是否完(wan)好(hao)，培(pei)養(yang)液是否有漏液、渾濁(zhuo)等現(xian)象，若有上述(shu)現(xian)象 發生(sheng)請(qing)及(ji)時和我(wo)們(men)聯(lian)系(xi)。

2. 仔細閱讀(du)細胞(bao)說(shuo)明(ming)書，了(le)解細胞(bao)相(xiang)關(guan)信(xin)息(xi)，如(ru)細(xi)胞(bao)形(xing)態(tai)、所(suo)用(yong)培(pei)養(yang)基、血(xue)清比例(li)、所(suo)需(xu) 細(xi)胞(bao)因(yin)子等，確保(bao)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)條件(jian)壹致(zhi)，若(ruo)由於(yu)培(pei)養(yang)條件(jian)不壹致(zhi)而(er)導致(zhi)細(xi)胞(bao)出現(xian)問(wen)題(ti)，責任(ren)由 客(ke)戶自行(xing)承(cheng)擔。

3. 用(yong) 75%酒精擦拭(shi)細胞(bao)瓶(ping)表面，顯微鏡(jing)下觀察(cha)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)。因(yin)運輸問(wen)題(ti)，部分細(xi)胞(bao)由於(yu)溫度 變(bian)化及(ji)劇烈碰亡破碎形(xing)成碎片(pian)，是正常(chang)現(xian)象。觀察(cha)好(hao)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)後(hou)，75%酒精消毒瓶壁(bi)將(jiang) T25 瓶置於(yu) 37℃培(pei)養(yang)箱放(fang)置 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細胞(bao)可以消(xiao)化(hua)，懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞(bao)直(zhi)接混(hun)勻收(shou)集(ji)細胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，棄上(shang) 清。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，用(yong)新(xin)鮮(xian)的(de)培(pei)養(yang)基重懸(xuan) 細胞(bao)，並(bing)接種(zhong)到新(xin)的培(pei)養(yang)瓶或培(pei)養(yang)皿中，置於(yu)培(pei)養(yang)箱中進行(xing)培(pei)養(yang)。

5. 請客(ke)戶用(yong)相(xiang)同(tong)條件(jian)的培(pei)養(yang)基用(yong)於(yu)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)。

6. 建(jian)議(yi)客(ke)戶收到細(xi)胞(bao)後(hou)前(qian) 3 天(tian)各拍(pai)幾(ji)張細(xi)胞(bao)照片，記(ji)錄(lu)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)，便於(yu)和我(wo)司(si)技(ji)術部溝(gou)通 交流。由於(yu)運(yun)輸的原因(yin)，個(ge)別敏(min)感細胞(bao)會(hui)出現(xian)不穩(wen)定的(de)情(qing)況，請(qing)及(ji)時(shi)和我(wo)們(men)聯(lian)系(xi)，告(gao)知(zhi)細(xi)胞(bao) 的(de)具體情(qing)況，以(yi)便我們(men)的(de)技(ji)術人(ren)員跟蹤(zong)回(hui)訪(fang)直至問(wen)題(ti)解決。

7. 該細胞(bao)僅(jin)供科(ke)研(yan)使用(yong)。

8. 備(bei)註：運(yun)輸用(yong)的(de)培(pei)養(yang)基 (灌液培(pei)養(yang)基) 不能再(zai)用(yong)來(lai)培(pei)養(yang)細胞(bao)，請(qing)換用(yong)按(an)照說明(ming)書細胞(bao)培(pei) 養(yang)條件(jian)新配(pei)制的(de)培(pei)養(yang)基來培(pei)養(yang)細胞(bao)。     收(shou)到細(xi)胞(bao)後(hou)第壹次(ci)傳(chuan)代(dai)建(jian)議(yi) 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳(chuan)代(dai)就(jiu)是 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶或者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿。