HL-60Clone15細(xi)胞(bao)

公司產品僅(jin)供科(ke)研(yan)研(yan)究(jiu)使用(yong)、不(bu)得(de)用(yong)於臨(lin)床(chuang)診斷！

壹、商(shang)品介(jie)紹(shao)：

1、細(xi)胞(bao)傳代：

1）細(xi)胞(bao)生長至(zhi)覆(fu)蓋培(pei)養(yang)瓶(ping)的(de) 80%面積(ji)時，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)的(de)培養(yang)液(ye)，用(yong) PBS 清洗(xi)細(xi)胞(bao)壹次(ci)；

2）添加(jia) 0.25%消化液約 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒置顯(xian)微鏡(jing)下觀(guan)察，待(dai)細(xi)胞(bao)回縮變圓後(hou)加(jia)入 5ml 培養(yang)

液(ye)終止消(xiao)化(hua)，再輕輕吹打(da)細(xi)胞(bao)使之(zhi)脫落，然(ran)後(hou)將懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄上(shang)清，沈(chen)澱(dian)細(xi)胞(bao)用(yong) 1-2ml 培養(yang)基(ji)重懸(xuan)，然(ran)後(hou)按(an) 1:2 比例進行(xing)分瓶傳(chuan)代，最(zui)後(hou)放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)

培養(yang)箱中(zhong)培養(yang)；

2、細(xi)胞(bao)凍存(cun)：

1）細(xi)胞(bao)生長至(zhi)覆(fu)蓋培(pei)養(yang)瓶(ping)的(de) 80%面積(ji)時，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)的(de)培養(yang)液(ye)，用(yong) PBS 清洗(xi)細(xi)胞(bao)壹次(ci)；

2）添加(jia) 0.25%消化液約 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒置顯(xian)微鏡(jing)下觀(guan)察，待(dai)細(xi)胞(bao)回縮變圓後(hou)加(jia)入培養(yang)液(ye)終

止消(xiao)化(hua)，輕輕吹(chui)打(da)細(xi)胞(bao)使之(zhi)脫落，然(ran)後(hou)將懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用(yong)適(shi)量的(de)凍存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xi)胞(bao)，並放(fang)置於凍存管(guan)中(zhong)；

4）先將細(xi)胞(bao)凍存(cun)管(guan)放(fang)置於-20℃ 1.5h，然(ran)後(hou)將其(qi)移入(ru)-80℃過夜，24h 後(hou)轉(zhuan)入(ru)液氮中(zhong)進行(xing)長期(qi)保存(cun)。使(shi)用(yong)程序(xu)

降(jiang)溫(wen)盒可(ke)直(zhi)接放(fang)入(ru)-80℃。

二、細(xi)胞(bao)培養(yang)操作

1) 復(fu)蘇(su)細(xi)胞(bao)：以下(xia)細(xi)胞(bao)培養(yang)凍(dong)存處理僅(jin)供參(can)考，具體操作步(bu)驟(zhou)以隨(sui)貨產品說(shuo)明書為(wei)主(zhu)。將含(han)有(you)1 mL細(xi)胞(bao)懸液(ye)的(de)凍存(cun)管(guan)在(zai) 37℃水浴中(zhong)迅速搖晃(huang)解凍(dong)，加(jia)4 mL培養(yang)基(ji)混(hun)合(he)均(jun)勻(yun)。在(zai)1000 rpm條(tiao)件下離(li)心(xin)3 min，棄去上(shang)清液(ye)，加(jia)1-2 mL培養(yang)基(ji)後(hou)吹(chui)勻。然(ran)後(hou)將所(suo)有(you)細(xi)胞(bao)懸液(ye)加入(ru)含適(shi)量培養(yang)基(ji)的(de)培養(yang)瓶(ping)中(zhong)培養(yang)過(guo)夜（或將細(xi)胞(bao)懸液(ye)加入(ru)10 cm皿中(zhong)，加入約8 mL培(pei)養(yang)基(ji)，培養(yang)過(guo)夜）。第(di)二(er)天換(huan)液並檢查(zha)細(xi)胞(bao)密度(du)。

2) 細(xi)胞(bao)傳代：如(ru)果(guo)細(xi)胞(bao)密度(du)達(da) 80%-90%，即(ji)可(ke)進行(xing)傳(chuan)代培(pei)養(yang)。

a、棄去培(pei)養(yang)上(shang)清，用(yong)不(bu)含(han)鈣(gai)、鎂離(li)子(zi)的(de)PBS潤洗(xi)細(xi)胞(bao)1-2次。

b、加(jia)1 mL消化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培養(yang)瓶(ping)中(zhong)，使消化液浸(jin)潤所(suo)有(you)細(xi)胞(bao)，將培(pei)養(yang)瓶(ping)置於37℃培養(yang)箱中(zhong)消化1-2 min（視(shi)細(xi)胞(bao)情(qing)況(kuang)而定(ding)），然(ran)後(hou)在(zai)顯(xian)微鏡(jing)下觀(guan)察細(xi)胞(bao)消化(hua)情(qing)況(kuang)，若細(xi)胞(bao)大(da)部(bu)分變圓(yuan)並(bing)脫落，迅速拿回操作臺(tai)，輕(qing)敲(qiao)幾下(xia)培養(yang)瓶(ping)後(hou)加(jia)2-3ml培養(yang)基(ji)終止消(xiao)化(hua)。輕輕打(da)勻(yun)後(hou)裝入(ru)無(wu)菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄去上(shang)清液(ye)，補(bu)加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)液(ye)後(hou)吹(chui)勻。

c、將細(xi)胞(bao)懸液(ye)按1:2比(bi)例分到(dao)新(xin)的(de)含8 mL培(pei)養(yang)基(ji)的(de)新(xin)皿中(zhong)或者(zhe)瓶中(zhong)，置於培養(yang)箱中(zhong)培養(yang)。 3) 細(xi)胞(bao)凍存(cun)：待(dai)細(xi)胞(bao)生長狀態良(liang)好(hao)時(shi)，可(ke)進行(xing)細(xi)胞(bao)凍存(cun)。下面(mian) T25 瓶為(wei)例；a、收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)及細(xi)胞(bao)培養(yang)液(ye)，裝入(ru)無(wu)菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件下離(li)心(xin)4 min，棄去上(shang)清液(ye)，用(yong)PBS清洗(xi)壹(yi)遍，棄盡(jin)PBS，進行(xing)細(xi)胞(bao)計數。

b、根據細(xi)胞(bao)數量加入無血清細(xi)胞(bao)凍存(cun)液，使(shi)細(xi)胞(bao)密度(du)5×106~1×107/mL，輕輕(qing)混(hun)勻(yun)，每(mei)支凍(dong)存(cun)管(guan)凍(dong)存(cun)1mL細(xi)胞(bao)懸液(ye)，註(zhu)意凍(dong)存管(guan)做(zuo)好(hao)標(biao)識(shi)。將凍(dong)存(cun)管(guan)放(fang)入(ru)-80℃冰箱，24 h後(hou)轉(zhuan)入(ru)液氮灌(guan)儲存(cun)。記(ji)錄凍(dong)存(cun)管(guan)位置以便(bian)下次拿取。

公司正在(zai)出售(shou)的(de)產品：

植(zhi)物(wu)硫-γ-合(he)成(cheng)酶（cystathionine γ-synthase；CGS）活性比(bi)色法定(ding)量檢測試劑盒

遠(yuan)西方雜交(jiao)（FAR WESTERN BLOT） 印跡(ji)同(tong)位素(su)檢(jian)測試劑盒

BJ5183電轉(zhuan)感受(shou)態細(xi)菌

細(xi)胞(bao)CASPASE-7蛋(dan)白(bai)表(biao)達(da)比(bi)色(se)法(fa)定(ding)量檢測試劑盒

通用(yong)型小(xiao)腸結(jie)腸炎(yan)耶爾(er)森氏菌（Yersinia enterocolitica）基(ji)因

HRP底(di)物(wu)OPD緩(huan)沖(chong)溶液(ye)

組(zu)織(zhi)磷(lin)酸(suan)二酯(zhi)酶4（PDE4）活性熒(ying)光定(ding)量檢測試劑盒

冰(bing)凍(dong)切片(pian)氧化應激活性氧（ROS）熒(ying)光(guang)測定(ding)試(shi)劑盒（次氯(lv)酸(suan)離(li)子(zi)）

細(xi)胞(bao)中(zhong)性脂質尼羅紅染(ran)色(se)試(shi)劑盒

血液脯氨(an)酰(xian)肽酶(mei)（prolinase）比(bi)色(se)法(fa)定(ding)量檢測試劑盒

石蠟(la)切片(pian)組(zu)織(zhi)CDK3蛋(dan)白(bai)表(biao)達(da)熒(ying)光(guang)顯(xian)微鏡(jing)檢測試劑盒

食(shi)品添(tian)加(jia)劑酪蛋白(bai)比(bi)色法定(ding)量檢測試劑盒

冰(bing)凍(dong)切片(pian)組(zu)織(zhi)脘(wan)蛋(dan)白(bai)（PRION）蛋(dan)白(bai)表(biao)達(da)熒(ying)光(guang)

細(xi)胞(bao)肌酸(suan)激酶（CK）總(zong)活性比(bi)色法定(ding)量檢測試劑盒

活體細(xi)胞(bao)線粒(li)體形(xing)態/活性熒(ying)光染色試劑盒

著絲粒蛋(dan)白(bai)C1重(zhong)組(zu)兔(tu)單克隆(long)抗(kang)體

肝(gan)細(xi)胞(bao)生長因子(zi)受(shou)體單克隆(long)抗(kang)體

染(ran)色(se)體區(qu)域(yu)穩(wen)定(ding)蛋(dan)白(bai)/核(he)輸(shu)出蛋(dan)白1/染(ran)色(se)體區(qu)域(yu)穩(wen)定(ding)必(bi)需蛋(dan)白抗(kang)體

KIAA1370蛋(dan)白(bai)抗(kang)體

細(xi)胞(bao)膜鈣(gai)ATP酶(mei)1抗(kang)體

α增(zeng)強(qiang)子(zi)結(jie)合蛋白1抗(kang)體

酪蛋白(bai)激酶A3受(shou)體抗(kang)體

HL-60Clone15細(xi)胞(bao)ATP依(yi)賴解旋酶DDX18抗(kang)體

鋅(xin)指(zhi)轉(zhuan)錄(lu)抑制(zhi)因(yin)子(zi)KLF12抗體

三、培(pei)養(yang)註(zhu)意事(shi)項 

1. 收到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)首(shou)先觀(guan)察細(xi)胞(bao)瓶是(shi)否完好(hao)，培(pei)養(yang)液(ye)是否有(you)漏液、渾(hun)濁等(deng)現象，若有(you)上(shang)述現(xian)象 發生請及時和(he)我們(men)聯系。

2. 仔(zai)細(xi)閱讀細(xi)胞(bao)說(shuo)明書，了(le)解細(xi)胞(bao)相關(guan)信(xin)息，如(ru)細(xi)胞(bao)形態、所用(yong)培養(yang)基(ji)、血清比(bi)例、所(suo)需 細(xi)胞(bao)因子(zi)等(deng)，確(que)保細(xi)胞(bao)培養(yang)條(tiao)件壹致(zhi)，若(ruo)由(you)於(yu)培(pei)養(yang)條(tiao)件不(bu)壹(yi)致(zhi)而導(dao)致(zhi)細(xi)胞(bao)出現(xian)問題，責(ze)任由(you) 客(ke)戶(hu)自(zi)行(xing)承(cheng)擔(dan)。

3. 用(yong) 75%酒(jiu)精擦拭細(xi)胞(bao)瓶表(biao)面，顯(xian)微鏡(jing)下觀(guan)察細(xi)胞(bao)狀態。因運輸問(wen)題(ti)，部(bu)分細(xi)胞(bao)由於(yu)溫(wen)度 變化(hua)及(ji)劇烈(lie)碰(peng)亡破(po)碎(sui)形(xing)成(cheng)碎(sui)片(pian)，是(shi)正常(chang)現(xian)象。觀(guan)察好(hao)細(xi)胞(bao)狀態後(hou)，75%酒(jiu)精消(xiao)毒瓶(ping)壁(bi)將 T25 瓶(ping)置於 37℃培養(yang)箱放(fang)置 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細(xi)胞(bao)可(ke)以(yi)消(xiao)化(hua)，懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞(bao)直(zhi)接混(hun)勻(yun)收(shou)集細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄上(shang) 清。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸細(xi)胞(bao)，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用(yong)新(xin)鮮的(de)培養(yang)基(ji)重懸(xuan) 細(xi)胞(bao)，並接種到(dao)新(xin)的(de)培養(yang)瓶(ping)或培(pei)養(yang)皿(min)中(zhong)，置於培養(yang)箱中(zhong)進行(xing)培(pei)養(yang)。

5. 請客(ke)戶(hu)用(yong)相同條(tiao)件的(de)培養(yang)基(ji)用(yong)於細(xi)胞(bao)培養(yang)。

6. 建議客(ke)戶(hu)收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)前(qian) 3 天各(ge)拍(pai)幾張細(xi)胞(bao)照片(pian)，記(ji)錄細(xi)胞(bao)狀態，便(bian)於和我司技術(shu)部溝通 交(jiao)流(liu)。由(you)於運(yun)輸的(de)原因(yin)，個別敏感細(xi)胞(bao)會(hui)出現(xian)不(bu)穩(wen)定(ding)的(de)情(qing)況(kuang)，請及時和(he)我們(men)聯系，告知(zhi)細(xi)胞(bao) 的(de)具體情(qing)況(kuang)，以便(bian)我們(men)的(de)技術(shu)人員跟蹤(zong)回訪直(zhi)至(zhi)問(wen)題(ti)解決(jue)。

7. 該(gai)細(xi)胞(bao)僅(jin)供科(ke)研(yan)使(shi)用(yong)。

8. 備註(zhu)：運輸(shu)用(yong)的(de)培養(yang)基(ji) (灌(guan)液培(pei)養(yang)基(ji)) 不(bu)能再用(yong)來培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)，請換用(yong)按照(zhao)說(shuo)明書細(xi)胞(bao)培 養(yang)條(tiao)件新(xin)配(pei)制(zhi)的(de)培養(yang)基(ji)來培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)。     收到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)第(di)壹次傳代建議 1：2 傳代 。

9. 註(zhu)意：  1:2 傳(chuan)代就(jiu)是(shi) 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶(ping)或者(zhe) 2 個 6cm 皿。不(bu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳 2 個10cm 皿。