更(geng)新時(shi)間:2025-11-29
Ar A4 感受態(tai)細(xi)胞(bao)100ul*100菌株壹(yi)種常用(yong)於(yu)質(zhi)粒克隆的菌(jun)株。其φ80lacZΔM15基因(yin)的產(chan)物可(ke)與pUC載體(ti)編(bian)碼的b-半(ban)乳(ru)糖苷(gan)酶氨(an)基端(duan)實現(xian)a互(hu)補,可(ke)用(yong)於(yu)藍(lan)白(bai)斑(ban)篩(shai)選(xuan)。recA1和(he)endA1 的突(tu)變(bian)有利(li)於(yu)克(ke)隆DNA 的穩定(ding)和(he)高純度(du)質(zhi)粒DNA的提取(qu)。
Ar A4 感受態(tai)細(xi)胞(bao)100ul*100操作方(fang)法(以下(xia)操(cao)作均(jun)按無(wu)菌(jun)條件的標準進(jin)行)
1 取(qu)感受態(tai)細(xi)胞(bao)置於(yu)冰浴中(zhong),如(ru)需分裝(zhuang)可(ke)將剛(gang)融(rong)化細胞(bao)懸液(ye)分裝(zhuang)到(dao)無(wu)菌(jun)預冷(leng)的離(li)心(xin)管中(zhong),置於(yu)冰浴中(zhong)。
● 壹次(ci)轉化感受態(tai)細(xi)胞(bao)的建(jian)議用(yong)量(liang)為(wei)50-100 μl,可(ke)以根(gen)據實際情況(kuang)分裝(zhuang)使用(yong)。應(ying)註(zhu)意所用(yong)DNA 體(ti)積(ji)不(bu)要(yao)超(chao)過(guo)感受態(tai)細(xi)胞(bao)懸液(ye)體(ti)積(ji)的十(shi)分之壹。
以下實驗(yan)以100 μl感受態(tai)細(xi)胞(bao)為(wei)例(li)。
Ar A4 感受態(tai)細(xi)胞(bao)100ul*1002 向感受態(tai)細(xi)胞(bao)懸液(ye)中(zhong)加(jia)入目(mu)的DNA(100 μl 的感受態(tai)細(xi)胞(bao)能夠被(bei)1 ng 超螺旋質(zhi)粒DNA 所飽和(he)),輕(qing)輕(qing)旋轉離心(xin)管以(yi)混勻內(nei)容物,在冰浴中(zhong)靜置30 分鐘。
3 將(jiang)離心(xin)管置於(yu)42℃水浴中(zhong)放置60-90 秒,然(ran)後(hou)快(kuai)速(su)將管轉移到(dao)冰浴中(zhong),使細胞(bao)冷(leng)卻2-3 分鐘,該(gai)過(guo)程(cheng)不(bu)要(yao)搖動離心(xin)管。
4 向(xiang)每(mei)個離心(xin)管中(zhong)加入900 μl 無(wu)菌(jun)的SOC 或(huo)LB 培(pei)養(yang)基(不(bu)含抗(kang)生(sheng)素(su)), 混勻後置於(yu)37℃搖床振(zhen)蕩(dang)培(pei)養(yang)1 小(xiao)時(shi)(160-220 轉/分鐘),目(mu)的是(shi)使質(zhi)粒上相關(guan)的抗(kang)性標記基因(yin)表(biao)達,使菌體復(fu)蘇(su)。
Ar A4 感受態(tai)細(xi)胞(bao)100ul*1005 將離心(xin)管內(nei)容物混勻,吸取(qu)100 μl 已轉化的感受態(tai)細(xi)胞(bao)加到(dao)含相應(ying)抗(kang)生(sheng)素(su)的SOB 或(huo)LB 固體(ti)瓊(qiong)脂(zhi)培(pei)養(yang)基上,用(yong)無(wu)菌(jun)的彎頭(tou)玻(bo)棒輕(qing)輕(qing)的將(jiang)細胞(bao)均(jun)勻塗(tu)開。將(jiang)平(ping)板(ban)置於(yu)室溫(wen)直(zhi)至(zhi)液(ye)體(ti)被(bei)吸收,倒置平(ping)板(ban),37℃培(pei)養(yang)12-16 小(xiao)時(shi)。
● 塗(tu)布(bu)用(yong)量(liang)可(ke)根據(ju)具體實驗(yan)來調(tiao)整。如(ru)轉化的DNA 總(zong)量(liang)較(jiao)多,可(ke)取(qu)更(geng)少量(liang)轉化產物塗(tu)布(bu)平(ping)板(ban);反之,如(ru)轉化的DNA 總(zong)量(liang)較(jiao)少,可(ke)取(qu)200-300 μl 轉化產物塗(tu)布(bu)平(ping)板(ban)。如(ru)果預計的克(ke)隆較(jiao)少,可(ke)通(tong)過(guo)離(li)心(xin)(4,000 rpm, 2分鐘)後(hou)吸除部分培(pei)養(yang)液(ye),懸(xuan)浮(fu)菌(jun)體後將其塗(tu)布(bu)於壹(yi)個平(ping)板(ban)中(zhong)。(塗(tu)布(bu)剩余(yu)的菌(jun)液(ye)可(ke)置於(yu)4℃保存(cun),如(ru)果次(ci)日(ri)的轉化菌落(luo)數過(guo)少可(ke)以將(jiang)剩下的菌(jun)液(ye)再(zai)塗(tu)布(bu)新的培(pei)養(yang)板(ban))
註(zhu)意事項(xiang)
1. 感受態(tai)細(xi)胞(bao)應保存(cun)在 -70℃,不(bu)可(ke)多次(ci)凍(dong)融(rong)和(he)放(fang)置時(shi)間過(guo)長,以避免降(jiang)低感受態(tai)細(xi)胞(bao)的轉化效率。
2. 進行轉化操作(zuo)時(shi),應(ying)根(gen)據(ju)相應(ying)溫(wen)度及無(wu)菌(jun)條件的要(yao)求(qiu)進行。
3 為(wei)防止轉化實驗(yan)不(bu)成功(gong),可(ke)以保(bao)留部分連接反應液(ye),以(yi)重(zhong)新轉化,將損失(shi)降到(dao)低。
以下是(shi)的相關(guan)產(chan)品(pin):
Aβ1-40 大(da)鼠(shu)β澱(dian)粉(fen)樣蛋(dan)白(bai)1-40 規(gui)格(ge): 48T/96T
BMG/β2-MG 大(da)鼠(shu)β2微(wei)球(qiu)蛋(dan)白(bai) 規(gui)格(ge): 48T/96T
β2-GP1 IgA/G/M 大(da)鼠(shu)β2糖(tang)蛋(dan)白(bai)1抗(kang)體(ti)IgA/G/M 規(gui)格(ge): 48T/96T
α-glucosidase 大(da)鼠(shu)α葡(pu)萄(tao)糖苷(gan)酶 規格: 48T/96T
α-GST 大(da)鼠(shu)αS轉移酶(mei) 規(gui)格: 48T/96T
IFN-α 大(da)鼠(shu)α幹擾(rao)素(su) 規(gui)格: 48T/96T
AFU 大(da)鼠(shu)αL巖(yan)藻糖苷酶(mei) 規(gui)格: 48T/96T
α1-MG 大(da)鼠(shu)α1微(wei)球(qiu)蛋(dan)白(bai) 規(gui)格(ge): 48T/96T
α1-AGP 大(da)鼠(shu)α1酸(suan)性糖(tang)蛋(dan)白(bai) 規(gui)格(ge): 48T/96T
TLR-9/CD289 大(da)鼠(shu)Toll樣(yang)受體9 規(gui)格: 48T/96T
TIEG1 大(da)鼠(shu)TGF-β誘(you)導早期(qi)基因(yin)1 規格(ge): 48T/96T
S-100 大(da)鼠(shu)S100蛋(dan)白(bai) 規(gui)格(ge): 48T/96T
S-100B 大(da)鼠(shu)S100B蛋(dan)白(bai) 規(gui)格(ge): 48T/96T
P-Selectin/CD62P 大(da)鼠(shu)P選(xuan)擇素(su) 規(gui)格: 48T/96T
P53 大(da)鼠(shu)P53 規(gui)格: 48T/96T
大(da)鼠(shu)N-乙酰基-絲(si)氨酰(xian)-天門冬(dong)酰-賴氨酰- 大(da)鼠(shu)N-乙酰基-絲(si)氨酰(xian)-天門冬(dong)酰-賴氨酰- 規格(ge): 48T/96T
NAG 大(da)鼠(shu)N-乙酰-β-D-氨(an)基葡(pu)萄(tao)糖苷(gan)酶 規格: 48T/96T
NT-proBNP 大(da)鼠(shu)N端(duan)前(qian)腦鈉(na)素(su) 規(gui)格: 48T/96T
NT-proBNP 大(da)鼠(shu)N端(duan)前(qian)腦鈉(na)素(su) 規(gui)格: 48T/96T
PAL 大(da)鼠(shu)L苯(ben)解(jie)氨(an)酶(mei) 規(gui)格(ge): 48T/96T
Flt3L 大(da)鼠(shu)FMS樣(yang)激(ji)酶3配(pei)體 規(gui)格: 48T/96T
Flt3 大(da)鼠(shu)FMS樣(yang)激(ji)酶3 規(gui)格: 48T/96T
E-Selectin/CD62E 大(da)鼠(shu)E選(xuan)擇素(su) 規(gui)格: 48T/96T
E-Cad 大(da)鼠(shu)E鈣(gai)黏(nian)蛋(dan)白(bai)/上皮鈣(gai)黏(nian)蛋(dan)白(bai) 規(gui)格(ge): 48T/96T
CNP 大(da)鼠(shu)C型(xing)鈉(na)尿(niao)肽 規格(ge): 48T/96T
C-Peptide 大(da)鼠(shu)C肽(tai) 規格: 48T/96T
CRP 大(da)鼠(shu)C反應蛋(dan)白(bai) 規(gui)格(ge): 48T/96T
CXCR3 大(da)鼠(shu)CXC趨(qu)化因子受體3 規(gui)格: 48T/96T
BF 大(da)鼠(shu)B因(yin)子 規格(ge): 48T/96T
Bcl-2 大(da)鼠(shu)B細(xi)胞(bao)淋巴(ba)瘤(liu)因子2 規格(ge): 48T/96T
Bid 大(da)鼠(shu)BH3結構域(yu)雕亡(wang)誘導蛋(dan)白(bai) 規(gui)格(ge): 48T/96T
AP12 大(da)鼠(shu)apelin 12 規(gui)格: 48T/96T
8-iso-PG 大(da)鼠(shu)8異前(qian)列腺素(su) 規(gui)格: 48T/96T
8-OHdG 大(da)鼠(shu)8羥(qiang)基脫(tuo)氧(yang)鳥苷(gan) 規格: 48T/96T
6-keto-PGF1a 大(da)鼠(shu)6酮前(qian)列腺素(su)F1a 規(gui)格: 48T/96T
6-K-PG 大(da)鼠(shu)6酮前(qian)列腺素(su) 規(gui)格: 48T/96T
5-HT 大(da)鼠(shu)5羥(qiang)色胺(an) 規(gui)格(ge): 48T/96T
5-NT 大(da)鼠(shu)5核(he)苷酸酶 規(gui)格(ge): 48T/96T
Col Ⅳ 大(da)鼠(shu)Ⅳ型(xing)膠(jiao)原(yuan) 規格: 48T/96T
PⅢNP 大(da)鼠(shu)Ⅲ型(xing)前(qian)膠原(yuan)肽 規(gui)格: 48T/96T
Ar A4 感受態(tai)細(xi)胞(bao)100ul*100 PⅢNT 大(da)鼠(shu)Ⅲ型(xing)前(qian)膠原(yuan)氨基端(duan)肽 規(gui)格(ge): 48T/96T
Col Ⅲ 大(da)鼠(shu)Ⅲ型(xing)膠(jiao)原(yuan) 規格: 48T/96T
Col Ⅱ 大(da)鼠(shu)Ⅱ型(xing)膠(jiao)原(yuan) 規格: 48T/96T
小(xiao)鼠(shu)L苯解(jie)氨(an)酶(mei)