GV3101（pJlC SA-rep）感受態細胞(bao)100ul*100

GV3101（pJlC SA-rep）感受態細胞(bao)100ul*100 操作(zuo)方法(fa)（以(yi)下(xia)操作(zuo)均按無(wu)菌條件的標(biao)準(zhun)進行(xing)）
1 取感受態細胞(bao)置於冰浴(yu)中(zhong)，如(ru)需(xu)分裝(zhuang)可(ke)將(jiang)剛融(rong)化細胞懸液(ye)分(fen)裝(zhuang)到無(wu)菌預冷的離心管(guan)中，置於冰浴(yu)中(zhong)。
●  壹次轉(zhuan)化(hua)感受態細胞(bao)的建(jian)議用(yong)量為(wei)50-100 μl，可(ke)以(yi)根(gen)據實(shi)際情(qing)況(kuang)分裝(zhuang)使(shi)用(yong)。應註(zhu)意(yi)所(suo)用(yong)DNA 體積GV3101（pJlC SA-rep）感受態細胞(bao)100ul*100不(bu)要超(chao)過(guo)感受態細胞(bao)懸(xuan)液(ye)體積的十(shi)分(fen)之壹。
以下(xia)實(shi)驗(yan)以(yi)100 μl感受態細胞(bao)為(wei)例(li)。
2 向感受態細胞(bao)懸(xuan)液(ye)中(zhong)加(jia)入(ru)目(mu)的DNA（100 μl 的感受態細胞(bao)能(neng)夠(gou)被1 ng 超(chao)螺旋質粒(li)DNA 所(suo)飽和），輕(qing)輕(qing)旋轉(zhuan)離(li)心管(guan)以混(hun)勻內(nei)容物(wu)，在(zai)冰浴(yu)中(zhong)靜(jing)置30 分鐘(zhong)。
3 將(jiang)離心(xin)管(guan)置於42℃水(shui)浴(yu)中(zhong)放置60-90 秒(miao)，然(ran)後(hou)快速(su)將(jiang)管(guan)轉(zhuan)移到冰浴(yu)中(zhong)，使(shi)細(xi)胞(bao)冷卻2-3 分(fen)鐘，該過程(cheng)不要搖動離(li)心管(guan)。
GV3101（pJlC SA-rep）感受態細胞(bao)100ul*1004 向(xiang)每(mei)個離(li)心管(guan)中加(jia)入(ru)900 μl 無(wu)菌的SOC 或(huo)LB 培養基(ji)（不含抗生(sheng)素(su)）， 混勻後(hou)置於37℃搖(yao)床振(zhen)蕩(dang)培養1 小(xiao)時（160-220 轉(zhuan)/分(fen)鐘），目(mu)的是(shi)使(shi)質粒(li)上相(xiang)關(guan)的抗性(xing)標(biao)記(ji)基(ji)因表(biao)達，使(shi)菌(jun)體復(fu)蘇。
5 將(jiang)離心(xin)管(guan)內(nei)容物(wu)混(hun)勻，吸取(qu)100 μl 已(yi)轉(zhuan)化(hua)的感受態細胞(bao)加(jia)到含相(xiang)應(ying)抗生(sheng)素(su)的SOB 或(huo)LB 固(gu)體瓊(qiong)脂(zhi)培養基(ji)上，用(yong)無(wu)菌的彎頭玻棒(bang)輕(qing)輕(qing)的將(jiang)細胞(bao)均勻塗開。將(jiang)平(ping)板(ban)置於室(shi)溫直(zhi)至液(ye)體被吸(xi)收，倒置平(ping)板(ban)，37℃培養12-16 小(xiao)時。
●  塗布(bu)用(yong)量可(ke)根(gen)據具體實(shi)驗(yan)來(lai)調整(zheng)。如(ru)轉(zhuan)化(hua)的DNA 總(zong)量較多(duo)，可(ke)取(qu)更少(shao)量轉(zhuan)化(hua)產物塗布(bu)平(ping)板(ban)；反(fan)之(zhi)，如(ru)轉(zhuan)化(hua)的DNA 總(zong)量較少(shao)，可(ke)取(qu)200-300 μl 轉(zhuan)化(hua)產物塗布(bu)平(ping)板(ban)。如果預計的克隆較少(shao)，可(ke)通(tong)過(guo)離(li)心（4,000 rpm, 2分鐘）後(hou)吸除(chu)部(bu)分(fen)培養液(ye)，懸(xuan)浮(fu)菌體後(hou)將(jiang)其塗布(bu)於壹個平(ping)板(ban)中。（塗布(bu)剩余(yu)的菌液(ye)可(ke)置於4℃保(bao)存(cun)，如果次日(ri)的轉(zhuan)化(hua)菌落數(shu)過(guo)少(shao)可(ke)以(yi)將(jiang)剩下(xia)的菌液(ye)再(zai)塗布(bu)新的培養板(ban)）
 註(zhu)意(yi)事(shi)項(xiang)
1. 感受態細胞(bao)應(ying)保(bao)存(cun)在 -70℃，不可(ke)多(duo)次(ci)凍融(rong)和放置時間過(guo)長，以(yi)避免降(jiang)低(di)感受態細胞(bao)的轉(zhuan)化(hua)效(xiao)率(lv)。
2. 進行(xing)轉(zhuan)化(hua)操作(zuo)時，應(ying)根(gen)據相(xiang)應(ying)溫度及無(wu)菌條件的要求進(jin)行。
3 為(wei)防止轉(zhuan)化(hua)實(shi)驗(yan)不(bu)成(cheng)功(gong)，可(ke)以(yi)保(bao)留(liu)部分連(lian)接反(fan)應(ying)液(ye)，以(yi)重(zhong)新(xin)轉(zhuan)化(hua)，將(jiang)損失降(jiang)到低(di)。
以(yi)下(xia)是(shi)的相(xiang)關(guan)產品：

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