更(geng)新(xin)時(shi)間:2025-11-29
stable 電感(gan)受(shou)態(tai)細(xi)胞(bao)50ul*5是采用(yong)大(da)腸桿(gan)菌經特(te)殊(shu)工藝(yi)處理得到(dao)的(de)感(gan)受(shou)態(tai)細(xi)胞(bao),可(ke)用(yong)於(yu)DNA 的(de)化(hua)學轉(zhuan)化(hua)。使用(yong)pUC19 質(zhi)粒(li)檢(jian)測(ce),轉(zhuan)化(hua)效率可(ke)達108個轉(zhuan)化(hua)子/μg質粒DNA,-70℃保(bao)存3個(ge)月轉(zhuan)化(hua)效率可(ke)保(bao)持在(zai)90%以上(shang)。
stable 電(dian)感(gan)受(shou)態(tai)細(xi)胞(bao)50ul*5操作方法(以下(xia)操作均按無(wu)菌條(tiao)件(jian)的(de)標準(zhun)進行(xing))
1 取感(gan)受(shou)態(tai)細(xi)胞(bao)置(zhi)於(yu)冰浴(yu)中,如需(xu)分(fen)裝可(ke)將剛融(rong)化(hua)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液分(fen)裝到(dao)無菌預冷(leng)的(de)離心(xin)管中,置於(yu)冰(bing)浴(yu)中(zhong)。
● 壹次轉(zhuan)化(hua)感(gan)受(shou)態(tai)細(xi)胞(bao)的(de)建議用(yong)量(liang)為50-100 μl,可以根(gen)據實際(ji)情(qing)況分(fen)裝使(shi)用(yong)。應(ying)註(zhu)意所用(yong)DNA 體(ti)積(ji)不(bu)要(yao)超過(guo)感(gan)受(shou)態(tai)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液體積(ji)的(de)十(shi)分(fen)之(zhi)壹(yi)。
以下(xia)實(shi)驗以100 μl感(gan)受(shou)態(tai)細(xi)胞(bao)為例。
stable 電感(gan)受(shou)態(tai)細(xi)胞(bao)50ul*52 向(xiang)感(gan)受(shou)態(tai)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液中加(jia)入目的(de)DNA(100 μl 的(de)感(gan)受(shou)態(tai)細(xi)胞(bao)能(neng)夠(gou)被(bei)1 ng 超(chao)螺(luo)旋質(zhi)粒(li)DNA 所飽和),輕輕(qing)旋轉(zhuan)離心(xin)管以混(hun)勻內(nei)容物,在(zai)冰(bing)浴(yu)中(zhong)靜(jing)置(zhi)30 分(fen)鐘(zhong)。
3 將離心(xin)管置於42℃水浴(yu)中(zhong)放(fang)置(zhi)60-90 秒(miao),然(ran)後(hou)快(kuai)速將管轉(zhuan)移(yi)到(dao)冰浴中,使細(xi)胞(bao)冷(leng)卻(que)2-3 分(fen)鐘(zhong),該(gai)過(guo)程(cheng)不(bu)要(yao)搖(yao)動(dong)離(li)心(xin)管。
4 向(xiang)每(mei)個(ge)離(li)心(xin)管中加入900 μl 無菌的(de)SOC 或LB 培(pei)養基(ji)(不(bu)含(han)抗(kang)生素), 混(hun)勻後置(zhi)於37℃搖(yao)床振(zhen)蕩培(pei)養1 小時(shi)(160-220 轉(zhuan)/分(fen)鐘(zhong)),目(mu)的(de)是使質(zhi)粒(li)上(shang)相關的(de)抗(kang)性(xing)標記(ji)基(ji)因表達,使菌體復(fu)蘇(su)。
stable 電(dian)感(gan)受(shou)態(tai)細(xi)胞(bao)50ul*55 將離心(xin)管內(nei)容物混(hun)勻,吸(xi)取(qu)100 μl 已(yi)轉(zhuan)化(hua)的(de)感(gan)受(shou)態(tai)細(xi)胞(bao)加(jia)到(dao)含相應抗(kang)生素的(de)SOB 或LB 固(gu)體瓊脂(zhi)培(pei)養基(ji)上(shang),用(yong)無(wu)菌的(de)彎(wan)頭玻(bo)棒(bang)輕輕(qing)的(de)將細(xi)胞(bao)均勻塗開。將平(ping)板置於室溫直(zhi)至(zhi)液體被(bei)吸(xi)收,倒置(zhi)平(ping)板,37℃培(pei)養12-16 小時(shi)。
● 塗(tu)布(bu)用(yong)量(liang)可(ke)根據具體實(shi)驗來調(tiao)整(zheng)。如轉(zhuan)化(hua)的(de)DNA 總(zong)量較(jiao)多,可(ke)取更(geng)少(shao)量(liang)轉(zhuan)化(hua)產(chan)物(wu)塗布(bu)平(ping)板;反之,如轉(zhuan)化(hua)的(de)DNA 總(zong)量較(jiao)少(shao),可(ke)取200-300 μl 轉(zhuan)化(hua)產(chan)物(wu)塗布(bu)平(ping)板。如果(guo)預計(ji)的(de)克(ke)隆(long)較(jiao)少,可通過(guo)離(li)心(xin)(4,000 rpm, 2分(fen)鐘(zhong))後(hou)吸(xi)除部分(fen)培(pei)養液,懸(xuan)浮(fu)菌體後(hou)將其塗(tu)布(bu)於壹(yi)個(ge)平(ping)板中。(塗布(bu)剩余(yu)的(de)菌液可置(zhi)於(yu)4℃保(bao)存,如果(guo)次日(ri)的(de)轉(zhuan)化(hua)菌落(luo)數過(guo)少(shao)可(ke)以將剩下(xia)的(de)菌液再塗(tu)布(bu)新的(de)培(pei)養板)
註意事項(xiang)
1. 感(gan)受(shou)態(tai)細(xi)胞(bao)應(ying)保(bao)存在(zai) -70℃,不(bu)可(ke)多次凍融(rong)和放(fang)置(zhi)時(shi)間過(guo)長(chang),以避(bi)免降低感(gan)受(shou)態(tai)細(xi)胞(bao)的(de)轉(zhuan)化(hua)效率。
2. 進(jin)行(xing)轉(zhuan)化(hua)操作時(shi),應(ying)根據相應溫度及(ji)無菌條(tiao)件(jian)的(de)要(yao)求進(jin)行(xing)。
3 為防(fang)止轉(zhuan)化(hua)實驗不(bu)成功,可以保(bao)留(liu)部分(fen)連(lian)接反應液,以重(zhong)新(xin)轉(zhuan)化(hua),將損失(shi)降(jiang)到(dao)低。
以下(xia)是的(de)相關產(chan)品(pin):
6(sTLR6)ELISA試劑盒廠(chang)家(jia) 大鼠(shu)可(ke)溶性(xing)Toll樣受體(ti)6(sTLR6)ELISA試劑盒報(bao)價(jia)
大鼠(shu)抗(kang)核膜(mo)糖(tang)蛋白(bai)210抗(kang)體(gp210)ELISA試劑盒 :英文(wen)名(ming)稱(cheng); Rat Anti-glucoprotein 210,GP210 ELISA Kit 購(gou)買(mai)我(wo)公司(si)ELISA試劑盒保(bao)證質量(liang),靈(ling)敏(min)性(xing)高(gao)、特(te)異性(xing)強(qiang)、重復性(xing)好(hao)等(deng)優(you)點(dian)已(yi)經得到(dao)廣大客(ke)戶的(de)認可,您可放(fang)心(xin),且我司(si)有(you)專門的(de)售後部門對您進行(xing)全(quan)線跟蹤(zong)。 :規格; 96T/48T 大鼠(shu)抗(kang)核膜(mo)糖(tang)蛋白(bai)210抗(kang)體(gp210)ELISA試劑盒廠(chang)家(jia) 大鼠(shu)抗(kang)核膜(mo)糖(tang)蛋白(bai)210抗(kang)體(gp210)ELISA試劑盒報(bao)價(jia)
大鼠(shu)胰島(dao)素自(zi)身(shen)抗(kang)體(IAA)ELISA試劑盒 :英文(wen)名(ming)稱(cheng); Rat insulin autoantibodies,IAA ELISA Kit 購(gou)買(mai)我(wo)公司(si)ELISA試劑盒保(bao)證質量(liang),靈(ling)敏(min)性(xing)高(gao)、特(te)異性(xing)強(qiang)、重復性(xing)好(hao)等(deng)優(you)點(dian)已(yi)經得到(dao)廣大客(ke)戶的(de)認可,您可放(fang)心(xin),且我司(si)有(you)專門的(de)售後部門對您進行(xing)全(quan)線跟蹤(zong)。 :規格; 96T/48T 大鼠(shu)胰島(dao)素自(zi)身(shen)抗(kang)體(IAA)ELISA試劑盒廠(chang)家(jia) 大鼠(shu)胰島(dao)素自(zi)身(shen)抗(kang)體(IAA)ELISA試劑盒報(bao)價(jia)
大鼠(shu)白(bai)介(jie)素1受(shou)體拮抗(kang)劑(IL1Ra)ELISA試劑盒 :英文(wen)名(ming)稱(cheng); Rat Interleukin 1 receptor antagonist, IL-1ra ELISA kit 購(gou)買(mai)我(wo)公司(si)ELISA試劑盒保(bao)證質量(liang),靈(ling)敏(min)性(xing)高(gao)、特(te)異性(xing)強(qiang)、重復性(xing)好(hao)等(deng)優(you)點(dian)已(yi)經得到(dao)廣大客(ke)戶的(de)認可,您可放(fang)心(xin),且我司(si)有(you)專門的(de)售後部門對您進行(xing)全(quan)線跟蹤(zong)。 :規格; 96T/48T 大鼠(shu)白(bai)介(jie)素1受(shou)體拮抗(kang)劑(IL1Ra)ELISA試劑盒廠(chang)家(jia) 大鼠(shu)白(bai)介(jie)素1受(shou)體拮抗(kang)劑(IL1Ra)ELISA試劑盒報(bao)價(jia)
大鼠(shu)8羥(qiang)基(ji)脫(tuo)氧(yang)鳥(niao)苷(gan)(8-OHdG)ELISA試劑盒 :英文(wen)名(ming)稱(cheng); Rat 8-Hydroxy-desoxyguanosine,8-OHdG ELISA Kit 購(gou)買(mai)我(wo)公司(si)ELISA試劑盒保(bao)證質量(liang),靈(ling)敏(min)性(xing)高(gao)、特(te)異性(xing)強(qiang)、重復性(xing)好(hao)等(deng)優(you)點(dian)已(yi)經得到(dao)廣大客(ke)戶的(de)認可,您可放(fang)心(xin),且我司(si)有(you)專門的(de)售後部門對您進行(xing)全(quan)線跟蹤(zong)。 :規格; 96T/48T 大鼠(shu)8羥(qiang)基(ji)脫(tuo)氧(yang)鳥(niao)苷(gan)(8-OHdG)ELISA試劑盒廠(chang)家(jia) 大鼠(shu)8羥(qiang)基(ji)脫(tuo)氧(yang)鳥(niao)苷(gan)(8-OHdG)ELISA試劑盒報(bao)價(jia)
大鼠(shu)β澱(dian)粉(fen)樣蛋白(bai)1-42(Aβ1-42)ELISA試劑盒 :英文(wen)名(ming)稱(cheng); Rat amyloid beta peptide 1-42,Aβ1-42 ELISA Kit 購(gou)買(mai)我(wo)公司(si)ELISA試劑盒保(bao)證質量(liang),靈(ling)敏(min)性(xing)高(gao)、特(te)異性(xing)強(qiang)、重復性(xing)好(hao)等(deng)優(you)點(dian)已(yi)經得到(dao)廣大客(ke)戶的(de)認可,您可放(fang)心(xin),且我司(si)有(you)專門的(de)售後部門對您進行(xing)全(quan)線跟蹤(zong)。 :規格; 96T/48T 大鼠(shu)β澱(dian)粉(fen)樣蛋白(bai)1-42(Aβ1-42)ELISA試劑盒廠(chang)家(jia) 大鼠(shu)β澱(dian)粉(fen)樣蛋白(bai)1-42(Aβ1-42)ELISA試劑盒報(bao)價(jia)
stable 電感(gan)受(shou)態(tai)細(xi)胞(bao)50ul*5 大(da)鼠(shu)多巴(ba)胺(an)轉(zhuan)運(yun)蛋白(bai)(DAT)ELISA試劑盒 :英文(wen)名(ming)稱(cheng); Rat dopamine transporter,DAT ELISA Kit 購(gou)買(mai)我(wo)公司(si)ELISA試劑盒保(bao)證質量(liang),靈(ling)敏(min)性(xing)高(gao)、特(te)異性(xing)強(qiang)、重復性(xing)好(hao)等(deng)優(you)點(dian)已(yi)經得到(dao)廣大客(ke)戶的(de)認可,您可放(fang)心(xin),且我司(si)有(you)專門的(de)售後部門對您進行(xing)全(quan)線跟蹤(zong)。 :規格; 96T/48T 大鼠(shu)多巴(ba)胺(an)轉(zhuan)運(yun)蛋白(bai)(DAT)ELISA試劑盒廠(chang)家(jia) 大鼠(shu)多巴(ba)胺(an)轉(zhuan)運(yun)蛋白(bai)(DAT)ELISA試劑盒報(bao)價(jia)