B834（DE3） 感(gan)受(shou)態細胞100ul*10

B834(DE3) 感(gan)受(shou)態細胞100ul*10以下是(shi)的訂(ding)購(gou)信(xin)息(xi)儲(chu)存(cun)條件：-70℃凍存(cun)
操作(zuo)方法(fa):
1. 取(qu)-80℃保存(cun)的農桿(gan)菌感(gan)受(shou)態於室(shi)溫(wen)或(huo)手心(xin)片刻(ke)待其(qi)部分融(rong)化，處於(yu)冰(bing)水(shui)混合(he)狀(zhuang)態時插入(ru)冰(bing)中。
B834(DE3) 感(gan)受(shou)態細胞100ul*102.每(mei)100 μl感(gan)受(shou)態加入(ru)0.01-1 μg質粒DNA（轉化效(xiao)率(lv)較高，*次(ci)使(shi)用前做(zuo)預實驗(yan)確(que)定(ding)所加質粒的量(liang)），用(yong)手管(guan)底混勻(yun)，依次於(yu)冰(bing)上靜(jing)置5分鐘、液(ye)氮5分鐘、37℃水(shui)浴(yu)5分鐘、冰(bing)浴(yu)5分鐘。
3. 加入(ru)700 μl無(wu)抗(kang)生(sheng)素(su)的LB或(huo)YEB液(ye)體培養基，於(yu)28℃振(zhen)蕩培(pei)養2~3小時。
4. 6000 rpm離心(xin)壹分鐘收(shou)菌，留取100 μl左(zuo)右(you)上清輕(qing)輕(qing)吹(chui)打(da)重懸(xuan)菌塊(kuai)塗布(bu)於(yu)含相應抗(kang)生(sheng)素(su)的LB或(huo)YEB平板上，倒(dao)置放於(yu)28℃培養箱培(pei)養2-3天
註(zhu)意(yi)事(shi)項
1. 加入(ru)質粒時體積不應大於感(gan)受(shou)態體積的1/10；質粒不純(chun)或(huo)存(cun)在乙醇等(deng)有(you)機物(wu)汙(wu)染(ran)，轉化效(xiao)率(lv)急(ji)劇(ju)下(xia)降(jiang)；質粒增大壹倍(bei)，轉化效(xiao)率(lv)下(xia)降(jiang)壹個(ge)數(shu)量級。
B834(DE3) 感(gan)受(shou)態細胞100ul*102. 混入(ru)質粒時應輕(qing)柔操作(zuo)。轉化高濃度的(de)質粒可相應減(jian)少(shao)終(zhong)用(yong)於(yu)塗板的(de)菌(jun)量。
3. 平板上陽(yang)性克(ke)隆(long)密度(du)過大時，由(you)於(yu)營養不足(zu)，陽(yang)性克(ke)隆(long)生(sheng)長(chang)變慢，菌(jun)落(luo)變小(xiao)，為了(le)獲得(de)大的(de)菌落，應減少(shao)質粒用量(liang)。
4. 濃度不(bu)應高(gao)於25 μg/ml，過高的(de)濃度不(bu)利(li)於農(nong)桿(gan)菌(jun)生(sheng)長(chang)，會降低(di)其(qi)生(sheng)長(chang)速度(du)和轉(zhuan)化效(xiao)率(lv)。本(ben)公司感(gan)受(shou)態計(ji)算(suan)轉化效(xiao)率(lv)時所用平板只(zhi)含(han)有50 μg/ml kan，若(ruo)所用平板含(han)有(you)20 μg/ml rif則轉(zhuan)化效(xiao)率(lv)降(jiang)低(di)到(dao)1/2。
5. 培(pei)養基中加入(ru)的目(mu)的(de)是(shi)防止雜(za)菌生(sheng)長(chang)、篩(shai)選農桿菌；根(gen)據(ju)所用菌(jun)株抗(kang)性加入(ru)Ti質粒篩(shai)選抗(kang)生(sheng)素(su)可防(fang)止Ti質粒丟(diu)失(shi)，但Ti質粒篩(shai)選抗(kang)生(sheng)素(su)不利(li)於農(nong)桿(gan)菌(jun)的轉基(ji)因操作(zuo)，所以壹般(ban)培(pei)養農桿(gan)菌(jun)時不考慮(lv)這些(xie)抗(kang)生(sheng)素(su)，Ti質粒丟(diu)失(shi)的概(gai)率極(ji)低(di)(可(ke)以(yi)忽(hu)略)。

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