*0F`感(gan)受(shou)態細胞100ul*50

操(cao)作(zuo)方(fang)法*0F`感受(shou)態細胞100ul*50（以(yi)下(xia)操(cao)作(zuo)均按無(wu)菌條(tiao)件的標準(zhun)進行）
1 取感受態細胞置於冰(bing)浴(yu)中(zhong)，如需分(fen)裝(zhuang)可將剛(gang)融(rong)化(hua)細胞懸液分(fen)裝(zhuang)到無菌預冷(leng)的離(li)心管中(zhong)，置於冰(bing)浴(yu)中(zhong)。
●  壹次(ci)轉(zhuan)化(hua)感受態細胞的建(jian)議用量為50-100 μl，可(ke)以根據(ju)實際(ji)情況(kuang)分(fen)裝(zhuang)使用(yong)。應註意所用(yong)DNA 體(ti)積(ji)不(bu)要超(chao)過感受(shou)態(tai)細胞懸液體(ti)積(ji)的十分(fen)之(zhi)壹。
以下(xia)實驗(yan)以100 μl感(gan)受態(tai)細胞為(wei)例(li)。
*0F`感受態(tai)細胞100ul*502 向(xiang)感(gan)受態細胞懸液中(zhong)加入目的DNA（100 μl 的感(gan)受(shou)態細胞能(neng)夠(gou)被1 ng 超(chao)螺(luo)旋(xuan)質(zhi)粒DNA 所飽和(he)），輕(qing)輕(qing)旋(xuan)轉(zhuan)離心管以(yi)混勻內(nei)容(rong)物(wu)，在冰(bing)浴(yu)中(zhong)靜置30 分(fen)鐘(zhong)。
3 將離(li)心管置於42℃水(shui)浴中(zhong)放置60-90 秒，然(ran)後快速(su)將管轉(zhuan)移到冰(bing)浴(yu)中(zhong)，使細胞冷(leng)卻(que)2-3 分(fen)鐘(zhong)，該(gai)過程(cheng)不(bu)要搖動(dong)離(li)心管。
4 向(xiang)每個(ge)離(li)心管中(zhong)加入900 μl 無菌的SOC 或(huo)LB 培養(yang)基（不(bu)含抗(kang)生(sheng)素(su)）， 混勻後置於37℃搖床(chuang)振(zhen)蕩培養(yang)1 小時（160-220 轉(zhuan)/分(fen)鐘(zhong)），目的是(shi)使質(zhi)粒上(shang)相關的抗(kang)性(xing)標記基(ji)因(yin)表(biao)達(da)，使菌體復蘇(su)。
5 將離(li)心管內(nei)容(rong)物(wu)混勻，吸(xi)取100 μl 已(yi)轉(zhuan)化(hua)的感(gan)受(shou)態細胞加(jia)到含相應抗(kang)生(sheng)素(su)的SOB 或(huo)LB 固體瓊(qiong)脂(zhi)培養(yang)基上(shang)，用無(wu)菌的彎(wan)頭玻棒(bang)輕輕(qing)的將細胞均勻塗開。將平(ping)板(ban)置於室溫直至(zhi)液體(ti)被吸收(shou)，倒(dao)置平板(ban)，37℃培養(yang)12-16 小時。
●  塗布用(yong)量可根(gen)據具體(ti)實驗(yan)來調(tiao)整(zheng)。如轉(zhuan)化(hua)的DNA 總(zong)量較多，可(ke)取更少量轉(zhuan)化(hua)產物(wu)塗布平(ping)板；反(fan)之(zhi)，如轉(zhuan)化(hua)的DNA 總(zong)量較少(shao)，可取200-300 μl 轉(zhuan)化(hua)產物(wu)塗布平(ping)板。如果預計的克(ke)隆(long)較少(shao)，可通過離心（4,000 rpm, 2分(fen)鐘(zhong)）後吸除部分(fen)培養(yang)液，懸浮(fu)菌體後將其(qi)塗布於壹個(ge)平(ping)板(ban)中(zhong)。（塗布剩(sheng)余的菌液可(ke)置於4℃保存(cun)，如果次(ci)日的轉(zhuan)化(hua)菌落數(shu)過少可(ke)以(yi)將剩(sheng)下(xia)的菌液再塗布新的培養(yang)板）
*0F`感(gan)受(shou)態(tai)細胞100ul*50註(zhu)意(yi)事項
1. 感(gan)受(shou)態細胞應保存(cun)在 -70℃，不(bu)可多次(ci)凍融(rong)和(he)放置時間過長(chang)，以(yi)避免降(jiang)低感(gan)受(shou)態細胞的轉(zhuan)化(hua)效率。
2. 進行轉(zhuan)化(hua)操(cao)作(zuo)時，應根據相應溫度(du)及無(wu)菌條(tiao)件的要(yao)求(qiu)進行。
3 為(wei)防止轉(zhuan)化(hua)實驗(yan)不(bu)成功(gong)，可以(yi)保留部分(fen)連接反(fan)應液，以(yi)重新轉(zhuan)化(hua)，將損(sun)失(shi)降(jiang)到低。
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