Duck embryo鴨(ya)胚(pei)胎(tai)成纖維(wei)細(xi)胞

公司產品僅(jin)供(gong)科(ke)研(yan)研(yan)究使(shi)用、不得(de)用於臨(lin)床診斷！

1、細(xi)胞傳(chuan)代(dai)：

1）細(xi)胞生(sheng)長(chang)至(zhi)覆蓋培養瓶(ping)的 80%面(mian)積時，棄 25cm2培(pei)養瓶(ping)中的培養液(ye)，用 PBS 清(qing)洗細(xi)胞壹次；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消化液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶(ping)中，倒置(zhi)顯微鏡(jing)下觀察(cha)，待細(xi)胞回(hui)縮(suo)變圓後加(jia)入(ru) 5ml 培(pei)養

液(ye)終止(zhi)消化，再(zai)輕輕(qing)吹打(da)細(xi)胞使之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然(ran)後將懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移至 15ml 離(li)心管中，1000rpm 離(li)心 5min；

3）棄上(shang)清，沈澱(dian)細(xi)胞用 1-2ml 培(pei)養基重懸(xuan)，然(ran)後按(an) 1:2 比(bi)例(li)進(jin)行分(fen)瓶傳(chuan)代(dai)，最後放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞

培養箱中培養；

2、細(xi)胞凍存(cun)：

1）細(xi)胞生(sheng)長(chang)至(zhi)覆蓋培養瓶(ping)的 80%面(mian)積時，棄 25cm2培(pei)養瓶(ping)中的培養液(ye)，用 PBS 清(qing)洗細(xi)胞壹次；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消化液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶(ping)中，倒置(zhi)顯微鏡(jing)下觀察(cha)，待細(xi)胞回(hui)縮(suo)變圓後加(jia)入(ru)培(pei)養液(ye)終

止(zhi)消化，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打(da)細(xi)胞使之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然(ran)後將懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移至 15ml 離(li)心管中，1000rpm 離(li)心 5min；

3）用(yong)適量的凍存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞，並(bing)放置(zhi)於凍存(cun)管中；

4）先(xian)將細(xi)胞凍存(cun)管放置(zhi)於-20℃ 1.5h，然後將其(qi)移入(ru)-80℃過(guo)夜，24h 後轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮(dan)中進(jin)行長(chang)期(qi)保(bao)存(cun)。使用(yong)程序

降溫(wen)盒可直(zhi)接(jie)放(fang)入(ru)-80℃。

二、細(xi)胞培養操(cao)作(zuo)

1) 復(fu)蘇(su)細(xi)胞：以(yi)下細(xi)胞培養凍(dong)存(cun)處理(li)僅(jin)供(gong)參考，具體操(cao)作(zuo)步(bu)驟以(yi)隨貨產品說(shuo)明書為(wei)主(zhu)。將含(han)有1 mL細(xi)胞懸(xuan)液(ye)的凍存(cun)管在 37℃水(shui)浴中迅速(su)搖晃(huang)解(jie)凍(dong)，加(jia)4 mL培養基混合(he)均勻。在(zai)1000 rpm條(tiao)件(jian)下離(li)心3 min，棄去(qu)上(shang)清液(ye)，加(jia)1-2 mL培養基後吹(chui)勻。然(ran)後將所(suo)有細(xi)胞懸(xuan)液(ye)加(jia)入(ru)含(han)適量培(pei)養基的培養瓶(ping)中培養過(guo)夜（或將細(xi)胞懸(xuan)液(ye)加(jia)入(ru)10 cm皿(min)中，加(jia)入(ru)約(yue)8 mL培(pei)養基，培養過(guo)夜）。第(di)二天(tian)換(huan)液並(bing)檢(jian)查(zha)細(xi)胞密度(du)。

2) 細(xi)胞傳(chuan)代(dai)：如(ru)果細(xi)胞密度(du)達(da) 80%-90%，即(ji)可進(jin)行傳(chuan)代(dai)培養。

a、棄去(qu)培養上(shang)清，用(yong)不含鈣、鎂(mei)離(li)子的PBS潤洗細(xi)胞1-2次。

b、加(jia)1 mL消化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養瓶(ping)中，使消化液(ye)浸(jin)潤所有細(xi)胞，將培(pei)養瓶(ping)置(zhi)於37℃培養箱中消化1-2 min（視(shi)細(xi)胞情況(kuang)而(er)定(ding)），然(ran)後在(zai)顯微鏡(jing)下觀察(cha)細(xi)胞消化情(qing)況(kuang)，若細(xi)胞大部(bu)分(fen)變圓並(bing)脫(tuo)落(luo)，迅速(su)拿回(hui)操(cao)作(zuo)臺，輕敲(qiao)幾下培養瓶(ping)後加(jia)2-3ml培養基終止(zhi)消化。輕(qing)輕(qing)打(da)勻後裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌(jun)離(li)心管中，1000 rpm離(li)心5 min，棄去(qu)上(shang)清液(ye)，補加(jia)1-2 mL培養液(ye)後吹(chui)勻。

c、將細(xi)胞懸(xuan)液(ye)按1:2比(bi)例(li)分到(dao)新的含8 mL培(pei)養基的新皿(min)中或者(zhe)瓶(ping)中，置(zhi)於培養箱中培養。 3) 細(xi)胞凍存(cun)：待細(xi)胞生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態良(liang)好(hao)時，可進(jin)行細(xi)胞凍存(cun)。下面(mian) T25 瓶為(wei)例(li)；a、收(shou)集細(xi)胞及(ji)細(xi)胞培養液(ye)，裝入(ru)無(wu)菌(jun)離(li)心管中，1000 rpm條件(jian)下離(li)心4 min，棄去(qu)上(shang)清液(ye)，用PBS清洗壹遍(bian)，棄盡(jin)PBS，進(jin)行細(xi)胞計數(shu)。

b、根據(ju)細(xi)胞數量加(jia)入(ru)無(wu)血(xue)清細(xi)胞凍存(cun)液，使(shi)細(xi)胞密度(du)5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支(zhi)凍存(cun)管凍存(cun)1mL細(xi)胞懸(xuan)液(ye)，註(zhu)意(yi)凍存(cun)管做好(hao)標(biao)識(shi)。將凍(dong)存(cun)管放入(ru)-80℃冰(bing)箱，24 h後轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮(dan)灌(guan)儲(chu)存(cun)。記錄凍存(cun)管位(wei)置(zhi)以(yi)便下次拿取。

公(gong)司正(zheng)在出(chu)售(shou)的產品：

IL16 Protein Human 重組人(ren) IL16 / Ierleukin-16 蛋白(bai) (His 標(biao)簽) 大鼠內(nei)脂素(VF)ELISA試劑(ji)盒 FS  大鼠卵泡抑素(su) 96T

NPEPPS： 黴(mei)素(su)敏(min)感性(xing)肽酶蛋白(bai)抗(kang)體 PADI4 Others Human 人(ren) PAD4 / PADI4 桿狀(zhuang)病毒(du)-昆(kun)蟲(chong)細(xi)胞裂解(jie)液 (陽性(xing)對照(zhao))

(含10mL酶解緩沖液(ye)) 1mL 大(da)鼠內(nei)臟脂肪特異(yi)性(xing)絲酸蛋白(bai)酶(mei)抑制(zhi)因(yin)子(zi)(Vaspin)ELISA試劑(ji)盒 (Mouse ovarian cancer marker-CA125)  小鼠卵巢癌(ai)標(biao)誌物CA125 96T

NSF： N-乙基順丁烯二敏(min)感融(rong)合(he)蛋白(bai)抗(kang)體 MC3T3-E1 Subclone 14細(xi)胞，小鼠原成骨細(xi)胞 人(ren)肝(gan)癌(ai)細(xi)胞系(xi),LM-6細(xi)胞 CL-0112HMy2.CIR(人(ren)B淋(lin)巴母(mu)細(xi)胞)5×106cells/瓶×2

FIGF Others Mouse 小鼠 VEGF-D / VEGFD / FIGF 人(ren)細(xi)胞裂解(jie)液 (陽性(xing)對照(zhao)) 大鼠內(nei)臟脂肪特異(yi)性(xing)絲酸蛋白(bai)酶(mei)抑制(zhi)劑(ji)(vaspin)ELISA試劑(ji)盒 HD  大鼠組織蛋白(bai)去(qu)乙酰(xian)化酶 96T

KCNT2： 鈣激活(huo)通(tong)道蛋白(bai)KCNT2抗(kang)體 rRTEC, 大鼠腎小管上(shang)皮細(xi)胞 [CIP 104786]細(xi)胞 293 [HEK-293] (人(ren)胚腎細(xi)胞)

C7 Others Human 人(ren) C7 / Compleme compone 7 人(ren)細(xi)胞裂解(jie)液 (陽性(xing)對照(zhao)) 牛白(bai)介素(su)1β(IL-1β)ELISA試劑(ji)盒 BrdU (Bromodeoxyuridine) 溴脫(tuo)氧(yang)尿苷(gan) 50mg

KIR5.1： 細(xi)胞內(nei)流通(tong)道蛋白(bai)Kir5.1抗(kang)體 人(ren)胰腺腺泡上(shang)皮癌(ai);HPAC

MES-13細(xi)胞，小鼠腎小球系(xi)膜(mo)細(xi)胞 K562(慢性(xing)髓(sui)原(yuan)白(bai)血(xue)病) 豚鼠肺細(xi)胞;GP-F1 牛白(bai)介素(su)1β(IL-1β)ELISA試劑(ji)盒 Beta Amyloid 29-40 β澱粉(fen)樣(yang)肽(tai)29-40(野生(sheng)型(xing)) 0.1mg

phospho-KIR5.1(Ser416)： 0酸化細(xi)胞內(nei)流通(tong)道蛋白(bai)Kir5.1抗(kang)體 CD5 Others Mouse 小鼠 CD5 / LEU1 人(ren)細(xi)胞裂解(jie)液 (陽性(xing)對照(zhao))

Duck embryo鴨(ya)胚(pei)胎(tai)成纖維(wei)細(xi)胞Syndecan 3： Syndecan 3蛋白(bai)抗(kang)體 CL-0141LLC-MK2(恒河猴腎細(xi)胞)5×106cells/瓶×2

HuH-7人(ren)肝(gan)癌(ai)細(xi)胞 大鼠P物質受(shou)體(ti)(SP-R)ELISA 試劑(ji)盒 PABA(Human para-aminobenzoic acid)  人(ren)對基苯 96T

SP-C Propeptide： 肺表面(mian)活(huo)性(xing)蛋白(bai)C前體肽(tai)抗體(ti) IL13RA2 Others Canine 狗 IL13RA2 / IL13R 人(ren)細(xi)胞裂解(jie)液 (陽性(xing)對照(zhao))

HK-2 人(ren)腎近(jin)曲小管上(shang)皮細(xi)胞 大鼠P物質(SP)ELISA試劑(ji)盒 LPA(Human L-phenylalanine)  人(ren)苯 96T

Phospho-Smad1 (Ser463)： 0酸化細(xi)胞信(xin)號轉(zhuan)導(dao)分(fen)子(zi)Smad-1抗(kang)體 B16-F1細(xi)胞，鼠黑色素瘤細(xi)胞系(xi) 血(xue)細(xi)胞瘤細(xi)胞系(xi),Ramos細(xi)胞 倉鼠/小鼠雜交瘤細(xi)胞;145-2C11

三、培養註(zhu)意(yi)事(shi)項(xiang) 

1. 收(shou)到(dao)細(xi)胞後首(shou)先(xian)觀(guan)察細(xi)胞瓶是(shi)否(fou)完好(hao)，培(pei)養液(ye)是否(fou)有漏(lou)液、渾(hun)濁等現(xian)象，若有上(shang)述現(xian)象 發生(sheng)請及(ji)時和我(wo)們聯(lian)系(xi)。

2. 仔細(xi)閱(yue)讀細(xi)胞說(shuo)明書，了解細(xi)胞相(xiang)關信(xin)息，如(ru)細(xi)胞形(xing)態(tai)、所用培養基、血(xue)清比(bi)例(li)、所需(xu) 細(xi)胞因(yin)子(zi)等(deng)，確(que)保(bao)細(xi)胞培養條(tiao)件(jian)壹致，若由(you)於培(pei)養條(tiao)件(jian)不壹致而導(dao)致(zhi)細(xi)胞出現(xian)問題，責(ze)任由(you) 客戶自行承(cheng)擔(dan)。

3. 用(yong) 75%酒精(jing)擦拭(shi)細(xi)胞瓶表(biao)面(mian)，顯微鏡(jing)下觀察(cha)細(xi)胞狀(zhuang)態。因(yin)運(yun)輸(shu)問(wen)題，部(bu)分(fen)細(xi)胞由(you)於溫(wen)度(du) 變化及(ji)劇(ju)烈(lie)碰(peng)亡(wang)破(po)碎(sui)形(xing)成(cheng)碎片，是正(zheng)常現(xian)象。觀(guan)察(cha)好(hao)細(xi)胞狀(zhuang)態後，75%酒精(jing)消毒(du)瓶(ping)壁將 T25 瓶(ping)置(zhi)於 37℃培養箱放置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁細(xi)胞可以(yi)消化，懸(xuan)浮細(xi)胞直(zhi)接(jie)混(hun)勻收(shou)集細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，棄上(shang) 清。加(jia) 5 mL PBS 重懸(xuan)細(xi)胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，用(yong)新鮮的培養基重懸(xuan) 細(xi)胞，並(bing)接(jie)種(zhong)到(dao)新的培養瓶(ping)或培(pei)養皿(min)中，置(zhi)於培養箱中進(jin)行培(pei)養。

5. 請客戶用相(xiang)同條(tiao)件(jian)的培養基用於細(xi)胞培養。

6. 建(jian)議客戶收(shou)到(dao)細(xi)胞後前 3 天(tian)各(ge)拍(pai)幾(ji)張(zhang)細(xi)胞照片，記錄細(xi)胞狀(zhuang)態，便於和(he)我(wo)司技術(shu)部(bu)溝(gou)通(tong) 交流。由(you)於運(yun)輸的原因(yin)，個別敏(min)感細(xi)胞會(hui)出(chu)現(xian)不穩定的情況(kuang)，請及(ji)時和我(wo)們聯(lian)系(xi)，告(gao)知細(xi)胞 的具體(ti)情況(kuang)，以(yi)便我(wo)們的技術(shu)人(ren)員(yuan)跟蹤回(hui)訪(fang)直(zhi)至問(wen)題解決(jue)。

7. 該細(xi)胞僅供(gong)科(ke)研(yan)使用(yong)。

8. 備註(zhu)：運(yun)輸用的培養基 (灌液培養基) 不能再(zai)用來培養細(xi)胞，請換(huan)用按照說(shuo)明書細(xi)胞培 養條(tiao)件(jian)新配制(zhi)的培養基來培養細(xi)胞。     收(shou)到(dao)細(xi)胞後第(di)壹次傳(chuan)代(dai)建(jian)議 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳(chuan)代(dai)就是 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個 T25 瓶或者(zhe) 2 個 6cm 皿(min)。不是 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個10cm 皿(min)。