E0771小(xiao)鼠(shu)髓樣乳(ru)腺癌細(xi)胞(bao)

公(gong)司(si)產(chan)品僅供科研研(yan)究(jiu)使用、不得(de)用於臨床(chuang)診(zhen)斷！

1、細(xi)胞(bao)傳(chuan)代：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長至(zhi)覆蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶的(de) 80%面積(ji)時(shi)，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶(ping)中的(de)培養(yang)液(ye)，用 PBS 清洗(xi)細(xi)胞(bao)壹(yi)次；

2）添加 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶中(zhong)，倒置(zhi)顯微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察(cha)，待細(xi)胞(bao)回(hui)縮(suo)變圓(yuan)後加入(ru) 5ml 培(pei)養

液(ye)終止消(xiao)化(hua)，再(zai)輕輕吹打(da)細(xi)胞(bao)使之(zhi)脫(tuo)落，然(ran)後將懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移至 15ml 離(li)心(xin)管中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄上(shang)清(qing)，沈(chen)澱(dian)細(xi)胞(bao)用 1-2ml 培養(yang)基重(zhong)懸(xuan)，然(ran)後按(an) 1:2 比例(li)進(jin)行分(fen)瓶傳(chuan)代，最後放入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)

培(pei)養箱中培(pei)養；

2、細(xi)胞(bao)凍(dong)存：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長至(zhi)覆蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶的(de) 80%面積(ji)時(shi)，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶(ping)中的(de)培養(yang)液(ye)，用 PBS 清洗(xi)細(xi)胞(bao)壹(yi)次；

2）添加 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶中(zhong)，倒置(zhi)顯微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察(cha)，待細(xi)胞(bao)回(hui)縮(suo)變圓(yuan)後加入(ru)培(pei)養液(ye)終

止消(xiao)化(hua)，輕輕吹打(da)細(xi)胞(bao)使之(zhi)脫(tuo)落，然(ran)後將懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移至 15ml 離(li)心(xin)管中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用適量(liang)的(de)凍存(cun)液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸細(xi)胞(bao)，並(bing)放置(zhi)於凍存(cun)管(guan)中；

4）先將細(xi)胞(bao)凍(dong)存管放置(zhi)於-20℃ 1.5h，然後將其(qi)移入-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後轉(zhuan)入液(ye)氮中(zhong)進(jin)行長期保(bao)存。使用程序(xu)

降(jiang)溫盒可直接放入(ru)-80℃。

二(er)、細(xi)胞(bao)培(pei)養操作(zuo)

1) 復蘇(su)細(xi)胞(bao)：以下(xia)細(xi)胞(bao)培(pei)養凍存處(chu)理(li)僅供參考(kao)，具(ju)體(ti)操(cao)作(zuo)步(bu)驟以隨(sui)貨產(chan)品說明(ming)書為(wei)主(zhu)。將含(han)有(you)1 mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)的(de)凍存(cun)管在 37℃水浴中(zhong)迅(xun)速(su)搖(yao)晃解(jie)凍(dong)，加4 mL培(pei)養(yang)基混(hun)合(he)均勻。在(zai)1000 rpm條件(jian)下(xia)離(li)心(xin)3 min，棄去上(shang)清(qing)液(ye)，加1-2 mL培(pei)養(yang)基後吹(chui)勻。然後將所有(you)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)加入(ru)含(han)適(shi)量(liang)培(pei)養基的(de)培養(yang)瓶中培養過(guo)夜(ye)（或(huo)將細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)加入(ru)10 cm皿中(zhong)，加入(ru)約8 mL培(pei)養(yang)基(ji)，培養(yang)過(guo)夜(ye)）。第(di)二(er)天換液(ye)並(bing)檢查細(xi)胞(bao)密(mi)度。

2) 細(xi)胞(bao)傳(chuan)代：如果細(xi)胞(bao)密(mi)度達(da) 80%-90%，即可(ke)進(jin)行傳(chuan)代培養。

a、棄去(qu)培(pei)養(yang)上(shang)清(qing)，用不含(han)鈣(gai)、鎂(mei)離(li)子(zi)的(de)PBS潤洗(xi)細(xi)胞(bao)1-2次(ci)。

b、加1 mL消(xiao)化(hua)液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培養(yang)瓶(ping)中，使消(xiao)化(hua)液(ye)浸(jin)潤所有(you)細(xi)胞(bao)，將培(pei)養(yang)瓶(ping)置(zhi)於37℃培養(yang)箱中消(xiao)化(hua)1-2 min（視(shi)細(xi)胞(bao)情(qing)況而定(ding)），然後在(zai)顯微鏡下(xia)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)消(xiao)化(hua)情(qing)況，若(ruo)細(xi)胞(bao)大(da)部分(fen)變圓(yuan)並(bing)脫(tuo)落，迅(xun)速(su)拿(na)回(hui)操(cao)作(zuo)臺(tai)，輕敲幾(ji)下(xia)培(pei)養(yang)瓶(ping)後加2-3ml培(pei)養(yang)基終止消(xiao)化(hua)。輕輕打(da)勻後裝(zhuang)入無(wu)菌(jun)離(li)心(xin)管中，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄去上(shang)清(qing)液(ye)，補(bu)加1-2 mL培(pei)養(yang)液(ye)後吹(chui)勻。

c、將細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)按(an)1:2比例(li)分到(dao)新的(de)含(han)8 mL培(pei)養(yang)基(ji)的(de)新皿中(zhong)或(huo)者瓶(ping)中，置(zhi)於培養(yang)箱中培(pei)養。 3) 細(xi)胞(bao)凍(dong)存：待細(xi)胞(bao)生(sheng)長狀(zhuang)態(tai)良(liang)好時(shi)，可進(jin)行細(xi)胞(bao)凍(dong)存。下(xia)面(mian) T25 瓶(ping)為(wei)例(li)；a、收(shou)集細(xi)胞(bao)及細(xi)胞(bao)培(pei)養液(ye)，裝(zhuang)入無(wu)菌(jun)離(li)心(xin)管中，1000 rpm條件(jian)下(xia)離(li)心(xin)4 min，棄去上(shang)清(qing)液(ye)，用PBS清洗(xi)壹遍，棄(qi)盡PBS，進(jin)行細(xi)胞(bao)計(ji)數。

b、根據細(xi)胞(bao)數量加入(ru)無(wu)血清(qing)細(xi)胞(bao)凍(dong)存液(ye)，使細(xi)胞(bao)密(mi)度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍(dong)存管(guan)凍存1mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)，註(zhu)意(yi)凍(dong)存管做好標識。將凍(dong)存(cun)管(guan)放入(ru)-80℃冰箱，24 h後轉(zhuan)入液(ye)氮灌(guan)儲存。記(ji)錄凍(dong)存管(guan)位(wei)置(zhi)以便(bian)下(xia)次(ci)拿(na)取(qu)。

公司正(zheng)在出售(shou)的(de)產(chan)品：

NGB： 腦(nao)紅(hong)蛋(dan)白/神紅(hong)蛋(dan)白/神經(jing)球蛋(dan)白抗體(ti) 人(ren)肝臟間充質(zhi)幹(gan)細(xi)胞(bao)HMSC-hp

P3/NSI/1-Ag4-1 [NS-1]小(xiao)鼠(shu)骨髓瘤細(xi)胞(bao) P3/NSI/1-Ag4-1 mouse myeloma cell line [NS-1] DMEM培(pei)養基+10%FBS 大(da)鼠(shu)神經(jing)激(ji)肽B(NKB)ELISA試劑盒 AT  大(da)鼠(shu)抗 96T

Neurokinin A： 神(shen)經(jing)激(ji)肽A抗體(ti) CD70 Others Human 人(ren) CD70 / CD27L / TNFSF7 人(ren)細(xi)胞(bao)裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性對照(zhao))

CM-R116大(da)鼠(shu)視網膜(mo)色(se)素上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)培(pei)養基100mL 大(da)鼠(shu)神經(jing)激(ji)肽B(NKB)ELISA 試劑盒 NKB(Human Neurokinins B)  人(ren)神經(jing)激(ji)肽B 96T

Phospho-Numb (Ser276)： 0酸(suan)化膜(mo)相關(guan)蛋(dan)白Numb抗體(ti) 大(da)鼠(shu)肺泡巨噬細(xi)胞(bao);NR8383[AgC11x3A; NR8383.1]

CD51： 整(zheng)合素αV抗(kang)體 猞(she)猁皮(pi)膚成纖維樣(yang)細(xi)胞(bao);ELS1

MLTC-1細(xi)胞(bao)，小(xiao)鼠(shu)間質(zhi)細(xi)胞(bao)瘤(liu)細(xi)胞(bao) KG-1(白血病(bing)細(xi)胞(bao)) 人(ren)惡性(xing)黑色(se)素瘤(liu)細(xi)胞(bao);A-375 [A375] 人(ren)c-fos ELISA 試劑盒 Ubiquitin 泛素蛋(dan)白 0.5mg

IL-19/NG.1： 白細(xi)胞(bao)介(jie)素-19抗(kang)體 TNFRSF10D Others Human 人(ren) AILR4 / TNFRSF10D / DCR2 / CD264 人(ren)細(xi)胞(bao)裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性對照(zhao))

人(ren)肝竇(dou)內皮細(xi)胞(bao)RNAHHSEC miRNA5 μg 人(ren)CC趨(qu)化因(yin)子(zi)受體(ti)1(CCR1)ELISA 試(shi)劑盒 VASH1(Vasohibin 1) 兔(tu)抗血管(guan)抑(yi)制(zhi)蛋(dan)白1抗原(yuan) 0.5mg

IL-3： 白介素3抗(kang)體 人(ren)絨癌(ai)細(xi)胞(bao);JEG-3

E0771小(xiao)鼠(shu)髓樣乳(ru)腺癌細(xi)胞(bao)RNF21： 環(huan)指蛋(dan)白21抗體(ti) CL-0441SK-N-BE(2) (人(ren)神經(jing)母(mu)細(xi)胞(bao)瘤(liu)細(xi)胞(bao))5×106cells/瓶(ping)×2

正(zheng)常細(xi)胞(bao) 大(da)鼠(shu)白介素1受體(ti)拮(jie)抗劑(IL-1Ra)ELISA 試劑盒 MAPK(Human mitogen activited protein kinase)  人(ren)原激(ji)活的(de)蛋(dan)白激酶(mei)/MAP激(ji)酶(mei) 96T

RNF190： 環(huan)指蛋(dan)白190抗體(ti) TNFSF4 Others Cynomolgus 食(shi)蟹(xie)猴 OX-40L / TNFSF4 人(ren)細(xi)胞(bao)裂(lie)解(jie)液(ye) (陽(yang)性對照(zhao))

CAM191 EBV-轉(zhuan)化人(ren)淋巴(ba)細(xi)胞(bao) 大(da)鼠(shu)白介素1受體(ti)關(guan)聯激(ji)酶4(IRAK4)ELISA試劑盒 LZM(Human Lysozyme)  人(ren)96T

RIC8A： 酯(zhi)酶抑(yi)制(zhi)劑8抗體(ti) HLF細(xi)胞(bao)，胚(pei)肺細(xi)胞(bao) 人(ren)前列(lie)腺上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao),RWPE1細(xi)胞(bao) 人(ren)胚胎(tai)肌(ji)肉組織(zhi)來(lai)源細(xi)胞(bao);CCC-HSM-2

三(san)、培養(yang)註(zhu)意(yi)事(shi)項 

1. 收(shou)到細(xi)胞(bao)後首(shou)先(xian)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)瓶(ping)是否完好，培養(yang)液(ye)是(shi)否有(you)漏液(ye)、渾(hun)濁等現(xian)象(xiang)，若(ruo)有(you)上(shang)述(shu)現(xian)象(xiang) 發(fa)生(sheng)請及時(shi)和我(wo)們(men)聯系。

2. 仔細(xi)閱(yue)讀(du)細(xi)胞(bao)說(shuo)明書，了解(jie)細(xi)胞(bao)相關(guan)信息(xi)，如細(xi)胞(bao)形(xing)態(tai)、所用培養(yang)基、血(xue)清(qing)比(bi)例(li)、所需 細(xi)胞(bao)因(yin)子等，確保(bao)細(xi)胞(bao)培(pei)養條件(jian)壹(yi)致，若(ruo)由於培養(yang)條件(jian)不壹致(zhi)而導(dao)致(zhi)細(xi)胞(bao)出(chu)現(xian)問(wen)題，責(ze)任(ren)由 客戶自(zi)行(xing)承(cheng)擔(dan)。

3. 用 75%酒(jiu)精(jing)擦(ca)拭細(xi)胞(bao)瓶(ping)表面，顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)。因運(yun)輸問(wen)題，部(bu)分細(xi)胞(bao)由於溫度 變化(hua)及劇(ju)烈碰亡破碎(sui)形成碎(sui)片，是正(zheng)常現(xian)象(xiang)。觀(guan)察(cha)好細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)後，75%酒(jiu)精(jing)消(xiao)毒(du)瓶壁將 T25 瓶(ping)置(zhi)於 37℃培養(yang)箱放置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁細(xi)胞(bao)可(ke)以消(xiao)化(hua)，懸(xuan)浮細(xi)胞(bao)直(zhi)接混(hun)勻(yun)收(shou)集細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄上(shang) 清(qing)。加 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞(bao)，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用新鮮(xian)的(de)培養(yang)基重懸 細(xi)胞(bao)，並(bing)接種(zhong)到(dao)新(xin)的(de)培養(yang)瓶或(huo)培養(yang)皿中(zhong)，置(zhi)於培養(yang)箱中進(jin)行培(pei)養。

5. 請(qing)客戶用相同(tong)條件(jian)的(de)培養(yang)基用於細(xi)胞(bao)培(pei)養。

6. 建(jian)議客戶收(shou)到細(xi)胞(bao)後前(qian) 3 天各拍(pai)幾(ji)張細(xi)胞(bao)照(zhao)片(pian)，記(ji)錄細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)，便於和我(wo)司(si)技(ji)術(shu)部溝通(tong) 交流。由於運輸(shu)的(de)原因(yin)，個別(bie)敏(min)感(gan)細(xi)胞(bao)會(hui)出現(xian)不穩定(ding)的(de)情況，請及時(shi)和我(wo)們(men)聯系，告(gao)知(zhi)細(xi)胞(bao) 的(de)具體(ti)情況，以便(bian)我(wo)們(men)的(de)技(ji)術(shu)人(ren)員跟蹤(zong)回(hui)訪(fang)直(zhi)至(zhi)問(wen)題解(jie)決(jue)。

7. 該細(xi)胞(bao)僅供科研使用。

8. 備(bei)註(zhu)：運輸(shu)用的(de)培養(yang)基 (灌液(ye)培(pei)養基(ji)) 不能再(zai)用來培(pei)養細(xi)胞(bao)，請(qing)換用按(an)照(zhao)說(shuo)明(ming)書細(xi)胞(bao)培(pei) 養條件(jian)新(xin)配(pei)制(zhi)的(de)培養(yang)基來培養細(xi)胞(bao)。     收(shou)到細(xi)胞(bao)後第(di)壹次傳(chuan)代建(jian)議 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳(chuan)代就是 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個 T25 瓶(ping)或(huo)者 2 個(ge) 6cm 皿。不是 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個10cm 皿。