GL-261+luc小(xiao)鼠(shu)膠(jiao)質細胞瘤(liu)熒(ying)光素(su)酶標(biao)記

公司產品(pin)僅供科(ke)研研究使(shi)用、不得用於臨床(chuang)診(zhen)斷！

1、細(xi)胞(bao)傳(chuan)代(dai)：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)至覆(fu)蓋培(pei)養瓶的 80%面(mian)積(ji)時，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶中(zhong)的培養(yang)液，用 PBS 清(qing)洗細胞壹次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消化(hua)液約 1ml 至培養(yang)瓶(ping)中，倒置顯微(wei)鏡下觀察(cha)，待(dai)細(xi)胞(bao)回(hui)縮變圓後(hou)加入(ru) 5ml 培(pei)養

液終止消化(hua)，再(zai)輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細(xi)胞使(shi)之脫(tuo)落(luo)，然(ran)後(hou)將(jiang)懸(xuan)液轉移至 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄(qi)上(shang)清(qing)，沈(chen)澱(dian)細(xi)胞(bao)用(yong) 1-2ml 培養基(ji)重懸(xuan)，然(ran)後(hou)按 1:2 比(bi)例(li)進行(xing)分瓶(ping)傳代，最後(hou)放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞

培養(yang)箱中(zhong)培(pei)養；

2、細胞凍存(cun)：

1）細(xi)胞生(sheng)長(chang)至覆(fu)蓋培(pei)養瓶的 80%面(mian)積(ji)時，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶中(zhong)的培養(yang)液，用 PBS 清(qing)洗細胞壹次(ci)；

2）添(tian)加 0.25%消化(hua)液約 1ml 至培養(yang)瓶(ping)中，倒置顯微(wei)鏡下觀察(cha)，待(dai)細(xi)胞(bao)回(hui)縮變圓後(hou)加入(ru)培(pei)養液終

止消化(hua)，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細(xi)胞使(shi)之脫(tuo)落(luo)，然(ran)後(hou)將(jiang)懸(xuan)液轉移至 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用(yong)適(shi)量的凍存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細(xi)胞，並放置於凍存(cun)管(guan)中；

4）先將細(xi)胞凍存(cun)管(guan)放置於-20℃ 1.5h，然(ran)後(hou)將(jiang)其(qi)移入(ru)-80℃過夜，24h 後(hou)轉(zhuan)入(ru)液氮中進(jin)行(xing)長期保存(cun)。使(shi)用程序

降(jiang)溫盒(he)可直(zhi)接(jie)放(fang)入-80℃。

二(er)、細胞(bao)培(pei)養(yang)操作

1) 復(fu)蘇(su)細(xi)胞(bao)：以下細胞培養(yang)凍存(cun)處(chu)理僅供參考，具體操作步(bu)驟(zhou)以隨貨產品說明書為(wei)主。將含(han)有1 mL細(xi)胞懸(xuan)液的凍存(cun)管(guan)在 37℃水浴中迅(xun)速(su)搖(yao)晃解凍，加4 mL培(pei)養(yang)基(ji)混合(he)均勻。在1000 rpm條件(jian)下離(li)心(xin)3 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液，加1-2 mL培(pei)養(yang)基(ji)後(hou)吹(chui)勻。然(ran)後(hou)將(jiang)所(suo)有(you)細胞懸(xuan)液加入(ru)含(han)適(shi)量培養基(ji)的培養(yang)瓶(ping)中(zhong)培(pei)養過(guo)夜(ye)（或將(jiang)細(xi)胞懸(xuan)液加入(ru)10 cm皿(min)中(zhong)，加入(ru)約(yue)8 mL培養(yang)基(ji)，培養過(guo)夜）。第二(er)天(tian)換液並檢(jian)查(zha)細(xi)胞(bao)密(mi)度。

2) 細(xi)胞傳代：如(ru)果(guo)細(xi)胞(bao)密(mi)度達(da) 80%-90%，即(ji)可(ke)進(jin)行(xing)傳代(dai)培養。

a、棄(qi)去培養上(shang)清(qing)，用不含(han)鈣、鎂離(li)子(zi)的PBS潤洗細胞1-2次。

b、加1 mL消化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培養瓶中(zhong)，使(shi)消化(hua)液浸(jin)潤所有(you)細(xi)胞，將培(pei)養(yang)瓶(ping)置於37℃培養箱中(zhong)消化(hua)1-2 min（視(shi)細(xi)胞(bao)情(qing)況而(er)定(ding)），然(ran)後(hou)在顯微(wei)鏡下觀察(cha)細胞(bao)消化(hua)情(qing)況，若細(xi)胞大(da)部(bu)分(fen)變圓並(bing)脫(tuo)落(luo)，迅(xun)速(su)拿(na)回(hui)操作臺(tai)，輕(qing)敲(qiao)幾(ji)下培養瓶後(hou)加2-3ml培(pei)養(yang)基(ji)終止消化(hua)。輕(qing)輕(qing)打(da)勻(yun)後(hou)裝入(ru)無(wu)菌離(li)心(xin)管(guan)中，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液，補(bu)加1-2 mL培(pei)養(yang)液後(hou)吹(chui)勻。

c、將(jiang)細胞(bao)懸(xuan)液按1:2比(bi)例(li)分到(dao)新(xin)的含(han)8 mL培養(yang)基(ji)的新(xin)皿(min)中(zhong)或者(zhe)瓶(ping)中，置於培養箱中(zhong)培(pei)養。 3) 細胞凍存(cun)：待(dai)細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)狀態(tai)良好時，可(ke)進(jin)行(xing)細胞(bao)凍存(cun)。下面(mian) T25 瓶(ping)為例；a、收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)及細胞(bao)培(pei)養液，裝入(ru)無(wu)菌離(li)心(xin)管(guan)中，1000 rpm條件(jian)下離(li)心(xin)4 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液，用PBS清(qing)洗壹遍，棄(qi)盡(jin)PBS，進(jin)行(xing)細胞(bao)計數。

b、根(gen)據細(xi)胞數量加入(ru)無(wu)血清(qing)細胞(bao)凍存(cun)液，使(shi)細胞(bao)密(mi)度5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混勻(yun)，每支凍存(cun)管(guan)凍存(cun)1mL細(xi)胞懸(xuan)液，註意凍存(cun)管(guan)做好標識。將凍存(cun)管(guan)放入(ru)-80℃冰(bing)箱，24 h後(hou)轉(zhuan)入(ru)液氮灌儲存(cun)。記錄(lu)凍存(cun)管(guan)位置以便下次拿取。

公司(si)正(zheng)在出售的產品(pin)：

LRP10 Others Human 人(ren) LRP10 人(ren)細(xi)胞裂解(jie)液 (陽性對照) 大(da)鼠(shu)色(se)酸(suan)5羥化(hua)酶(mei)2(TPH2)ELISA試(shi)劑盒(he) FE(Mouse ferritin)  小(xiao)鼠(shu)鐵蛋白 96T

IKB beta： 核(he)因子κB抑制(zhi)蛋白β抗(kang)體 人(ren)絨(rong)毛(mao)膜(mo)毛細血管(guan)內(nei)皮細胞(bao)HVCEC

HN13口腔鱗狀(zhuang)細胞(bao)癌(ai)細(xi)胞(bao) HN13 oral squamous cell carcinoma cells DMEM+10%FBS 大(da)鼠(shu)色(se)素(su)上(shang)皮衍(yan)生(sheng)因子(PEDF)ELISA試(shi)劑盒(he) CA-2(Mouse carbonic anhydrase 2)  小(xiao)鼠(shu)酶(mei)2 96T

Phospho-NMDAR2A (Tyr1325)： 0酸(suan)化(hua)谷(gu)酸(suan)受(shou)體2A抗(kang)體 MICB Others Human 人(ren) MICB 人(ren)細(xi)胞裂解(jie)液 (陽性對照)

CM-R100大(da)鼠(shu)腦(nao)動脈血管(guan)內(nei)皮細胞(bao)培養(yang)基(ji)100mL 大(da)鼠(shu)色(se)素(su)上(shang)皮衍(yan)生(sheng)因子(PEDF)ELISA 試(shi)劑盒(he) CNP(Human C -type natriuretic peptide)  人(ren)C型(xing)尿肽 96T

IL-17RB： 白介素(su)-17B受體(ti)抗(kang)體 CBLC Others Human 人(ren) Cbl-c / CBL-3 桿(gan)狀(zhuang)病毒(du)-昆(kun)蟲(chong)細胞(bao)裂解(jie)液 (陽性對照)

人(ren)主(zhu)動脈平(ping)滑(hua)肌(ji)細(xi)胞培養(yang)基(ji) 100mL 人(ren)B細(xi)胞生(sheng)長(chang)因子(BCGF)ELISA 試(shi)劑盒(he) VEGFR-3/FLt-4 血管(guan)內(nei)皮細胞(bao)生(sheng)長(chang)因子受體-3(多(duo)肽) 0.5mg

IL-18R Beta/IL1R7/CD218b： 白細(xi)胞介素(su)-18受體(ti)β鏈(lian)抗(kang)體 人(ren)臍(qi)動脈內(nei)皮細胞(bao) 人(ren)正(zheng)常胚(pei)肺成纖(xian)維(wei)細胞，MRC-5細(xi)胞(bao) SHZ-88(癌(ai)細(xi)胞(bao))

BACE2 Others Mouse 小(xiao)鼠(shu) BACE2 / Beta secretase 2 人(ren)細(xi)胞裂解(jie)液 (陽性對照) 人(ren)B細(xi)胞淋(lin)巴瘤(liu)因子2(Bcl-2)ELISA 試(shi)劑盒(he) VEGFR-3(Vascular Epidemal growth factor receptor-3) 血管(guan)內(nei)皮細胞(bao)生(sheng)長(chang)因子受體-3抗(kang)原(yuan) 0.5mg

IL-21： 白介素(su)21抗(kang)體 豚鼠(shu)皮膚(fu)細(xi)胞(bao);GP-S3

GL-261+luc小(xiao)鼠(shu)膠(jiao)質細胞瘤(liu)熒(ying)光素(su)酶標(biao)記RBM20： RNA結(jie)合(he)蛋白20抗(kang)體 DPP4 Others Human 人(ren) DPPIV / DPP4 / CD26 人(ren)細(xi)胞裂解(jie)液 (陽性對照)

人(ren)脈(mai)絡(luo)叢內(nei)皮細胞(bao)裂解(jie)物(wu)HCPECL 大(da)鼠(shu)白(bai)介素(su)1可溶性受體Ⅰ(IL-1sRⅠ)ELISA 試(shi)劑盒(he) GSTpi(Human glutathione S-transferases0  人(ren)硫(liu)轉移(yi)酶pi基(ji)因 96T

RNF215： 環(huan)指(zhi)蛋白215抗(kang)體 斑(ban)馬(ma)魚(yu)尾鰭(qi)細胞(bao);AB.9

EB病毒(du)轉(zhuan)化(hua)的人(ren)B淋(lin)巴細(xi)胞;KM932 人(ren)臍(qi)動脈內(nei)皮細胞(bao)培養(yang)基(ji) 100mL 大(da)鼠(shu)白(bai)介素(su)1δ(FIL1δ)ELISA試(shi)劑盒(he) GSTs(Human glutathione S-transferases)  人(ren)S轉(zhuan)移酶(mei) 96T

RNF187： 環(huan)指(zhi)蛋白187抗(kang)體 CL-0425RKO-AS45-1(人(ren)結(jie)腸(chang)癌(ai)轉(zhuan)基(ji)因細胞)5×106cells/瓶×2

三(san)、培(pei)養(yang)註(zhu)意事項 

1. 收(shou)到(dao)細胞後(hou)首先觀察(cha)細胞(bao)瓶是(shi)否完好，培養液是否有漏(lou)液、渾濁等(deng)現象(xiang)，若(ruo)有(you)上(shang)述(shu)現(xian)象(xiang) 發生(sheng)請(qing)及時和(he)我們(men)聯系(xi)。

2. 仔(zai)細(xi)閱讀細(xi)胞說明書，了解細(xi)胞(bao)相(xiang)關信息，如(ru)細(xi)胞(bao)形態(tai)、所(suo)用(yong)培(pei)養基(ji)、血清(qing)比(bi)例(li)、所需 細胞(bao)因子等(deng)，確保細胞培(pei)養條件(jian)壹致(zhi)，若(ruo)由(you)於培養條件(jian)不壹致而(er)導致(zhi)細(xi)胞(bao)出現(xian)問題(ti)，責任(ren)由 客(ke)戶(hu)自(zi)行(xing)承(cheng)擔。

3. 用 75%酒精擦(ca)拭細(xi)胞(bao)瓶(ping)表面(mian)，顯(xian)微(wei)鏡下觀察(cha)細胞(bao)狀態(tai)。因運輸問(wen)題(ti)，部(bu)分(fen)細胞由於溫度 變化及劇烈碰亡(wang)破(po)碎(sui)形(xing)成碎片(pian)，是(shi)正(zheng)常現(xian)象(xiang)。觀(guan)察(cha)好細胞狀態(tai)後(hou)，75%酒精消毒(du)瓶(ping)壁將 T25 瓶置於 37℃培養箱放(fang)置 2-4h。

4. 貼(tie)壁細胞可以(yi)消化(hua)，懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞直接(jie)混勻(yun)收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄(qi)上(shang) 清(qing)。加 5 mL PBS 重懸(xuan)細(xi)胞，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用(yong)新(xin)鮮的培養(yang)基(ji)重懸(xuan) 細(xi)胞，並接(jie)種到(dao)新(xin)的培養(yang)瓶(ping)或培(pei)養(yang)皿(min)中(zhong)，置於培養箱中(zhong)進(jin)行(xing)培養(yang)。

5. 請客(ke)戶(hu)用(yong)相(xiang)同條件(jian)的培養(yang)基(ji)用於細胞培養(yang)。

6. 建議(yi)客(ke)戶(hu)收(shou)到(dao)細胞後(hou)前(qian) 3 天(tian)各(ge)拍(pai)幾(ji)張細胞(bao)照片(pian)，記錄(lu)細胞(bao)狀態(tai)，便(bian)於和(he)我司(si)技術(shu)部(bu)溝(gou)通 交(jiao)流。由(you)於運輸的原(yuan)因，個別敏感細胞(bao)會出現(xian)不穩定(ding)的情(qing)況，請及時和(he)我們(men)聯系(xi)，告知(zhi)細胞(bao) 的具體情(qing)況，以便(bian)我們(men)的技術(shu)人(ren)員(yuan)跟蹤(zong)回(hui)訪直(zhi)至問題(ti)解決(jue)。

7. 該(gai)細(xi)胞(bao)僅供科(ke)研使(shi)用。

8. 備註：運輸用(yong)的培養(yang)基(ji) (灌液培養基(ji)) 不能再用來(lai)培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)，請換用按照說明書細(xi)胞培 養(yang)條件(jian)新(xin)配制(zhi)的培養(yang)基(ji)來(lai)培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)。     收(shou)到(dao)細胞後(hou)第壹次傳代建議(yi) 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註(zhu)意：  1:2 傳代就是 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶(ping)或者(zhe) 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不是 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿(min)。