COLO205人結(jie)腸(chang)癌細胞

公司產品僅供科(ke)研(yan)研(yan)究(jiu)使用、不(bu)得(de)用於臨(lin)床診斷！

1、細胞傳代：

1）細胞生長(chang)至(zhi)覆蓋(gai)培養(yang)瓶(ping)的(de) 80%面積時，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶(ping)中的培(pei)養液(ye)，用 PBS 清(qing)洗(xi)細胞壹(yi)次(ci)；

2）添加 0.25%消化液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶(ping)中，倒置顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)，待細胞回縮(suo)變(bian)圓後(hou)加入(ru) 5ml 培(pei)養

液終止消化，再(zai)輕(qing)輕吹打(da)細胞使之脫落，然後(hou)將懸液轉移至(zhi) 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）棄上清(qing)，沈澱細胞用 1-2ml 培(pei)養(yang)基(ji)重(zhong)懸，然後(hou)按 1:2 比(bi)例(li)進行(xing)分瓶(ping)傳(chuan)代，最後放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細胞

培養(yang)箱(xiang)中培養(yang)；

2、細胞凍存(cun)：

1）細胞生長(chang)至(zhi)覆蓋(gai)培養(yang)瓶(ping)的(de) 80%面積時，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶(ping)中的培(pei)養液(ye)，用 PBS 清(qing)洗(xi)細胞壹(yi)次(ci)；

2）添加 0.25%消化液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶(ping)中，倒置顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)，待細胞回縮(suo)變(bian)圓後(hou)加入(ru)培(pei)養液終

止消化，輕(qing)輕(qing)吹打(da)細胞使之脫落，然後(hou)將懸液轉移至(zhi) 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）用適(shi)量(liang)的(de)凍存(cun)液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸細胞，並(bing)放(fang)置於凍存(cun)管(guan)中；

4）先將細胞凍存(cun)管(guan)放(fang)置於-20℃ 1.5h，然後(hou)將其移(yi)入(ru)-80℃過(guo)夜，24h 後轉入(ru)液(ye)氮(dan)中進行(xing)長(chang)期(qi)保存(cun)。使用程(cheng)序(xu)

降溫盒(he)可直(zhi)接(jie)放(fang)入(ru)-80℃。

壹(yi)、商(shang)品(pin)介(jie)紹(shao)：

二、細胞培養(yang)操(cao)作

1) 復(fu)蘇(su)細胞：以下(xia)細胞培養(yang)凍存(cun)處(chu)理(li)僅供參(can)考(kao)，具(ju)體(ti)操作(zuo)步驟(zhou)以隨(sui)貨(huo)產(chan)品(pin)說明(ming)書為主。將含(han)有(you)1 mL細胞懸液的凍存(cun)管(guan)在(zai) 37℃水(shui)浴(yu)中迅(xun)速搖(yao)晃(huang)解凍，加4 mL培養(yang)基混(hun)合均勻(yun)。在(zai)1000 rpm條(tiao)件下離心3 min，棄去上清(qing)液(ye)，加1-2 mL培養(yang)基後吹勻(yun)。然後(hou)將所有(you)細胞懸液加入(ru)含(han)適量(liang)培養(yang)基的培養(yang)瓶(ping)中培養(yang)過夜（或(huo)將細胞懸液加入(ru)10 cm皿(min)中，加入(ru)約(yue)8 mL培(pei)養(yang)基(ji)，培(pei)養過夜）。第(di)二天換(huan)液並(bing)檢查細胞密度(du)。

2) 細胞傳代：如果(guo)細胞密度(du)達 80%-90%，即(ji)可(ke)進行(xing)傳代培(pei)養(yang)。

a、棄去(qu)培養(yang)上清(qing)，用不(bu)含(han)鈣(gai)、鎂(mei)離子的PBS潤洗(xi)細胞1-2次。

b、加1 mL消化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(pei)養瓶(ping)中，使消化液(ye)浸(jin)潤所有(you)細胞，將培養(yang)瓶(ping)置於37℃培(pei)養箱(xiang)中消化1-2 min（視(shi)細胞情況(kuang)而(er)定(ding)），然後(hou)在(zai)顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)細胞消化情(qing)況(kuang)，若細胞大(da)部(bu)分變圓(yuan)並(bing)脫落，迅(xun)速拿(na)回操(cao)作臺，輕(qing)敲(qiao)幾下培(pei)養瓶(ping)後(hou)加2-3ml培養(yang)基終止消化。輕(qing)輕(qing)打勻後(hou)裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清(qing)液(ye)，補加1-2 mL培養(yang)液後吹勻(yun)。

c、將細胞懸液按1:2比(bi)例(li)分到新(xin)的含(han)8 mL培養(yang)基的(de)新皿中或(huo)者(zhe)瓶(ping)中，置於培(pei)養箱(xiang)中培養(yang)。 3) 細胞凍存(cun)：待(dai)細胞生長(chang)狀態(tai)良好時，可進行(xing)細胞凍存(cun)。下(xia)面 T25 瓶(ping)為例；a、收集(ji)細胞及(ji)細胞培養(yang)液(ye)，裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清(qing)液(ye)，用PBS清(qing)洗(xi)壹(yi)遍(bian)，棄(qi)盡(jin)PBS，進行(xing)細胞計數。

b、根據(ju)細胞數量(liang)加入(ru)無(wu)血(xue)清(qing)細胞凍存(cun)液(ye)，使細胞密度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混(hun)勻，每(mei)支凍存(cun)管(guan)凍存(cun)1mL細胞懸液，註(zhu)意(yi)凍存(cun)管(guan)做(zuo)好標識。將凍存(cun)管(guan)放(fang)入(ru)-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後(hou)轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮(dan)灌(guan)儲(chu)存(cun)。記錄(lu)凍存(cun)管(guan)位(wei)置以便(bian)下(xia)次(ci)拿取(qu)。

公司正在(zai)出售(shou)的(de)產品(pin)：

大(da)鼠血(xue)管(guan)外(wai)膜(mo)成纖(xian)維細胞培養(yang)基(ji) 100mL 大(da)鼠結(jie)合蛋(dan)白(bai)4(IGFBP4)ELISA試劑(ji)盒(he) Mouse anti-red cell antibody  小(xiao)鼠抗(kang)紅細胞抗(kang)體(ti) 5637, 人膀胱癌細胞 蓖麻蠶(can)卵細胞,NISE-Sacy-12細胞 TE 353.Sk(人正(zheng)常(chang)皮(pi)膚細胞)

KDR Others Mouse 小(xiao)鼠 VEGFR2 / Flk-1 / CD309 / KDR 人(ren)細胞裂解液(ye) (陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)) 大(da)鼠結(jie)合蛋(dan)白(bai)4(IGFBP-4)ELISA 試劑(ji)盒(he) MV IgG 麻疹(zhen)病(bing)毒 IgG(間(jian)接(jie)法(fa)二步法(fa))

5-Mar： 膜(mo)相關環指蛋(dan)白(bai)5抗(kang)體(ti) 人導管(guan)癌細胞;ZR-75-1

NRK大(da)鼠腎(shen)細胞 In NRK rat kidney cells DMEM培養(yang)基(ji)+10%FBS 大(da)鼠結(jie)合蛋(dan)白(bai)3(IGFBP-3)ELISA試劑(ji)盒(he) MV IgM 麻疹(zhen)病(bing)毒 IgM(間(jian)接(jie)法(fa)二步法(fa))

phospho-MEF2C(Ser387)： 0酸化(hua)肌細胞增強因子(zi)2C抗(kang)體(ti) TNFRSF17 Others Mouse 小(xiao)鼠 BCMA / TNFRSF17 人(ren)細胞裂解液(ye) (陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao))

HOPC-os細胞，人少突膠(jiao)質(zhi)前體(ti)細胞 構巢(chao)曲黴(mei) 人胚(pei)腎(shen)細胞;293 [HEK-293] 人金(jin)屬硫蛋(dan)白(bai)(MT)ELISA 試劑(ji)盒(he) SM-MHC(Cardiac myosin heavy chain) 心肌肌凝(ning)蛋(dan)白(bai)多肽(tai) 0.5mg

HIGD1B： 缺(que)氧(yang)誘(you)導基(ji)因1B蛋(dan)白(bai)抗(kang)體(ti) HA Others H11N9 甲(jia)型(xing)流感(gan) H11N9 (A/mallard/Alberta/294/1977) 血(xue)凝(ning)素(su)HA1 (Hemagglutinin) 人(ren)細胞裂解液(ye) (陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao))

人癌細胞;MDA-MB-231 人金(jin)葡菌腸(chang)毒素(su)(SE)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) Alpha-Synuclein 核突觸蛋(dan)白(bai)(抗(kang)原) 0.5mg

Acetyl-Histone H4(K5)： 乙酰(xian)化(hua)組蛋(dan)白(bai)H4抗(kang)體(ti) 人皮(pi)膚成(cheng)纖(xian)維細胞;HSAS4

HFL1(人肺(fei)成纖(xian)維細胞) 5×106cells/瓶(ping)×2 CL-0466WI38/VA13(SV-40Z轉(zhuan)化(hua)肺(fei)成(cheng)纖(xian)維細胞)5×106cells/瓶(ping)×2 人(ren)張氏肝細胞;Chang liver 人解整合素(su)樣(yang)金(jin)屬蛋(dan)白(bai)酶8(ADAM8)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) Alpha-Synuclein 核突觸蛋(dan)白(bai)(抗(kang)原) 0.5mg

COLO205人結(jie)腸(chang)癌細胞Phospho-Paxillin(Tyr88)： 0酸化(hua)樁蛋(dan)白(bai)Paxillin抗(kang)體(ti) PLC/PRF/5細胞，人肝癌細胞 表達SV40T和EBNA1的人(ren)胚(pei)腎(shen)細胞,293ET細胞 小(xiao)腸(chang)血(xue)管(guan)內(nei)皮(pi)細胞Many types of cells包裝(zhuang)：5 × 105次(ci)方(fang)(1ml)

IFNA13 Others Mouse 小(xiao)鼠 IFNA13 / Ierferon alpha-13 人(ren)細胞裂解液(ye) (陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)) 大(da)鼠核因子(zi)κB(NFκB)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) VB6(Mouse Vitamin B6) 小(xiao)鼠6 96T

Phospho-Paxillin(Ser83)： 0酸化(hua)樁蛋(dan)白(bai)Paxillin抗(kang)體(ti) CL-0024Anglne(人卵巢(chao)癌細胞)5×106cells/瓶(ping)×2

WPMY-1人正(zheng)常(chang)前列腺基(ji)質(zhi)永生化細胞 WPMY-1 of normal human prostate somal immortalized cell DMEM+5%FBS 大(da)鼠核因子(zi)κB(NF-κB)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) L-Selectin/CD62L  大(da)鼠L選(xuan)擇素(su) 96T

Phospho-Paxillin(Ser178)： 0酸化(hua)樁蛋(dan)白(bai)Paxillin抗(kang)體(ti) SERPINA1 Others Human 人 SerpinA1 / A1AT 人(ren)細胞裂解液(ye) (陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao))

三、培(pei)養註(zhu)意(yi)事(shi)項 

1. 收到細胞後首(shou)先(xian)觀(guan)察(cha)細胞瓶(ping)是(shi)否完好(hao)，培養液(ye)是(shi)否有(you)漏液(ye)、渾濁等現象，若有(you)上述(shu)現象 發生請及(ji)時和我們(men)聯系(xi)。

2. 仔(zai)細閱讀細胞說明(ming)書，了解細胞相關信(xin)息(xi)，如細胞形態(tai)、所用培(pei)養(yang)基(ji)、血(xue)清(qing)比(bi)例(li)、所需(xu) 細胞因子(zi)等，確(que)保細胞培養(yang)條(tiao)件壹(yi)致(zhi)，若由於培(pei)養條件不(bu)壹(yi)致(zhi)而(er)導致(zhi)細胞出現問題(ti)，責任由 客(ke)戶(hu)自行(xing)承擔(dan)。

3. 用 75%酒(jiu)精擦拭細胞瓶(ping)表(biao)面，顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)細胞狀態(tai)。因運(yun)輸問題(ti)，部(bu)分細胞由於溫(wen)度(du) 變(bian)化(hua)及(ji)劇(ju)烈碰(peng)亡(wang)破(po)碎(sui)形成碎片(pian)，是(shi)正(zheng)常(chang)現象。觀(guan)察(cha)好細胞狀態(tai)後，75%酒精消毒瓶(ping)壁將 T25 瓶(ping)置於 37℃培(pei)養箱(xiang)放(fang)置 2-4h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接(jie)混(hun)勻收(shou)集(ji)細胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清(qing)。加 5 mL PBS 重(zhong)懸細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新(xin)鮮(xian)的培(pei)養基(ji)重(zhong)懸 細胞，並(bing)接(jie)種到新的培(pei)養(yang)瓶(ping)或(huo)培(pei)養(yang)皿(min)中，置於培(pei)養箱(xiang)中進行(xing)培養。

5. 請(qing)客(ke)戶(hu)用相同條件的培養基(ji)用於細胞培養(yang)。

6. 建(jian)議客(ke)戶(hu)收(shou)到細胞後前 3 天各(ge)拍(pai)幾張細胞照(zhao)片(pian)，記錄(lu)細胞狀態(tai)，便(bian)於和我司(si)技(ji)術部(bu)溝(gou)通 交流(liu)。由於運(yun)輸的原因，個別敏感(gan)細胞會出現不(bu)穩(wen)定(ding)的情(qing)況(kuang)，請及(ji)時和我們(men)聯系(xi)，告知細胞 的具(ju)體(ti)情況(kuang)，以便(bian)我們(men)的技(ji)術人員跟蹤(zong)回(hui)訪(fang)直(zhi)至(zhi)問(wen)題(ti)解決(jue)。

7. 該(gai)細胞僅供科(ke)研(yan)使用。

8. 備(bei)註(zhu)：運(yun)輸用的(de)培(pei)養(yang)基 (灌液(ye)培(pei)養(yang)基(ji)) 不(bu)能(neng)再(zai)用來培(pei)養細胞，請換(huan)用按照(zhao)說(shuo)明(ming)書細胞培 養(yang)條(tiao)件新配制的培養基(ji)來培(pei)養細胞。     收到(dao)細胞後第(di)壹(yi)次(ci)傳(chuan)代建(jian)議(yi) 1：2 傳代 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳(chuan)代就是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個 T25 瓶(ping)或(huo)者(zhe) 2 個 6cm 皿。不(bu)是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個10cm 皿。