G-292,cloneA141B1細(xi)胞

公司(si)產品(pin)僅(jin)供(gong)科研研究使(shi)用(yong)、不得(de)用(yong)於臨床(chuang)診斷！

1、細(xi)胞傳代(dai)：

1）細(xi)胞生長(chang)至覆蓋培(pei)養瓶的(de) 80%面(mian)積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培養瓶中的(de)培養液(ye)，用(yong) PBS 清洗細(xi)胞壹次(ci)；

2）添加 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約 1ml 至培(pei)養瓶中，倒(dao)置顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察，待(dai)細(xi)胞回縮變圓(yuan)後加入(ru) 5ml 培養

液(ye)終止(zhi)消(xiao)化(hua)，再(zai)輕輕吹打(da)細(xi)胞使(shi)之(zhi)脫(tuo)落，然(ran)後(hou)將懸液(ye)轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離心(xin)管(guan)中，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄(qi)上清，沈澱細(xi)胞用 1-2ml 培養基重(zhong)懸(xuan)，然(ran)後(hou)按(an) 1:2 比例進行分瓶傳(chuan)代(dai)，最(zui)後(hou)放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞

培養箱中培養；

壹、商品介(jie)紹(shao)：

2、細(xi)胞凍(dong)存：

1）細(xi)胞生長(chang)至覆蓋培(pei)養瓶的(de) 80%面(mian)積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培養瓶中的(de)培養液(ye)，用(yong) PBS 清洗細(xi)胞壹次(ci)；

2）添加 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約 1ml 至培(pei)養瓶中，倒(dao)置顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察，待(dai)細(xi)胞回縮變圓(yuan)後加入(ru)培養液(ye)終

止(zhi)消(xiao)化(hua)，輕輕吹打(da)細(xi)胞使(shi)之(zhi)脫(tuo)落，然(ran)後(hou)將懸液(ye)轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離心(xin)管(guan)中，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用(yong)適(shi)量(liang)的(de)凍(dong)存液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞，並(bing)放置(zhi)於凍(dong)存管(guan)中；

4）先將細(xi)胞凍(dong)存管(guan)放置於-20℃ 1.5h，然(ran)後(hou)將其移(yi)入(ru)-80℃過夜(ye)，24h 後(hou)轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮(dan)中進行長(chang)期(qi)保(bao)存(cun)。使(shi)用(yong)程(cheng)序(xu)

降(jiang)溫盒可直(zhi)接放入(ru)-80℃。

二、細(xi)胞培養操作(zuo)

1) 復蘇(su)細(xi)胞：以(yi)下(xia)細(xi)胞培養凍(dong)存處(chu)理僅(jin)供(gong)參(can)考(kao)，具體操作(zuo)步驟(zhou)以(yi)隨(sui)貨(huo)產品(pin)說(shuo)明書(shu)為(wei)主。將含(han)有(you)1 mL細(xi)胞懸液(ye)的(de)凍(dong)存管(guan)在 37℃水浴(yu)中迅速搖(yao)晃解凍(dong)，加4 mL培(pei)養基混(hun)合(he)均(jun)勻(yun)。在1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離心(xin)3 min，棄(qi)去(qu)上清液(ye)，加1-2 mL培(pei)養基後(hou)吹勻。然(ran)後(hou)將所有(you)細(xi)胞懸液(ye)加入(ru)含(han)適(shi)量(liang)培養基的(de)培養瓶中培養過夜(ye)（或(huo)將細(xi)胞懸液(ye)加入(ru)10 cm皿中，加入(ru)約8 mL培養基，培(pei)養過夜(ye)）。第二天換(huan)液(ye)並(bing)檢(jian)查細(xi)胞密度(du)。

2) 細(xi)胞傳代(dai)：如(ru)果(guo)細(xi)胞密度(du)達 80%-90%，即可進行傳代(dai)培(pei)養。

a、棄(qi)去(qu)培(pei)養上清，用不含(han)鈣、鎂(mei)離子(zi)的(de)PBS潤(run)洗細(xi)胞1-2次(ci)。

b、加1 mL消(xiao)化(hua)液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養瓶中，使(shi)消(xiao)化(hua)液(ye)浸(jin)潤(run)所有(you)細(xi)胞，將培養瓶置(zhi)於(yu)37℃培養箱中消(xiao)化(hua)1-2 min（視細(xi)胞情況而定(ding)），然(ran)後(hou)在顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察細(xi)胞消(xiao)化(hua)情況，若細(xi)胞大部(bu)分變圓(yuan)並(bing)脫落，迅速拿(na)回操作(zuo)臺(tai)，輕(qing)敲(qiao)幾下(xia)培(pei)養瓶後(hou)加2-3ml培(pei)養基終止(zhi)消(xiao)化(hua)。輕輕打(da)勻後(hou)裝(zhuang)入(ru)無菌(jun)離心(xin)管(guan)中，1000 rpm離心(xin)5 min，棄(qi)去(qu)上清液(ye)，補(bu)加1-2 mL培(pei)養液(ye)後(hou)吹勻。

c、將細(xi)胞懸液(ye)按(an)1:2比(bi)例分(fen)到新的(de)含(han)8 mL培(pei)養基的(de)新皿(min)中或(huo)者瓶中，置於培養箱中培養。 3) 細(xi)胞凍(dong)存：待(dai)細(xi)胞生長(chang)狀態(tai)良好時，可進行細(xi)胞凍(dong)存。下(xia)面(mian) T25 瓶為(wei)例；a、收(shou)集(ji)細(xi)胞及細(xi)胞培養液(ye)，裝(zhuang)入(ru)無菌(jun)離心(xin)管(guan)中，1000 rpm條件(jian)下(xia)離心(xin)4 min，棄(qi)去(qu)上清液(ye)，用(yong)PBS清洗壹遍(bian)，棄(qi)盡PBS，進行細(xi)胞計數(shu)。

b、根(gen)據細(xi)胞數(shu)量(liang)加入(ru)無血(xue)清細(xi)胞凍(dong)存液(ye)，使(shi)細(xi)胞密度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕混勻(yun)，每(mei)支(zhi)凍(dong)存管(guan)凍(dong)存1mL細(xi)胞懸液(ye)，註(zhu)意(yi)凍(dong)存管(guan)做好標識(shi)。將凍(dong)存管(guan)放入(ru)-80℃冰箱(xiang)，24 h後轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮(dan)灌儲(chu)存(cun)。記(ji)錄凍(dong)存管(guan)位(wei)置(zhi)以(yi)便下(xia)次(ci)拿(na)取。

公司(si)正(zheng)在出(chu)售的(de)產品(pin)：

細(xi)胞半-5（CASPASE-5）活(huo)性(xing)比色法定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒

FAM蛋(dan)白(bai)標記(ji)試(shi)劑盒

通(tong)用(yong)型(xing)人體鼻病(bing)毒(du)（rhinovirus）定(ding)量(liang)PCR擴增檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒

石(shi)蠟切片組(zu)織CREB蛋(dan)白(bai)表達NBT顯色(se)光(guang)學顯微(wei)鏡(jing)檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒

棉花樣品(pin)處理試(shi)劑盒

AP標記(ji)抗(kang)體穩(wen)定/稀(xi)釋溶(rong)液(ye)

細(xi)胞鈣調(tiao)神經(jing)磷酸酶(mei)（CALCINEURIN；PP2B）活(huo)性(xing)酶(mei)連續(xu)循環(huan)比色(se)法(fa)定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒

10016

全(quan)組(zu)織肌(ji)腺苷(gan)酸脫氨(an)酶(mei)（Myoadenylate deaminase）活(huo)性(xing)染色試劑(ji)盒

白(bai)三(san)烯B4（LTB4）高(gao)效(xiao)液(ye)相(xiang)色(se)譜(pu)法定量(liang)檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒

體(ti)外微(wei)管(guan)蛋白(bai)聚合(he)作(zuo)用（polymerization）熒(ying)光(guang)檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒

細(xi)菌(jun)N-乙酰轉(zhuan)移(yi)酶(mei)（NAT）活(huo)性(xing)比色法定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒

CYP2B1蛋(dan)白(bai)表達西方(fang)雜交(jiao)分(fen)析試(shi)劑(ji)盒

細(xi)胞基質金屬(shu)（MMP-12）活(huo)性(xing)比色法定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒

伊(yi)文思藍(lan)（EVANS BLUE）植物(wu)細(xi)胞繁殖(zhi)測(ce)定(ding)試劑盒

粘蛋白(bai)-2/上皮(pi)膜抗(kang)原2重(zhong)組(zu)兔單(dan)克隆抗(kang)體

甘(gan)油二酯激酶(mei)β/DGK-β抗(kang)體

去(qu)整(zheng)合(he)素樣金屬(shu)11抗(kang)體

Kelch樣蛋(dan)白(bai)17抗(kang)體

細(xi)胞角(jiao)蛋(dan)白(bai)18抗(kang)體（C端）

ZSWIM5蛋(dan)白(bai)抗(kang)體

快(kuai)速周(zhou)期(qi)蛋(dan)白(bai)C抗(kang)體

G-292,cloneA141B1細(xi)胞ATP5E蛋白(bai)抗(kang)體

鋅指(zhi)蛋白(bai)924抗(kang)體

三(san)、培養註(zhu)意(yi)事(shi)項 

1. 收(shou)到細(xi)胞後首先觀察細(xi)胞瓶是否(fou)完(wan)好，培養液(ye)是否(fou)有漏液(ye)、渾(hun)濁(zhuo)等現象(xiang)，若有(you)上述(shu)現(xian)象(xiang) 發(fa)生請(qing)及時和(he)我們(men)聯系。

2. 仔(zai)細(xi)閱讀細(xi)胞說明書(shu)，了解(jie)細(xi)胞相關信息(xi)，如(ru)細(xi)胞形態(tai)、所(suo)用(yong)培(pei)養基、血(xue)清比例、所(suo)需 細(xi)胞因子(zi)等，確(que)保(bao)細(xi)胞培養條件(jian)壹致(zhi)，若(ruo)由(you)於培(pei)養條件(jian)不壹致(zhi)而(er)導致(zhi)細(xi)胞出現問題(ti)，責(ze)任(ren)由(you) 客(ke)戶(hu)自(zi)行(xing)承(cheng)擔。

3. 用(yong) 75%酒(jiu)精(jing)擦(ca)拭細(xi)胞瓶表(biao)面(mian)，顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察細(xi)胞狀態(tai)。因(yin)運(yun)輸問題(ti)，部(bu)分細(xi)胞由(you)於溫度(du) 變(bian)化(hua)及劇烈(lie)碰亡破碎形成碎片，是正(zheng)常現象(xiang)。觀察好細(xi)胞狀態(tai)後(hou)，75%酒(jiu)精(jing)消(xiao)毒(du)瓶壁(bi)將 T25 瓶置(zhi)於(yu) 37℃培養箱放(fang)置 2-4h。

4. 貼壁細(xi)胞可以(yi)消(xiao)化(hua)，懸浮細(xi)胞直接混勻(yun)收集(ji)細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄(qi)上 清。加 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，用(yong)新鮮的(de)培養基重(zhong)懸(xuan) 細(xi)胞，並(bing)接種到新的(de)培養瓶或(huo)培(pei)養皿中，置於培養箱中進行培養。

5. 請客(ke)戶(hu)用(yong)相(xiang)同條(tiao)件(jian)的(de)培養基用(yong)於細(xi)胞培養。

6. 建議客(ke)戶(hu)收(shou)到細(xi)胞後前 3 天各拍(pai)幾張(zhang)細(xi)胞照(zhao)片，記(ji)錄細(xi)胞狀態(tai)，便於(yu)和(he)我司(si)技(ji)術部(bu)溝通(tong) 交(jiao)流(liu)。由(you)於運(yun)輸的(de)原因(yin)，個別敏感(gan)細(xi)胞會(hui)出(chu)現(xian)不穩(wen)定的(de)情況，請及(ji)時和(he)我們(men)聯系，告(gao)知(zhi)細(xi)胞 的(de)具體(ti)情況，以(yi)便我們(men)的(de)技(ji)術人員跟(gen)蹤回(hui)訪直至(zhi)問題(ti)解(jie)決(jue)。

7. 該細(xi)胞僅(jin)供(gong)科研使(shi)用(yong)。

8. 備(bei)註(zhu)：運(yun)輸用(yong)的(de)培養基 (灌(guan)液(ye)培(pei)養基) 不能(neng)再(zai)用來培(pei)養細(xi)胞，請換(huan)用按照(zhao)說(shuo)明書(shu)細(xi)胞培 養條件(jian)新配(pei)制的(de)培養基來(lai)培養細(xi)胞。     收到細(xi)胞後第壹次(ci)傳代(dai)建議 1：2 傳代(dai) 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳(chuan)代(dai)就(jiu)是 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶或(huo)者 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不是 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿。