P815小鼠肥大細(xi)胞瘤細(xi)胞

公(gong)司產品(pin)僅供(gong)科(ke)研(yan)研(yan)究(jiu)使用、不得(de)用於(yu)臨(lin)床(chuang)診(zhen)斷(duan)！

1、細(xi)胞傳(chuan)代(dai)：

1）細(xi)胞生長至覆(fu)蓋培(pei)養瓶的 80%面積時，棄 25cm2培(pei)養瓶中的培(pei)養液(ye)，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞壹(yi)次；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶中，倒(dao)置(zhi)顯(xian)微鏡下(xia)觀(guan)察，待細(xi)胞回縮變(bian)圓(yuan)後加(jia)入(ru) 5ml 培(pei)養

液(ye)終止消(xiao)化，再(zai)輕(qing)輕吹打細(xi)胞使之脫落(luo)，然(ran)後將懸液(ye)轉(zhuan)移至 15ml 離心(xin)管(guan)中，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄上(shang)清，沈澱細(xi)胞用 1-2ml 培(pei)養基重(zhong)懸，然(ran)後按 1:2 比例進(jin)行(xing)分瓶傳(chuan)代(dai)，最(zui)後放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞

培(pei)養箱中培(pei)養；

壹(yi)、商品(pin)介紹(shao)：

2、細(xi)胞凍存：

1）細(xi)胞生長至覆(fu)蓋培(pei)養瓶的 80%面積時，棄 25cm2培(pei)養瓶中的培(pei)養液(ye)，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞壹(yi)次；

2）添加(jia) 0.25%消(xiao)化液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶中，倒(dao)置(zhi)顯(xian)微鏡下(xia)觀(guan)察，待細(xi)胞回縮變(bian)圓(yuan)後加(jia)入(ru)培(pei)養液(ye)終

止消(xiao)化，輕輕(qing)吹打細(xi)胞使之脫落(luo)，然(ran)後將懸液(ye)轉(zhuan)移至 15ml 離心(xin)管(guan)中，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用適量(liang)的凍存液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸細(xi)胞，並放(fang)置(zhi)於(yu)凍存管(guan)中；

4）先將細(xi)胞凍存管(guan)放(fang)置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後將其移入(ru)-80℃過(guo)夜，24h 後轉入(ru)液(ye)氮(dan)中進(jin)行(xing)長期(qi)保(bao)存(cun)。使用程(cheng)序

降(jiang)溫盒可直接放(fang)入(ru)-80℃。

二、細(xi)胞培(pei)養操(cao)作

1) 復蘇(su)細(xi)胞：以下細(xi)胞培(pei)養凍存處(chu)理僅供(gong)參考(kao)，具體(ti)操(cao)作步驟(zhou)以隨貨產品(pin)說明書(shu)為(wei)主(zhu)。將(jiang)含有(you)1 mL細(xi)胞懸液(ye)的凍存管(guan)在 37℃水(shui)浴(yu)中迅(xun)速搖(yao)晃(huang)解凍，加(jia)4 mL培(pei)養基混(hun)合(he)均(jun)勻(yun)。在1000 rpm條件下(xia)離(li)心(xin)3 min，棄去(qu)上清液(ye)，加(jia)1-2 mL培(pei)養基後吹勻。然(ran)後將所(suo)有(you)細(xi)胞懸液(ye)加(jia)入(ru)含適(shi)量(liang)培(pei)養基的培(pei)養瓶中培(pei)養過(guo)夜（或(huo)將細(xi)胞懸液(ye)加(jia)入(ru)10 cm皿中，加(jia)入(ru)約(yue)8 mL培(pei)養基，培(pei)養過(guo)夜）。第(di)二天(tian)換液(ye)並(bing)檢(jian)查(zha)細(xi)胞密(mi)度。

2) 細(xi)胞傳(chuan)代(dai)：如(ru)果細(xi)胞密(mi)度達(da) 80%-90%，即可進(jin)行(xing)傳(chuan)代(dai)培(pei)養。

a、棄去(qu)培(pei)養上清(qing)，用不含鈣(gai)、鎂(mei)離子(zi)的PBS潤洗(xi)細(xi)胞1-2次。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養瓶中，使消化液(ye)浸(jin)潤所有(you)細(xi)胞，將培(pei)養瓶置(zhi)於(yu)37℃培(pei)養箱中消化1-2 min（視(shi)細(xi)胞情況而定），然(ran)後在顯(xian)微鏡下(xia)觀(guan)察細(xi)胞消化情況，若細(xi)胞大部(bu)分變(bian)圓(yuan)並(bing)脫落(luo)，迅(xun)速拿(na)回(hui)操(cao)作臺，輕(qing)敲幾下培(pei)養瓶後加(jia)2-3ml培(pei)養基終止消(xiao)化。輕輕(qing)打(da)勻後裝入(ru)無菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中，1000 rpm離心(xin)5 min，棄去(qu)上清液(ye)，補(bu)加(jia)1-2 mL培(pei)養液(ye)後吹勻。

c、將(jiang)細(xi)胞懸液(ye)按(an)1:2比例分(fen)到(dao)新(xin)的含8 mL培(pei)養基的新(xin)皿中或(huo)者瓶中，置於(yu)培(pei)養箱中培(pei)養。 3) 細(xi)胞凍存：待細(xi)胞生長狀態良(liang)好(hao)時，可進(jin)行(xing)細(xi)胞凍存。下面 T25 瓶為例；a、收(shou)集(ji)細(xi)胞及細(xi)胞培(pei)養液(ye)，裝(zhuang)入(ru)無菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中，1000 rpm條件下離(li)心(xin)4 min，棄去(qu)上清液(ye)，用(yong)PBS清(qing)洗(xi)壹(yi)遍，棄盡(jin)PBS，進(jin)行(xing)細(xi)胞計(ji)數(shu)。

b、根(gen)據細(xi)胞數量(liang)加(jia)入(ru)無血(xue)清(qing)細(xi)胞凍存液(ye)，使細(xi)胞密(mi)度5×106~1×107/mL，輕(qing)輕混(hun)勻，每支凍存管(guan)凍存1mL細(xi)胞懸液(ye)，註(zhu)意(yi)凍存管(guan)做好(hao)標(biao)識。將(jiang)凍存管(guan)放(fang)入(ru)-80℃冰箱，24 h後轉入(ru)液(ye)氮(dan)灌儲存(cun)。記錄凍存管(guan)位置(zhi)以(yi)便下次拿取(qu)。

公(gong)司正在出(chu)售(shou)的產品(pin)：

Phospho-NMDAR2B (Tyr1474)： 0酸化谷酸(suan)受(shou)體(ti)2B抗體(ti) 大鼠腎上腺(xian)嗜(shi)鉻細(xi)胞瘤細(xi)胞(低分化);PC-12(低分(fen)化)

人腦(nao)血(xue)管(guan)周細(xi)胞 (HBVP) ( 5×105 ) 人臍(qi)靜脈(mai)平滑肌(ji)細(xi)胞 MDA-MB-231(ATCC來(lai)源(yuan)), 人癌(ai)細(xi)胞 大鼠熱休克蛋白(bai)70(HSP-70)ELISA試劑(ji)盒 IFI16/p16  大鼠γ幹擾(rao)素(su)誘(you)導(dao)蛋(dan)白(bai)16/p16 96T

Phospho-NMDAR2A + 2B (Tyr1246 + Tyr1252)： 0酸化谷酸(suan)受(shou)體(ti)2A+2B抗體(ti) 豬腎細(xi)胞;PK(15)

IL17F Protein Human 重組人 IL-17F / IL17F 蛋(dan)白(bai) 大鼠熱休克蛋白(bai)70(HSP-70)ELISA 試劑(ji)盒 Human P27 protein  人P27蛋(dan)白(bai) 96T

NEK6： 高度相似(si)的細(xi)胞周期(qi)蛋白(bai)激(ji)酶(mei)NEK6抗體(ti) CASK Others Human 人 CASK Kinase 桿狀病毒-昆(kun)蟲(chong)細(xi)胞裂解液(ye) (陽性對照)

CSF2 Protein Human 重組人 GM-CSF / CSF2 蛋(dan)白(bai) (His 標(biao)簽) 人8羥基脫氧(yang)鳥(niao)苷(gan)(8-OHdG)ELISA 試劑(ji)盒 CEA 人癌(ai)胚抗原 0.5mg

phospho-IRS1(Thr176)： 0酸化胰(yi)島素受(shou)體(ti)底物1抗體(ti) CSNK2A2 Others Human 人 CSNK2A2 / CK2A2 桿狀病毒-昆(kun)蟲(chong)細(xi)胞裂解液(ye) (陽性對照)

人腹膜毛細(xi)血管(guan)內皮細(xi)胞培(pei)養基 100mL 人6酮(tong)前(qian)列(lie)腺(xian)素F1a(6-keto-PGF1a)ELISA 試劑(ji)盒 ChRM2 (Music Acetylcholine receptor M2) 毒蕈堿型乙酰受體(ti)M2(抗原(yuan)) 0.5mg

phospho-ICAM1(Tyr512)： 0酸化細(xi)胞間粘(zhan)附分子1抗體(ti) 人間(jian)充質幹細(xi)胞-肝 人肌(ji)肉(rou)成纖(xian)維細(xi)胞瘤，C2C12細(xi)胞 B16(黑色素瘤細(xi)胞)

MFAP5 Others Human 人 MFAP5 / MAGP2 人細(xi)胞裂解液(ye) (陽性對照) 人6酮(tong)前(qian)列(lie)腺(xian)素F1a(6-keto-PGF1a)ELISA 試劑(ji)盒 Connexin-43(Cx43) 間隙(xi)連接蛋(dan)白(bai)43(多(duo)肽(tai)片(pian)斷(duan)抗(kang)原) 0.5mg

P815小鼠肥大細(xi)胞瘤細(xi)胞Reelin： 絡絲蛋白(bai)抗(kang)體(ti) CD209 Others Human 人 CD209 人細(xi)胞裂解液(ye) (陽性對照)

非酶(mei)細(xi)胞裂解液(ye)NECDS 大鼠白(bai)介(jie)素(su)11(IL11)ELISA試劑(ji)盒 MMP-4(Human matrix metalloproteinase 4)  人基質(zhi)金屬(shu)蛋(dan)白(bai)酶(mei)4 96T

RUSC1： RUSC1抗體(ti) 鯉魚(yu)尾鰭(qi)細(xi)胞;YZ16

EB病毒轉化的人B淋(lin)巴(ba)細(xi)胞;KM9401 人血(xue)管(guan)內皮細(xi)胞培(pei)養基 100mL 大鼠白(bai)介(jie)素(su)11(IL-11)ELISA 試劑(ji)盒 MMP-9/Gelatinase B(Human matrix metalloproteinase 9/Gelatinase B)  人基質(zhi)金屬(shu)蛋(dan)白(bai)酶(mei)9/明膠酶(mei)B 96T

RUSC2： RUSC2抗體(ti) CL-0384MDA-MB-468-06(人癌(ai)細(xi)胞)5×106cells/瓶×2

三、培(pei)養註意(yi)事項 

1. 收到(dao)細(xi)胞後首(shou)先觀(guan)察細(xi)胞瓶是否完(wan)好(hao)，培(pei)養液(ye)是(shi)否有(you)漏(lou)液(ye)、渾(hun)濁(zhuo)等現(xian)象(xiang)，若有(you)上(shang)述現(xian)象(xiang) 發(fa)生請(qing)及時(shi)和(he)我們(men)聯(lian)系(xi)。

2. 仔(zai)細(xi)閱讀細(xi)胞說明書(shu)，了(le)解細(xi)胞相關(guan)信息，如(ru)細(xi)胞形態、所用培(pei)養基、血(xue)清(qing)比例、所(suo)需 細(xi)胞因子等，確保(bao)細(xi)胞培(pei)養條件(jian)壹(yi)致，若由(you)於(yu)培(pei)養條件(jian)不壹(yi)致而導(dao)致細(xi)胞出現(xian)問(wen)題(ti)，責任(ren)由(you) 客戶自(zi)行(xing)承擔(dan)。

3. 用 75%酒(jiu)精擦拭(shi)細(xi)胞瓶表面，顯(xian)微鏡下(xia)觀(guan)察細(xi)胞狀態。因運輸(shu)問(wen)題(ti)，部分(fen)細(xi)胞由(you)於(yu)溫(wen)度(du) 變(bian)化及劇烈(lie)碰(peng)亡破(po)碎(sui)形成碎片(pian)，是(shi)正常現(xian)象(xiang)。觀(guan)察好(hao)細(xi)胞狀態後，75%酒(jiu)精消(xiao)毒瓶(ping)壁將 T25 瓶置(zhi)於(yu) 37℃培(pei)養箱放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁細(xi)胞可以(yi)消(xiao)化，懸浮(fu)細(xi)胞直接混(hun)勻(yun)收集(ji)細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，棄上(shang) 清。加(jia) 5 mL PBS 重(zhong)懸細(xi)胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用新(xin)鮮的培(pei)養基重(zhong)懸 細(xi)胞，並接種到新(xin)的培(pei)養瓶或(huo)培(pei)養皿中，置於(yu)培(pei)養箱中進(jin)行(xing)培(pei)養。

5. 請客戶用(yong)相同條(tiao)件(jian)的培(pei)養基用(yong)於(yu)細(xi)胞培(pei)養。

6. 建議(yi)客戶收(shou)到細(xi)胞後前(qian) 3 天(tian)各(ge)拍(pai)幾張細(xi)胞照片(pian)，記錄細(xi)胞狀態，便於(yu)和(he)我司(si)技(ji)術部溝(gou)通 交(jiao)流(liu)。由(you)於(yu)運(yun)輸(shu)的原因，個別敏感細(xi)胞會(hui)出現(xian)不穩(wen)定的情況，請及時(shi)和(he)我們(men)聯(lian)系(xi)，告知細(xi)胞 的具體(ti)情況，以便我們(men)的技術人員(yuan)跟(gen)蹤(zong)回訪直至問(wen)題(ti)解決。

7. 該(gai)細(xi)胞僅供(gong)科(ke)研(yan)使用。

8. 備註(zhu)：運輸(shu)用(yong)的培(pei)養基 (灌液(ye)培(pei)養基) 不能(neng)再(zai)用(yong)來(lai)培(pei)養細(xi)胞，請換用按照說明書(shu)細(xi)胞培(pei) 養條件(jian)新(xin)配制的培(pei)養基來(lai)培(pei)養細(xi)胞。     收到細(xi)胞後第壹(yi)次傳(chuan)代(dai)建議(yi) 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註(zhu)意：  1:2 傳(chuan)代(dai)就(jiu)是(shi) 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個 T25 瓶(ping)或(huo)者 2 個 6cm 皿(min)。不是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個10cm 皿(min)。