PIEC豬(zhu)髖(kuan)動(dong)脈(mai)內(nei)皮(pi)細(xi)胞(bao)

公(gong)司產(chan)品(pin)僅(jin)供科(ke)研研究使(shi)用(yong)、不得(de)用(yong)於臨床(chuang)診斷！

1、細(xi)胞(bao)傳(chuan)代：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)至(zhi)覆蓋培養瓶的 80%面積時(shi)，棄(qi) 25cm2培養瓶中的培養液，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞(bao)壹次；

2）添加 0.25%消(xiao)化(hua)液約(yue) 1ml 至培養瓶中，倒置顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察(cha)，待細(xi)胞(bao)回(hui)縮變(bian)圓(yuan)後加(jia)入(ru) 5ml 培(pei)養

液終(zhong)止(zhi)消化(hua)，再輕輕吹(chui)打(da)細(xi)胞(bao)使(shi)之(zhi)脫落，然(ran)後將懸液轉(zhuan)移至 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄上(shang)清(qing)，沈澱(dian)細(xi)胞(bao)用(yong) 1-2ml 培養基重(zhong)懸，然(ran)後按(an) 1:2 比例(li)進行(xing)分(fen)瓶傳代，最後放入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)

培(pei)養箱(xiang)中培(pei)養；

壹、商品(pin)介(jie)紹(shao)：

2、細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)至(zhi)覆蓋培養瓶的 80%面積時(shi)，棄(qi) 25cm2培養瓶中的培養液，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞(bao)壹次；

2）添加 0.25%消(xiao)化(hua)液約(yue) 1ml 至培養瓶中，倒置顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察(cha)，待細(xi)胞(bao)回(hui)縮變(bian)圓(yuan)後加(jia)入(ru)培(pei)養液終(zhong)

止(zhi)消化(hua)，輕輕吹(chui)打(da)細(xi)胞(bao)使(shi)之(zhi)脫落，然(ran)後將懸液轉(zhuan)移至 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用(yong)適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸細(xi)胞(bao)，並(bing)放(fang)置於凍(dong)存管(guan)中；

4）先將(jiang)細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)管(guan)放置於-20℃ 1.5h，然(ran)後將其(qi)移入(ru)-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後轉入(ru)液氮中進行(xing)長期保存(cun)。使(shi)用(yong)程(cheng)序(xu)

降(jiang)溫盒可直(zhi)接放入(ru)-80℃。

二、細(xi)胞(bao)培(pei)養操作(zuo)

1) 復(fu)蘇細(xi)胞(bao)：以(yi)下(xia)細(xi)胞(bao)培(pei)養凍存(cun)處(chu)理僅(jin)供參(can)考，具(ju)體操(cao)作(zuo)步(bu)驟以(yi)隨貨(huo)產(chan)品(pin)說(shuo)明(ming)書(shu)為(wei)主(zhu)。將含有1 mL細(xi)胞(bao)懸液的(de)凍(dong)存管(guan)在 37℃水浴(yu)中迅速搖(yao)晃(huang)解(jie)凍(dong)，加4 mL培養基混合均勻。在1000 rpm條件(jian)下(xia)離心(xin)3 min，棄去上清(qing)液，加(jia)1-2 mL培(pei)養基後(hou)吹(chui)勻。然(ran)後將所有細(xi)胞(bao)懸液加(jia)入(ru)含適量培養基的(de)培(pei)養瓶中培養過夜(ye)（或(huo)將(jiang)細(xi)胞(bao)懸液加(jia)入(ru)10 cm皿(min)中，加入(ru)約(yue)8 mL培養基，培(pei)養過夜(ye)）。第二天(tian)換液並(bing)檢(jian)查細(xi)胞(bao)密度。

2) 細(xi)胞(bao)傳(chuan)代：如(ru)果細(xi)胞(bao)密度達(da) 80%-90%，即可進行(xing)傳代培養。

a、棄去培養上清(qing)，用(yong)不含鈣、鎂離(li)子(zi)的PBS潤洗(xi)細(xi)胞(bao)1-2次(ci)。

b、加(jia)1 mL消(xiao)化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養瓶中，使(shi)消化(hua)液浸(jin)潤(run)所有細(xi)胞(bao)，將(jiang)培(pei)養瓶置於37℃培(pei)養箱(xiang)中消(xiao)化(hua)1-2 min（視(shi)細(xi)胞(bao)情(qing)況(kuang)而定），然(ran)後在顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察(cha)細(xi)胞(bao)消(xiao)化(hua)情(qing)況(kuang)，若細(xi)胞(bao)大(da)部(bu)分(fen)變(bian)圓並(bing)脫落，迅速拿(na)回操(cao)作(zuo)臺(tai)，輕敲幾下(xia)培養瓶後加2-3ml培養基終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)。輕輕打勻後(hou)裝入(ru)無(wu)菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中，1000 rpm離心(xin)5 min，棄去上清(qing)液，補加(jia)1-2 mL培(pei)養液後(hou)吹(chui)勻。

c、將(jiang)細(xi)胞(bao)懸液按(an)1:2比例(li)分(fen)到新的(de)含8 mL培養基的(de)新(xin)皿(min)中(zhong)或(huo)者(zhe)瓶中，置於培(pei)養箱(xiang)中培(pei)養。 3) 細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)：待細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)狀態良好(hao)時(shi)，可進行(xing)細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)。下(xia)面 T25 瓶為(wei)例(li)；a、收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)及(ji)細(xi)胞(bao)培(pei)養液，裝入(ru)無(wu)菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中，1000 rpm條件(jian)下(xia)離心(xin)4 min，棄去上清(qing)液，用(yong)PBS清(qing)洗(xi)壹遍，棄盡(jin)PBS，進行(xing)細(xi)胞(bao)計(ji)數(shu)。

b、根(gen)據(ju)細(xi)胞(bao)數(shu)量加入(ru)無(wu)血(xue)清(qing)細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)液，使(shi)細(xi)胞(bao)密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每(mei)支(zhi)凍存(cun)管(guan)凍存1mL細(xi)胞(bao)懸液，註(zhu)意(yi)凍(dong)存管(guan)做(zuo)好(hao)標識。將凍(dong)存(cun)管(guan)放入(ru)-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後轉(zhuan)入(ru)液氮灌儲(chu)存。記(ji)錄(lu)凍存管(guan)位置以(yi)便下(xia)次拿(na)取。

公(gong)司正(zheng)在出售的(de)產(chan)品(pin)：

Neuritin： 轉化(hua)神(shen)經(jing)突起蛋(dan)白抗(kang)體(ti) 狗(gou)腎(shen)細(xi)胞(bao);Super Tube

IL17A Protein Canine IL17 / IL17A 蛋白(bai) 大鼠趨化(hua)因(yin)子(zi)(fractalkine/CX3CL1)ELISA試(shi)劑盒 PKB(Mouse protein kinase B)  小(xiao)鼠蛋(dan)白(bai)激酶B 96T

NPIP-like protein 1： NPIP樣蛋(dan)白1抗體(ti) PDK1 Others Human 人(ren) PDK-1 桿狀病毒(du)-昆蟲細(xi)胞(bao)裂(lie)解液 (陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao))

小鼠內(nei)臟脂肪細(xi)胞(bao)培(pei)養基 100mL 大(da)鼠趨化(hua)因(yin)子(zi)(FK)ELISA試(shi)劑盒 KLK 11(Human Kallikrein 11)  人(ren)11 96T

Nicastrin： 老(lao)年(nian)性(xing)癡(chi)呆(dai)蛋白(bai)APH2抗體(ti) CTLL-2細(xi)胞(bao)，T細(xi)胞(bao) 人(ren)胰腺(xian)癌(ai)細(xi)胞(bao),JF-305細(xi)胞(bao) CM-M016小(xiao)鼠胰腺(xian)星狀細(xi)胞(bao)培(pei)養基100mL

INSL3： 胰島(dao)素樣(yang)蛋白(bai)3抗體 CAMK4 Others Mouse 小鼠 CAMK4 / CaMKIV 桿(gan)狀病毒(du)-昆蟲細(xi)胞(bao)裂(lie)解液 (陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao))

人脈(mai)絡(luo)膜(mo)血管(guan)細(xi)胞(bao)培(pei)養基 100mL 人(ren)25-羥基(ji)維(wei)生3(25OH Vitamin D3)ELISA試(shi)劑盒 ECG2 (sophagus cancer-related gene-2) 食(shi)道(dao)癌(ai)相關(guan)基因(yin)(抗原) 0.5mg

IRE1a： 內質網(wang)核信號(hao)轉(zhuan)導蛋(dan)白(bai)a1抗(kang)體(ti) 小(xiao)鼠皮(pi)層神(shen)經膠(jiao)質細(xi)胞(bao)(EGFP標(biao)記(ji)) 小鼠骨(gu)骼肌(ji)成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)，NOR-10細(xi)胞(bao) SAC-IIC3(腹(fu)水(shui)瘤(liu)細(xi)胞(bao))

JAM2 Others Rat 大鼠 JAM-2 / JAM-B 人(ren)細(xi)胞(bao)裂(lie)解液 (陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)) 人25-羥基(ji)維(wei)生3(25OH Vitamin D3)ELISA試(shi)劑盒 Fibronectin (FN) 纖(xian)維(wei)連結(jie)蛋白(bai)(多肽抗(kang)原) 0.5mg

rhIL-18： 白細(xi)胞(bao)介(jie)素18抗(kang)體 大(da)鼠癌(ai)細(xi)胞(bao);SHZ-88

PIEC豬髖(kuan)動脈(mai)內(nei)皮(pi)細(xi)胞(bao)RASSF2： Ras相關(guan)結(jie)構域(yu)蛋(dan)白(bai)質2抗(kang)體(ti) CST6 Others Human 人 CystatinE / CST6 / CystatinM 人(ren)細(xi)胞(bao)裂(lie)解液 (陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao))

小氣(qi)道上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)添(tian)加物(wu)SAEpiCGS 大鼠δ樣(yang)蛋(dan)白(bai)4(δLL4)ELISA試(shi)劑盒 Alpha1-MG(Human Alpha1-microglobulin)  人(ren)α1微(wei)球(qiu)蛋白(bai) 96T

RIL： 抑癌(ai)基因(yin)PDLIM4抗(kang)體(ti) 蚊子(zi)幼(you)蟲體細(xi)胞(bao);Aedes albopictus clone C6/36

EB病毒(du)轉(zhuan)化(hua)的(de)人(ren)B淋(lin)巴(ba)細(xi)胞(bao);KM0501 人(ren)滑(hua)膜(mo)細(xi)胞(bao)培(pei)養基 100mL 大(da)鼠δ基(ji)乙酰脫水酶(ALAD)ELISA試(shi)劑盒 ALB(Human microalbunminuria)  人(ren)尿微(wei)量白蛋白 96T

RIN1： RAS抑制蛋(dan)白1抗體 CL-0351Hep B1.2(人肝(gan)癌(ai)細(xi)胞(bao))5×106cells/瓶×2

三(san)、培(pei)養註意(yi)事項(xiang) 

1. 收(shou)到細(xi)胞(bao)後(hou)首(shou)先(xian)觀察(cha)細(xi)胞(bao)瓶是否完(wan)好(hao)，培養液是否有漏(lou)液、渾(hun)濁(zhuo)等現(xian)象，若有上述(shu)現(xian)象 發生請及時(shi)和(he)我們聯(lian)系(xi)。

2. 仔(zai)細(xi)閱讀(du)細(xi)胞(bao)說(shuo)明(ming)書(shu)，了(le)解(jie)細(xi)胞(bao)相(xiang)關(guan)信息(xi)，如(ru)細(xi)胞(bao)形(xing)態(tai)、所用(yong)培養基、血(xue)清(qing)比例(li)、所需 細(xi)胞(bao)因(yin)子(zi)等，確保細(xi)胞(bao)培(pei)養條件(jian)壹致，若由於(yu)培養條件(jian)不壹致而導致細(xi)胞(bao)出現(xian)問(wen)題(ti)，責任由 客(ke)戶(hu)自(zi)行(xing)承(cheng)擔。

3. 用(yong) 75%酒精(jing)擦(ca)拭細(xi)胞(bao)瓶表面，顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察(cha)細(xi)胞(bao)狀態。因運輸問(wen)題(ti)，部(bu)分(fen)細(xi)胞(bao)由於(yu)溫度 變化(hua)及(ji)劇烈碰(peng)亡破(po)碎形(xing)成(cheng)碎片(pian)，是正(zheng)常現(xian)象。觀察(cha)好(hao)細(xi)胞(bao)狀態後，75%酒精(jing)消(xiao)毒(du)瓶壁(bi)將(jiang) T25 瓶置於 37℃培(pei)養箱(xiang)放置 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細(xi)胞(bao)可以(yi)消化(hua)，懸浮細(xi)胞(bao)直(zhi)接混勻收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄上(shang) 清(qing)。加 5 mL PBS 重(zhong)懸細(xi)胞(bao)，再 900 rpm-1000 rpm 離心(xin) 3 min，用(yong)新鮮的培養基重(zhong)懸 細(xi)胞(bao)，並(bing)接種到新的(de)培養瓶或(huo)培(pei)養皿中(zhong)，置於培(pei)養箱(xiang)中進行(xing)培養。

5. 請客(ke)戶(hu)用(yong)相同條件的(de)培養基用(yong)於細(xi)胞(bao)培(pei)養。

6. 建議(yi)客(ke)戶(hu)收(shou)到細(xi)胞(bao)後(hou)前(qian) 3 天(tian)各(ge)拍幾(ji)張(zhang)細(xi)胞(bao)照(zhao)片(pian)，記(ji)錄(lu)細(xi)胞(bao)狀態，便於(yu)和我司技術部溝通 交(jiao)流(liu)。由於(yu)運輸的(de)原因，個別敏感細(xi)胞(bao)會(hui)出現(xian)不穩定的情(qing)況，請(qing)及(ji)時(shi)和(he)我們聯(lian)系(xi)，告知細(xi)胞(bao) 的(de)具(ju)體情(qing)況(kuang)，以(yi)便我(wo)們的(de)技術人員(yuan)跟(gen)蹤(zong)回(hui)訪直(zhi)至(zhi)問(wen)題(ti)解(jie)決。

7. 該(gai)細(xi)胞(bao)僅(jin)供科(ke)研使(shi)用(yong)。

8. 備註：運輸用(yong)的培養基 (灌液培(pei)養基) 不能再用(yong)來培養細(xi)胞(bao)，請(qing)換用(yong)按(an)照說(shuo)明(ming)書(shu)細(xi)胞(bao)培(pei) 養條件(jian)新(xin)配(pei)制的(de)培養基來培養細(xi)胞(bao)。     收(shou)到細(xi)胞(bao)後(hou)第(di)壹次傳代建議(yi) 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳(chuan)代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或(huo)者(zhe) 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。