PK-13豬腎(shen)細(xi)胞(bao)系

公司(si)產(chan)品僅供科(ke)研研(yan)究(jiu)使(shi)用(yong)、不得(de)用於(yu)臨床(chuang)診(zhen)斷(duan)！

1、細(xi)胞(bao)傳(chuan)代(dai)：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)至覆(fu)蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積時，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶(ping)中(zhong)的培(pei)養(yang)液(ye)，用 PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞(bao)壹(yi)次(ci)；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒置顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察，待細(xi)胞(bao)回(hui)縮(suo)變圓(yuan)後(hou)加入(ru) 5ml 培(pei)養(yang)

液(ye)終(zhong)止(zhi)消化，再輕(qing)輕(qing)吹打(da)細(xi)胞(bao)使(shi)之脫(tuo)落(luo)，然(ran)後將(jiang)懸(xuan)液轉移至 15ml 離(li)心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）棄(qi)上(shang)清(qing)，沈澱細(xi)胞(bao)用(yong) 1-2ml 培(pei)養(yang)基(ji)重(zhong)懸(xuan)，然後(hou)按(an) 1:2 比(bi)例(li)進行(xing)分瓶(ping)傳(chuan)代(dai)，最(zui)後(hou)放入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)

培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)培養(yang)；

壹(yi)、商品介紹：

2、細(xi)胞(bao)凍(dong)存：

1）細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)至覆(fu)蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積時，棄(qi) 25cm2培養(yang)瓶(ping)中(zhong)的培(pei)養(yang)液(ye)，用 PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞(bao)壹(yi)次(ci)；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒置顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察，待細(xi)胞(bao)回(hui)縮(suo)變圓(yuan)後(hou)加入(ru)培(pei)養(yang)液(ye)終(zhong)

止(zhi)消化，輕(qing)輕(qing)吹打(da)細(xi)胞(bao)使(shi)之脫(tuo)落(luo)，然(ran)後將(jiang)懸(xuan)液轉移至 15ml 離(li)心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離心(xin) 5min；

3）用適量的(de)凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞(bao)，並(bing)放(fang)置於凍存管中(zhong)；

4）先(xian)將細(xi)胞(bao)凍(dong)存管放置於-20℃ 1.5h，然後將(jiang)其(qi)移入(ru)-80℃過(guo)夜，24h 後轉入(ru)液(ye)氮中(zhong)進行(xing)長(chang)期保(bao)存。使用程序

降(jiang)溫盒(he)可(ke)直接放(fang)入(ru)-80℃。

二(er)、細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)操(cao)作

1) 復蘇(su)細(xi)胞(bao)：以下細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)凍(dong)存處理(li)僅供參(can)考，具(ju)體操作(zuo)步(bu)驟以隨貨產品說明(ming)書為(wei)主。將(jiang)含有1 mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液的(de)凍(dong)存管在 37℃水(shui)浴中(zhong)迅(xun)速搖(yao)晃(huang)解凍，加4 mL培(pei)養(yang)基(ji)混合(he)均勻(yun)。在(zai)1000 rpm條件下(xia)離心3 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液，加1-2 mL培(pei)養(yang)基(ji)後吹(chui)勻(yun)。然後(hou)將(jiang)所有(you)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液加入(ru)含適量培(pei)養(yang)基(ji)的培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)培養(yang)過(guo)夜（或將細(xi)胞(bao)懸(xuan)液加入(ru)10 cm皿(min)中(zhong)，加入(ru)約8 mL培養(yang)基(ji)，培養(yang)過(guo)夜）。第二天(tian)換液(ye)並(bing)檢(jian)查(zha)細(xi)胞(bao)密度(du)。

2) 細(xi)胞(bao)傳(chuan)代(dai)：如果細(xi)胞(bao)密度(du)達(da) 80%-90%，即可進行(xing)傳(chuan)代培養(yang)。

a、棄(qi)去培養(yang)上(shang)清(qing)，用不含鈣、鎂(mei)離(li)子的(de)PBS潤(run)洗(xi)細(xi)胞(bao)1-2次(ci)。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培養(yang)瓶(ping)中(zhong)，使消化液浸潤(run)所有(you)細(xi)胞(bao)，將(jiang)培(pei)養(yang)瓶(ping)置於37℃培養(yang)箱(xiang)中(zhong)消化1-2 min（視細(xi)胞(bao)情(qing)況(kuang)而定），然(ran)後在(zai)顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察細(xi)胞(bao)消化情(qing)況(kuang)，若細(xi)胞(bao)大(da)部分變圓(yuan)並(bing)脫(tuo)落，迅(xun)速拿回(hui)操作(zuo)臺，輕(qing)敲幾下培(pei)養(yang)瓶(ping)後(hou)加2-3ml培(pei)養(yang)基(ji)終(zhong)止(zhi)消化。輕(qing)輕(qing)打(da)勻(yun)後裝入(ru)無菌離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm離心(xin)5 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液，補(bu)加1-2 mL培(pei)養(yang)液(ye)後吹勻。

c、將(jiang)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液按(an)1:2比(bi)例(li)分到新的(de)含8 mL培養(yang)基(ji)的新皿(min)中(zhong)或者瓶(ping)中(zhong)，置於培養(yang)箱(xiang)中(zhong)培養(yang)。 3) 細(xi)胞(bao)凍(dong)存：待細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)狀態(tai)良好時，可進行(xing)細(xi)胞(bao)凍(dong)存。下面 T25 瓶(ping)為(wei)例；a、收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)及細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)液(ye)，裝入(ru)無菌離心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm條件下(xia)離心4 min，棄(qi)去上(shang)清(qing)液，用PBS清(qing)洗(xi)壹(yi)遍，棄(qi)盡(jin)PBS，進行(xing)細(xi)胞(bao)計數(shu)。

b、根據(ju)細(xi)胞(bao)數(shu)量加入(ru)無血(xue)清(qing)細(xi)胞(bao)凍(dong)存液，使細(xi)胞(bao)密度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混勻(yun)，每支凍存管凍存1mL細(xi)胞(bao)懸(xuan)液，註意(yi)凍存管做(zuo)好標(biao)識。將凍存管放入(ru)-80℃冰(bing)箱，24 h後轉入(ru)液(ye)氮灌儲(chu)存。記(ji)錄凍存管位(wei)置以便下(xia)次(ci)拿取。

公司(si)正在出售的產(chan)品：

Nur77： 孤兒核受(shou)體蛋白(bai)Nur77抗(kang)體 大(da)鼠骨肉瘤細(xi)胞(bao);UMR-106

人(ren)神(shen)經細(xi)胞(bao)(HN) (10×106 ) 小(xiao)鼠(shu)骨髓(sui)間充(chong)質(zhi)幹細(xi)胞(bao)(EGFP標(biao)記(ji)) MGC80-3(MGC-803)人胃癌細(xi)胞(bao) 大(da)鼠氫(qing)離子轉運(yun)ATP酶(mei)溶酶體輔(fu)助(zhu)蛋白(bai)2(ATP6AP2)ELISA試劑(ji)盒(he) sIgA(Mouse secretory immunoglobulin A)  小(xiao)鼠(shu)分泌型(xing)免(mian)疫球(qiu)蛋白A 96T

Phospho-Nur77(Ser351)： 0酸(suan)化孤兒核受(shou)體蛋白(bai)Nur77抗(kang)體 猞(she)猁皮膚(fu)成纖(xian)維(wei)樣細(xi)胞(bao);ELS1

IL17A Protein Human 重(zhong)組(zu)人 IL17 / IL17A 蛋(dan)白(bai) (His 標簽(qian)) 大(da)鼠輕(qing)肽(tai)鐵(tie)蛋白(FTL)ELISA試劑(ji)盒(he) GRO Beta/CXCL2/MGSA(Human growth-regulated oncogene Beta/melanoma growth stimulating activity)  人(ren)生(sheng)長(chang)調節(jie)致癌基(ji)因β/黑(hei)素(su)瘤生激(ji)因子 96T

NAIF1 protein： 核雕亡誘導因子蛋(dan)白1 0.2ml

IGFALS： 酸(suan)不穩定亞(ya)基(ji)ALS抗(kang)體 肺(fei)大(da)靜脈(mai)內皮(pi)細(xi)胞(bao)Many types of cells包(bao)裝：5 × 105次(ci)方(1ml)

CSF2 Protein Human 重(zhong)組(zu)人 GM-CSF / CSF2 蛋(dan)白(bai) (Fc 標簽(qian)) 人(ren)25-羥(qiang)基(ji)維(wei)生(sheng)(25-OH Vitamin D)ELISA試劑(ji)盒(he) GAD-65 (glutamate decarboxylase) 谷(gu)酸(suan)脫羧酶(mei)-65(C端(duan)多(duo)肽(tai)) 0.5mg

Insulin(1D4:)： 豬(zhu)胰島(dao)素(su)單克(ke)隆抗(kang)體 CSNK2A1 Others Mouse 小鼠(shu) CSNK2A1 / CK2A1 桿(gan)狀病(bing)毒-昆(kun)蟲細(xi)胞(bao)裂解液(ye) (陽(yang)性(xing)對照(zhao))

人(ren)顱蓋(gai)造骨細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)基(ji) 100mL 人2,3-二(er)0酸(suan)甘油酸(suan)(2,3-DPG)ELISA 試劑(ji)盒(he) Galectin-3 半(ban)乳(ru)糖凝(ning)集(ji)素(su)-3(抗(kang)原) 0.5mg

IKK alpha： KB抑(yi)制蛋白(bai)激(ji)酶(mei)α/IκBα/IKK-α/IKKα/I-κB-α 抗(kang)體 小鼠(shu)神(shen)經幹細(xi)胞(bao)(EGFP標(biao)記(ji)) 人肺(fei)癌細(xi)胞(bao)，NCI-H596[H596]細(xi)胞(bao) NG108-15 [ 108CC15 ](小(xiao)鼠(shu)神(shen)經細(xi)胞(bao)瘤與(yu)大(da)鼠神(shen)經膠(jiao)質(zhi)瘤之融合細(xi)胞(bao))

PK-13豬(zhu)腎(shen)細(xi)胞(bao)系T-107B中(zhong)白酶(mei)(含100mL酶解(jie)緩(huan)沖液)10mL 大(da)鼠γ基(ji)(GABA)ELISA 試劑(ji)盒(he) GTE-AGE(Human Glomerular tissue extract-advanced glycosylation end products)  人(ren)腎(shen)小(xiao)球組(zu)織糖基(ji)化終(zhong)末(mo)產物 96T

Rho GTPase activating protein 29： Rho GTP酶(mei)激(ji)活(huo)蛋白(bai)29抗(kang)體 CST3 Others Human 人 CST3 / Cystatin-C / Cystatin-3 人(ren)細(xi)胞(bao)裂解液(ye) (陽(yang)性(xing)對照(zhao))

黑(hei)色(se)素(su)細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)生長(chang)添加物MelGS 大(da)鼠γ谷(gu)酸(suan)-半(ban)胱(guang)酸(suan)合成酶(mei)(γ-GCS)ELISA試劑(ji)盒(he) UP(Human Proteinuria)  人(ren)尿(niao)蛋(dan)白 96T

RSRC2： 食(shi)道(dao)癌抑(yi)制生長(chang)蛋白(bai)抗(kang)體 幼(you)蚊細(xi)胞(bao);C6/36

EB病(bing)毒轉化的人(ren)B淋(lin)巴細(xi)胞(bao);Mao 人(ren)骨骼肌細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)基(ji) 100mL 大(da)鼠γ幹擾素(su)誘導蛋白(bai)16/p16(IFI16/p16)ELISA試劑(ji)盒(he) LMP7/PSMB99Human low molecular-weight protein/proteasome beta-type subunit)  人(ren)低分子質(zhi)量蛋白(bai)7/β型(xing)蛋白酶體9 96T

三(san)、培(pei)養(yang)註意(yi)事項 

1. 收(shou)到細(xi)胞(bao)後(hou)首先(xian)觀察細(xi)胞(bao)瓶(ping)是否(fou)完好，培養(yang)液(ye)是否(fou)有漏(lou)液、渾濁等(deng)現(xian)象，若有上(shang)述現(xian)象 發(fa)生(sheng)請及時和(he)我(wo)們(men)聯(lian)系。

2. 仔細(xi)閱(yue)讀細(xi)胞(bao)說明(ming)書，了解細(xi)胞(bao)相關信息(xi)，如細(xi)胞(bao)形態(tai)、所用(yong)培養(yang)基(ji)、血(xue)清(qing)比例、所需(xu) 細(xi)胞(bao)因(yin)子等(deng)，確(que)保(bao)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)條件壹(yi)致，若由於(yu)培(pei)養(yang)條件不(bu)壹(yi)致而導致細(xi)胞(bao)出(chu)現(xian)問題(ti)，責任(ren)由(you) 客戶(hu)自(zi)行(xing)承(cheng)擔(dan)。

3. 用 75%酒精擦拭細(xi)胞(bao)瓶(ping)表(biao)面(mian)，顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)。因(yin)運(yun)輸(shu)問題(ti)，部分細(xi)胞(bao)由(you)於(yu)溫度(du) 變化及劇烈(lie)碰(peng)亡破(po)碎(sui)形成碎(sui)片(pian)，是正常現象。觀(guan)察好(hao)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)後(hou)，75%酒(jiu)精消毒瓶(ping)壁(bi)將(jiang) T25 瓶(ping)置於 37℃培養(yang)箱(xiang)放置 2-4h。

4. 貼(tie)壁細(xi)胞(bao)可(ke)以消化，懸(xuan)浮細(xi)胞(bao)直接混(hun)勻(yun)收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄(qi)上(shang) 清(qing)。加 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞(bao)，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用(yong)新鮮(xian)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)重(zhong)懸(xuan) 細(xi)胞(bao)，並(bing)接(jie)種(zhong)到新的(de)培(pei)養(yang)瓶(ping)或培養(yang)皿(min)中(zhong)，置於培養(yang)箱(xiang)中(zhong)進行(xing)培(pei)養(yang)。

5. 請客戶(hu)用(yong)相同條件的(de)培養(yang)基(ji)用於(yu)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)。

6. 建(jian)議客(ke)戶(hu)收(shou)到細(xi)胞(bao)後(hou)前 3 天(tian)各(ge)拍(pai)幾張細(xi)胞(bao)照(zhao)片(pian)，記(ji)錄細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)，便(bian)於(yu)和(he)我(wo)司(si)技術(shu)部(bu)溝通 交流。由(you)於(yu)運(yun)輸(shu)的(de)原因，個(ge)別(bie)敏(min)感細(xi)胞(bao)會(hui)出現(xian)不(bu)穩定的(de)情(qing)況(kuang)，請及時和(he)我(wo)們(men)聯(lian)系，告(gao)知(zhi)細(xi)胞(bao) 的(de)具(ju)體情(qing)況(kuang)，以便我(wo)們(men)的技術(shu)人(ren)員(yuan)跟蹤(zong)回訪直至問題(ti)解決(jue)。

7. 該(gai)細(xi)胞(bao)僅供科(ke)研使(shi)用(yong)。

8. 備註：運(yun)輸(shu)用(yong)的(de)培養(yang)基(ji) (灌液(ye)培(pei)養(yang)基(ji)) 不能再用來培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)，請換用(yong)按(an)照(zhao)說明(ming)書細(xi)胞(bao)培(pei) 養(yang)條件新配制的培(pei)養(yang)基(ji)來培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)。     收(shou)到細(xi)胞(bao)後(hou)第(di)壹(yi)次(ci)傳代(dai)建(jian)議 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳代就(jiu)是 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶(ping)或者 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不(bu)是 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿(min)。