RAW 264.7小(xiao)鼠單(dan)核(he)巨噬(shi)細(xi)胞(bao)白(bai)血(xue)病(bing)細胞(bao)

公(gong)司產品僅供(gong)科研(yan)研究(jiu)使用、不(bu)得用於(yu)臨(lin)床(chuang)診(zhen)斷！

1、細胞傳(chuan)代：

1）細(xi)胞(bao)生長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積(ji)時，棄 25cm2培(pei)養瓶(ping)中(zhong)的(de)培(pei)養(yang)液(ye)，用 PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞壹次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒置(zhi)顯微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察，待細胞回(hui)縮變(bian)圓後(hou)加入(ru) 5ml 培(pei)養(yang)

液(ye)終(zhong)止消(xiao)化(hua)，再(zai)輕(qing)輕(qing)吹(chui)打(da)細胞(bao)使之(zhi)脫落(luo)，然後(hou)將懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄上清(qing)，沈澱(dian)細(xi)胞用 1-2ml 培(pei)養(yang)基(ji)重(zhong)懸(xuan)，然後(hou)按 1:2 比例進行分瓶(ping)傳(chuan)代，最(zui)後(hou)放入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)

培養箱中(zhong)培(pei)養(yang)；

壹、商(shang)品介紹：

2、細胞(bao)凍(dong)存(cun)：

1）細(xi)胞生長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培(pei)養(yang)瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積(ji)時，棄 25cm2培(pei)養瓶(ping)中(zhong)的(de)培(pei)養(yang)液(ye)，用 PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞壹次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒置(zhi)顯微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察，待細胞回(hui)縮變(bian)圓後(hou)加入(ru)培(pei)養(yang)液(ye)終(zhong)

止消(xiao)化(hua)，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打(da)細胞(bao)使之(zhi)脫落(luo)，然後(hou)將懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用適(shi)量(liang)的(de)凍存(cun)液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細胞，並放置於(yu)凍(dong)存(cun)管(guan)中(zhong)；

4）先將細胞凍(dong)存(cun)管(guan)放(fang)置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後(hou)將其(qi)移(yi)入(ru)-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後(hou)轉入(ru)液(ye)氮(dan)中(zhong)進行長(chang)期(qi)保(bao)存(cun)。使用程(cheng)序

降(jiang)溫盒可(ke)直接放入(ru)-80℃。

二(er)、細胞(bao)培養操作(zuo)

1) 復蘇細胞：以(yi)下(xia)細(xi)胞培(pei)養凍(dong)存(cun)處(chu)理僅(jin)供(gong)參考，具體(ti)操作(zuo)步驟(zhou)以(yi)隨(sui)貨產(chan)品說(shuo)明書(shu)為(wei)主。將含有1 mL細胞(bao)懸(xuan)液(ye)的(de)凍(dong)存(cun)管(guan)在(zai) 37℃水(shui)浴(yu)中(zhong)迅(xun)速(su)搖(yao)晃(huang)解凍，加(jia)4 mL培(pei)養基(ji)混(hun)合(he)均勻。在(zai)1000 rpm條件(jian)下離(li)心(xin)3 min，棄去(qu)上清(qing)液(ye)，加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)基(ji)後(hou)吹勻。然(ran)後(hou)將所(suo)有細胞(bao)懸(xuan)液(ye)加(jia)入(ru)含(han)適(shi)量(liang)培(pei)養基(ji)的(de)培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)培(pei)養(yang)過(guo)夜(ye)（或將細胞懸(xuan)液(ye)加(jia)入(ru)10 cm皿(min)中(zhong)，加(jia)入(ru)約(yue)8 mL培(pei)養基(ji)，培(pei)養(yang)過(guo)夜(ye)）。第二(er)天換液(ye)並檢(jian)查(zha)細(xi)胞(bao)密度。

2) 細(xi)胞傳(chuan)代：如(ru)果(guo)細(xi)胞(bao)密(mi)度達 80%-90%，即(ji)可(ke)進行傳(chuan)代培(pei)養(yang)。

a、棄去(qu)培養(yang)上清(qing)，用不(bu)含(han)鈣(gai)、鎂(mei)離(li)子的PBS潤洗(xi)細(xi)胞1-2次(ci)。

b、加1 mL消化(hua)液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，使消(xiao)化(hua)液(ye)浸(jin)潤所(suo)有細胞(bao)，將培養瓶(ping)置(zhi)於(yu)37℃培(pei)養箱中(zhong)消(xiao)化(hua)1-2 min（視(shi)細胞情(qing)況(kuang)而定(ding)），然(ran)後(hou)在顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察細(xi)胞(bao)消(xiao)化(hua)情(qing)況(kuang)，若細(xi)胞大部(bu)分變圓(yuan)並脫落，迅速(su)拿(na)回操(cao)作(zuo)臺，輕(qing)敲幾下培養瓶(ping)後(hou)加2-3ml培(pei)養(yang)基(ji)終(zhong)止消(xiao)化(hua)。輕(qing)輕(qing)打(da)勻後(hou)裝入(ru)無(wu)菌離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄去(qu)上清(qing)液(ye)，補(bu)加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)液(ye)後(hou)吹勻。

c、將細胞懸(xuan)液(ye)按1:2比例分到新(xin)的(de)含8 mL培養(yang)基(ji)的(de)新(xin)皿(min)中(zhong)或者瓶(ping)中(zhong)，置(zhi)於(yu)培(pei)養箱中(zhong)培(pei)養(yang)。 3) 細(xi)胞(bao)凍存(cun)：待細胞生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態(tai)良(liang)好(hao)時，可(ke)進行細胞(bao)凍存(cun)。下(xia)面 T25 瓶(ping)為(wei)例；a、收集細(xi)胞及(ji)細(xi)胞培養液(ye)，裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離(li)心(xin)4 min，棄去(qu)上清(qing)液(ye)，用PBS清(qing)洗(xi)壹遍(bian)，棄盡(jin)PBS，進行細胞(bao)計(ji)數(shu)。

b、根(gen)據(ju)細胞(bao)數(shu)量(liang)加(jia)入無血(xue)清(qing)細(xi)胞(bao)凍存(cun)液(ye)，使細(xi)胞密(mi)度5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混(hun)勻，每(mei)支凍(dong)存(cun)管(guan)凍(dong)存(cun)1mL細(xi)胞懸(xuan)液(ye)，註意(yi)凍(dong)存(cun)管(guan)做好(hao)標(biao)識(shi)。將凍存(cun)管(guan)放(fang)入(ru)-80℃冰箱，24 h後(hou)轉入(ru)液(ye)氮(dan)灌(guan)儲(chu)存(cun)。記(ji)錄(lu)凍存(cun)管(guan)位置(zhi)以便(bian)下次(ci)拿(na)取(qu)。

公(gong)司正(zheng)在出(chu)售(shou)的(de)產品：

Phospho-NFKB1 (Ser927)： 0酸化(hua)細(xi)胞核(he)因子p50/k基(ji)因結合核(he)因子抗(kang)體(ti) 大鼠癌細胞(bao);MADB106

人膠質細胞(少突(tu)細(xi)胞)(HO) (1×106 ) 細(xi)胞(bao)名(ming)稱(cheng) 種屬 大鼠前列腺素(su)E合酶(mei)2(PTGES2)ELISA試劑(ji)盒 TFR/CD71(Mouse transferrin receptor)  小(xiao)鼠轉(zhuan)鐵蛋(dan)白(bai)受(shou)體 96T

Phospho-NMDAR1 (Ser890)： 0酸化(hua)谷(gu)酸受(shou)體1抗(kang)體(ti) 中(zhong)國倉鼠(shu)卵(luan)巢細胞(亞(ya)系(xi)克隆(long));CHO-beta2(414) CL.32 pTGF-beta2(414)

IL17F Protein Human 重(zhong)組人 IL-17F / Ierleukin-17F 蛋白(bai) (His 標(biao)簽) 大鼠前列腺素(su)E代謝(xie)物(wu)(PGEM)ELISA試劑(ji)盒 CALLA(Human common acute lymphocytic leukaemia antigen)  人普(pu)通急(ji)性(xing)淋(lin)巴(ba)細(xi)胞(bao)白(bai)血(xue)病(bing)抗(kang)原(yuan) 96T

KAT13C： 類(lei)受(shou)體激(ji)活(huo)蛋白(bai)2抗(kang)體(ti) PDE9A Others Human 人 PDE9A 桿(gan)狀病(bing)毒-昆蟲(chong)細胞(bao)裂解液(ye) (陽性(xing)對照(zhao))

Integrin beta 1： 整合(he)素(su)β1/Integrin β1抗(kang)體(ti) 表(biao)皮黑色素(su)細胞(bao)Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)

EFNA5 Protein Canine 重(zhong)組狗(gou) Ephrin-A5 / EFNA5 蛋(dan)白(bai) (Fc 標(biao)簽) 犬胰島(dao)素(su)(INS)ELISA 試劑(ji)盒 IL-10(Interleukin-10) 白(bai)介素(su)10(白(bai)細(xi)胞介素(su)-10)(抗(kang)原(yuan)) 0.5mg

Integrin Alpha V + Beta 3 (CD51+CD61)： 整合(he)素(su)αVβ3抗(kang)體(ti) GUCA1A Others Human 人 GCAP1 / GUCA1A 桿(gan)狀病(bing)毒-昆蟲(chong)細胞(bao)裂解液(ye) (陽性(xing)對照(zhao))

人真皮微血管(guan)內(nei)皮(pi)細胞培(pei)養(yang)基(ji) 100mL 犬合成(cheng)酶(mei)(NOS)ELISA試劑(ji)盒 IL-8 白(bai)介素(su)8(白(bai)細(xi)胞介素(su)-8)(抗(kang)原(yuan)) 0.5mg

IGF2BP3： 2 mRNA 結合蛋(dan)白(bai)3抗(kang)體(ti) 人星形膠質細胞 人肺癌細胞(bao)，NCI-H1869[H1869]細(xi)胞(bao) YAC-1(淋(lin)巴(ba)瘤(liu)細(xi)胞)

RAW 264.7小鼠(shu)單(dan)核(he)巨噬(shi)細(xi)胞(bao)白(bai)血(xue)病(bing)細胞(bao)EB病(bing)毒轉(zhuan)化(hua)的(de)人B淋(lin)巴(ba)細(xi)胞(bao);KMY0902 胎兒(er)表(biao)皮角(jiao)化(hua)細(xi)胞培養基(ji) 100mL 大鼠β幹(gan)擾(rao)素(su)(IFN-β/IFNB)ELISA 試劑(ji)盒 CMLC-1(Human Cardiac myosin-light chains 1)  人心肌肌凝(ning)蛋(dan)白(bai)輕(qing)鏈(lian)1 96T

RPL19： 核(he)糖體(ti)蛋(dan)白(bai)L19抗(kang)體(ti) CL-0306SMC-1(人胸膜瘤細(xi)胞)5×106cells/瓶(ping)×2

HBE, 正(zheng)常人支氣(qi)管(guan)上皮(pi)細胞(bao)系 大鼠β防禦(yu)素(su)2(DEFB2)ELISA試劑(ji)盒 IMA(Human Ischemia Modified Albumin)  人缺血修(xiu)飾白(bai)蛋(dan)白(bai) 96T

RASL10A： Ras樣(yang)蛋(dan)白(bai)家(jia)族10A抗(kang)體(ti) HA Others H7N9 甲型流(liu)感(gan) H7N9 (A/Pigeon/Shanghai/S1069/2013) 血凝素(su)HA1 (Hemagglutinin) 人細胞裂解液(ye) (陽性(xing)對照(zhao))

DQSHS1 迪慶(qing)綿(mian)羊皮膚成(cheng)纖(xian)維樣(yang)細(xi)胞(bao) 大鼠β-防禦(yu)素(su)(β-DF)ELISA試劑(ji)盒 8-epi-PGF2 Alpha(Human 8-epi-prostaglandin F2alpha0  人8-異(yi)構前列腺素(su)F2α 96T

三(san)、培養(yang)註意(yi)事項 

1. 收(shou)到細(xi)胞後(hou)首先觀(guan)察細(xi)胞(bao)瓶(ping)是否完(wan)好(hao)，培(pei)養(yang)液(ye)是否有漏液(ye)、渾(hun)濁(zhuo)等(deng)現象(xiang)，若(ruo)有上述現象(xiang) 發(fa)生(sheng)請及(ji)時和我們(men)聯系。

2. 仔(zai)細(xi)閱讀(du)細胞說(shuo)明書(shu)，了解細胞(bao)相(xiang)關(guan)信(xin)息(xi)，如(ru)細胞(bao)形態(tai)、所(suo)用培(pei)養(yang)基(ji)、血(xue)清(qing)比例、所(suo)需(xu) 細(xi)胞(bao)因子等，確(que)保(bao)細(xi)胞(bao)培(pei)養條件壹致，若(ruo)由(you)於(yu)培(pei)養條(tiao)件不(bu)壹致而(er)導(dao)致細(xi)胞(bao)出(chu)現問(wen)題，責任由 客戶自(zi)行承擔(dan)。

3. 用 75%酒精(jing)擦拭(shi)細(xi)胞(bao)瓶(ping)表(biao)面，顯(xian)微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)。因運(yun)輸(shu)問(wen)題，部(bu)分細胞(bao)由(you)於(yu)溫度 變化(hua)及(ji)劇(ju)烈碰亡破(po)碎形成(cheng)碎片(pian)，是正(zheng)常現象(xiang)。觀(guan)察好(hao)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態後(hou)，75%酒精(jing)消(xiao)毒瓶(ping)壁(bi)將 T25 瓶(ping)置(zhi)於(yu) 37℃培(pei)養箱放置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細(xi)胞可(ke)以消(xiao)化(hua)，懸(xuan)浮細(xi)胞(bao)直接混勻收(shou)集細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄上 清(qing)。加 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用新(xin)鮮(xian)的(de)培養基(ji)重(zhong)懸(xuan) 細胞，並接種到(dao)新(xin)的培(pei)養瓶(ping)或培養(yang)皿(min)中(zhong)，置(zhi)於(yu)培(pei)養箱中(zhong)進行培養(yang)。

5. 請客(ke)戶用相(xiang)同(tong)條(tiao)件的培養(yang)基(ji)用於(yu)細(xi)胞培(pei)養。

6. 建(jian)議(yi)客(ke)戶收到細胞後(hou)前 3 天(tian)各拍幾張細胞照(zhao)片，記錄(lu)細胞(bao)狀態，便於(yu)和我司技(ji)術部(bu)溝通 交(jiao)流(liu)。由於(yu)運(yun)輸的(de)原因，個別(bie)敏(min)感細胞(bao)會出(chu)現不(bu)穩(wen)定(ding)的(de)情(qing)況(kuang)，請及(ji)時和我們(men)聯系，告(gao)知細胞(bao) 的具體(ti)情(qing)況(kuang)，以便(bian)我們(men)的技(ji)術人員(yuan)跟(gen)蹤(zong)回(hui)訪直至(zhi)問(wen)題解決(jue)。

7. 該(gai)細(xi)胞(bao)僅供(gong)科研(yan)使用。

8. 備註：運輸(shu)用的(de)培(pei)養(yang)基(ji) (灌(guan)液(ye)培(pei)養(yang)基(ji)) 不(bu)能再(zai)用來培(pei)養(yang)細胞(bao)，請換用按照(zhao)說(shuo)明書(shu)細胞(bao)培(pei) 養條件新配(pei)制(zhi)的(de)培養基(ji)來培(pei)養(yang)細胞(bao)。     收到細胞後(hou)第壹次(ci)傳(chuan)代建(jian)議(yi) 1：2 傳(chuan)代 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳(chuan)代就(jiu)是 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個 T25 瓶(ping)或者 2 個 6cm 皿(min)。不(bu)是 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個10cm 皿(min)。