MEF小鼠(shu)胚胎(tai)成纖維細(xi)胞(bao)

公(gong)司產品僅供科研研究(jiu)使用(yong)、不(bu)得用(yong)於(yu)臨床診(zhen)斷！

1、細(xi)胞(bao)傳代：

1）細(xi)胞(bao)生長至覆(fu)蓋培(pei)養(yang)瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積(ji)時(shi)，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)的(de)培(pei)養(yang)液，用 PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞(bao)壹(yi)次；

2）添加 0.25%消化(hua)液約 1ml 至培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒置顯(xian)微鏡下(xia)觀(guan)察(cha)，待(dai)細(xi)胞(bao)回縮(suo)變圓後加入(ru) 5ml 培(pei)養(yang)

液終止消(xiao)化(hua)，再輕輕吹打(da)細(xi)胞(bao)使之(zhi)脫(tuo)落，然(ran)後(hou)將(jiang)懸液轉移(yi)至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）棄上(shang)清(qing)，沈澱細(xi)胞(bao)用 1-2ml 培(pei)養(yang)基重懸，然後按 1:2 比例(li)進(jin)行(xing)分(fen)瓶(ping)傳代，最後放入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞(bao)

培(pei)養(yang)箱中(zhong)培(pei)養(yang)；

壹(yi)、商(shang)品介(jie)紹(shao)：

2、細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)：

1）細(xi)胞(bao)生長至覆(fu)蓋培(pei)養(yang)瓶(ping)的(de) 80%面(mian)積(ji)時(shi)，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)的(de)培(pei)養(yang)液，用 PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞(bao)壹(yi)次；

2）添加 0.25%消化(hua)液約 1ml 至培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，倒置顯(xian)微鏡下(xia)觀(guan)察(cha)，待(dai)細(xi)胞(bao)回縮(suo)變圓後加入(ru)培(pei)養(yang)液終

止消(xiao)化(hua)，輕輕吹打(da)細(xi)胞(bao)使之(zhi)脫(tuo)落，然(ran)後(hou)將(jiang)懸液轉移(yi)至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）用適量(liang)的(de)凍(dong)存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xi)胞(bao)，並(bing)放(fang)置於(yu)凍(dong)存(cun)管(guan)中(zhong)；

4）先(xian)將(jiang)細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)管(guan)放(fang)置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然後將(jiang)其(qi)移(yi)入(ru)-80℃過夜，24h 後轉入(ru)液氮中進(jin)行(xing)長期(qi)保(bao)存(cun)。使用(yong)程(cheng)序

降溫(wen)盒(he)可直(zhi)接(jie)放入(ru)-80℃。

二、細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)操作

1) 復(fu)蘇(su)細(xi)胞(bao)：以下(xia)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)凍(dong)存(cun)處理僅供參(can)考(kao)，具(ju)體(ti)操作步(bu)驟(zhou)以隨(sui)貨(huo)產品說明書(shu)為主。將(jiang)含有1 mL細(xi)胞(bao)懸液的(de)凍(dong)存(cun)管(guan)在(zai) 37℃水浴中迅(xun)速(su)搖(yao)晃(huang)解凍(dong)，加4 mL培(pei)養(yang)基混合(he)均勻(yun)。在(zai)1000 rpm條件(jian)下(xia)離心3 min，棄去上(shang)清(qing)液，加1-2 mL培(pei)養(yang)基後(hou)吹勻(yun)。然後將(jiang)所(suo)有(you)細(xi)胞(bao)懸液加入(ru)含適量(liang)培(pei)養(yang)基的(de)培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)培(pei)養(yang)過夜（或將(jiang)細(xi)胞(bao)懸液加入(ru)10 cm皿(min)中(zhong)，加入(ru)約8 mL培(pei)養(yang)基，培(pei)養(yang)過夜）。第(di)二天(tian)換液並(bing)檢(jian)查細(xi)胞(bao)密度。

2) 細(xi)胞(bao)傳代：如(ru)果(guo)細(xi)胞(bao)密度達 80%-90%，即可進行(xing)傳代培(pei)養(yang)。

a、棄去培(pei)養(yang)上(shang)清(qing)，用(yong)不含鈣、鎂離子的(de)PBS潤(run)洗(xi)細(xi)胞(bao)1-2次。

b、加1 mL消化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，使消(xiao)化(hua)液浸潤所(suo)有(you)細(xi)胞(bao)，將(jiang)培(pei)養(yang)瓶(ping)置(zhi)於(yu)37℃培(pei)養(yang)箱中(zhong)消化(hua)1-2 min（視細(xi)胞(bao)情況而(er)定(ding)），然(ran)後在(zai)顯(xian)微鏡下(xia)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)消化(hua)情況，若細(xi)胞(bao)大部(bu)分(fen)變圓並(bing)脫(tuo)落，迅(xun)速(su)拿回操(cao)作臺(tai)，輕敲(qiao)幾下(xia)培(pei)養(yang)瓶(ping)後(hou)加2-3ml培(pei)養(yang)基終止消(xiao)化(hua)。輕輕打(da)勻(yun)後裝入(ru)無菌(jun)離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上(shang)清(qing)液，補加1-2 mL培(pei)養(yang)液後吹勻(yun)。

c、將(jiang)細(xi)胞(bao)懸液按1:2比例(li)分(fen)到(dao)新的(de)含8 mL培(pei)養(yang)基的(de)新皿(min)中(zhong)或者瓶(ping)中(zhong)，置於(yu)培(pei)養(yang)箱中(zhong)培(pei)養(yang)。 3) 細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)：待(dai)細(xi)胞(bao)生長狀(zhuang)態(tai)良好(hao)時(shi)，可進行(xing)細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)。下(xia)面(mian) T25 瓶(ping)為(wei)例(li)；a、收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)及細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)液，裝入(ru)無菌(jun)離心管中，1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離心4 min，棄去上(shang)清(qing)液，用PBS清(qing)洗(xi)壹(yi)遍(bian)，棄盡PBS，進(jin)行(xing)細(xi)胞(bao)計(ji)數。

b、根(gen)據細(xi)胞(bao)數量(liang)加入(ru)無血清(qing)細(xi)胞(bao)凍(dong)存(cun)液，使細(xi)胞(bao)密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻(yun)，每(mei)支(zhi)凍(dong)存(cun)管(guan)凍(dong)存(cun)1mL細(xi)胞(bao)懸液，註意凍(dong)存(cun)管(guan)做(zuo)好(hao)標(biao)識(shi)。將(jiang)凍(dong)存(cun)管(guan)放(fang)入(ru)-80℃冰箱(xiang)，24 h後轉入(ru)液氮灌儲存(cun)。記(ji)錄凍(dong)存(cun)管(guan)位(wei)置(zhi)以(yi)便(bian)下(xia)次拿取。

公(gong)司(si)正在(zai)出售的(de)產品：

LEP Protein Human 重組人 Leptin 蛋白 大(da)鼠(shu)髓(sui)過(guo)氧(yang)化(hua)物(wu)酶(MPO)ELISA試(shi)劑盒(he) ER  大鼠(shu)雌(ci)激素(su)受體(ti) 96T

SLC12A3： 氯(lv)離子轉運(yun)蛋白抗(kang)體(ti) PRDX2 Others Human 人 Peroxiredoxin 2 / PRDX2 桿狀(zhuang)病(bing)毒-昆蟲細(xi)胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽性對(dui)照(zhao))

小鼠(shu)結(jie)腸(chang)平(ping)滑(hua)肌細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)基 100mL 大(da)鼠髓(sui)過(guo)氧(yang)化(hua)物(wu)酶(MPO)ELISA 試(shi)劑盒(he) IGFBP-4(Human insulin-like growth factors binding protein 4)  人結(jie)合(he)蛋白4 96T

NSE： 神(shen)經(jing)元特(te)異性烯(xi)醇(chun)化酶/γ 烯(xi)醇(chun)化酶抗(kang)體(ti) RM-1細(xi)胞(bao)，前(qian)列腺癌細(xi)胞(bao) 人胚胎(tai)腸(chang)粘膜細(xi)胞(bao),CCC-HIE-2細(xi)胞(bao) 恒河(he)猴腎(shen)細(xi)胞(bao);RM-2

CD3E Others Cynomolgus 食(shi)蟹猴 CD3e / CD3 epsilon 人細(xi)胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽性對(dui)照(zhao)) 大(da)鼠酸(suan)性(xing)鐵(tie)蛋白(AIF)ELISA試(shi)劑盒(he) IGFBP-3(Human insulin-like growth factors binding protein 3)  人結(jie)合(he)蛋白3 96T

CCL17 Protein Mouse 重組小鼠(shu) CCL17 / TARC 蛋(dan)白 人(ren)癌(ai)胚抗原(CEA/CD66)ELISA 試(shi)劑盒(he) PAX8(Paired box gene 8) 配(pei)對(dui)盒(he)基因(yin)8抗(kang)原 0.5mg

phospho-IGF1R (Tyr1161)： 0酸(suan)化(hua)1受體(ti)抗體(ti) MAPK12 Others Human 人 ERK3 / MAPK12 / P38-gamma 桿狀(zhuang)病(bing)毒-昆蟲細(xi)胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽性對(dui)照(zhao))

人(ren)子(zi)宮(gong)成(cheng)纖維細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)基 100mL 人(ren)癌基(ji)因蛋(dan)白質(zhi)p190/bcr-abl ELISA 試(shi)劑盒(he) PAX9(Paired box gene 9) 配(pei)對(dui)盒(he)基因(yin)9抗(kang)原 0.5mg

IDE： 胰(yi)島素(su)降解(jie)酶抗(kang)體(ti) 非(fei)洲(zhou)綠猴腎(shen)細(xi)胞(bao)系(xi)/HCV-NS5B;Vero-HCV-NS5B 人(ren)卵(luan)巢(chao)癌細(xi)胞(bao)，SK-OV-3[SKOV-3]細(xi)胞(bao) BT549(管癌(ai)細(xi)胞(bao))

SEMA4D Others Rat 大(da)鼠(shu) Semaphorin 4D / SEMA4D / CD100 人(ren)細(xi)胞(bao)裂(lie)解(jie)液 (陽性對(dui)照(zhao)) 人(ren)癌標(biao)誌物(wu)-CA153ELISA 試(shi)劑盒(he) P-cadherin(placental) P-鈣粘附分(fen)子(zi)抗(kang)原(yuan) 0.5mg

MEF小鼠(shu)胚胎(tai)成纖維細(xi)胞(bao)人(ren)脈(mai)絡(luo)叢(cong)成纖維細(xi)胞(bao)總RNAHCPF NA 大鼠(shu)補體(ti)成分(fen)4(C4)ELISA試(shi)劑盒(he) AMPK(Human Phosphorylated adenosine monophosphate activated protein kinase)  人0酸(suan)化(hua)腺(xian)苷酸(suan)活化蛋白激(ji)酶(mei) 96T

RNF41： 環(huan)指蛋白41抗(kang)體(ti) 非(fei)洲(zhou)綠猴腎(shen)細(xi)胞(bao)系(xi)/IgRCD4-;VERO/IgRCD4-

轉(zhuan)化(hua)細(xi)胞(bao) 人卵(luan)巢(chao)成(cheng)纖維細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)基 100mL 大(da)鼠補體(ti)成分(fen)3(C3)ELISA試(shi)劑盒(he) LDH(Human Lactate Dehydrogenase)  人乳(ru)酸(suan)脫(tuo)氫(qing)酶 96T

RAD21： 核(he)基(ji)質(zhi)蛋白21抗(kang)體(ti) 原代肝(gan)實質(zhi)細(xi)胞(bao)特制(zhi)無(wu)血清(qing)添加劑Many types of cells包(bao)裝：1ml

RA, 大(da)鼠(shu)星(xing)形(xing)膠(jiao)質(zhi)細(xi)胞(bao) 大鼠(shu)補體(ti)C5a(C5a)ELISA試(shi)劑盒(he) ADAM9(Human A Disintegrin And Metalloprotease 9)  人解(jie)整(zheng)合(he)素(su)樣金屬蛋(dan)白酶(mei)9 96T

三(san)、培(pei)養(yang)註意(yi)事(shi)項(xiang) 

1. 收(shou)到細(xi)胞(bao)後首(shou)先(xian)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)瓶(ping)是(shi)否完好(hao)，培(pei)養(yang)液是(shi)否有漏(lou)液、渾濁等(deng)現象，若(ruo)有(you)上(shang)述現(xian)象(xiang) 發生請及時(shi)和(he)我(wo)們(men)聯系(xi)。

2. 仔(zai)細(xi)閱(yue)讀(du)細(xi)胞(bao)說明書(shu)，了解(jie)細(xi)胞(bao)相關(guan)信息，如(ru)細(xi)胞(bao)形態(tai)、所(suo)用(yong)培(pei)養(yang)基、血清(qing)比例(li)、所(suo)需 細(xi)胞(bao)因子(zi)等(deng)，確保(bao)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)條件(jian)壹(yi)致(zhi)，若由(you)於(yu)培(pei)養(yang)條件(jian)不壹(yi)致(zhi)而(er)導致細(xi)胞(bao)出現問(wen)題，責(ze)任由(you) 客戶(hu)自行(xing)承(cheng)擔。

3. 用 75%酒精(jing)擦拭(shi)細(xi)胞(bao)瓶(ping)表(biao)面(mian)，顯(xian)微鏡下(xia)觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)。因運(yun)輸問題，部(bu)分(fen)細(xi)胞(bao)由於(yu)溫度 變化及劇(ju)烈碰亡(wang)破碎(sui)形成(cheng)碎(sui)片(pian)，是(shi)正常(chang)現象(xiang)。觀(guan)察(cha)好(hao)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)後，75%酒(jiu)精(jing)消毒瓶(ping)壁(bi)將(jiang) T25 瓶(ping)置(zhi)於(yu) 37℃培(pei)養(yang)箱放(fang)置 2-4h。

4. 貼(tie)壁細(xi)胞(bao)可以消(xiao)化，懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞(bao)直(zhi)接(jie)混勻(yun)收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上(shang) 清(qing)。加 5 mL PBS 重懸細(xi)胞(bao)，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮的(de)培(pei)養(yang)基重懸 細(xi)胞(bao)，並(bing)接(jie)種到新的(de)培(pei)養(yang)瓶(ping)或(huo)培(pei)養(yang)皿(min)中(zhong)，置於(yu)培(pei)養(yang)箱中(zhong)進行(xing)培(pei)養(yang)。

5. 請客戶(hu)用相同(tong)條件(jian)的(de)培(pei)養(yang)基用(yong)於(yu)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)。

6. 建議客戶(hu)收(shou)到細(xi)胞(bao)後前(qian) 3 天各拍幾張(zhang)細(xi)胞(bao)照(zhao)片(pian)，記錄細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)，便(bian)於(yu)和(he)我(wo)司(si)技術部(bu)溝(gou)通 交流。由於(yu)運(yun)輸的(de)原(yuan)因(yin)，個別敏感細(xi)胞(bao)會出現不(bu)穩(wen)定(ding)的(de)情況，請及時(shi)和(he)我(wo)們(men)聯系(xi)，告(gao)知(zhi)細(xi)胞(bao) 的(de)具(ju)體(ti)情況，以便(bian)我(wo)們(men)的(de)技術人員跟蹤回(hui)訪直(zhi)至問(wen)題解決(jue)。

7. 該(gai)細(xi)胞(bao)僅供(gong)科研使用(yong)。

8. 備(bei)註：運(yun)輸用的(de)培(pei)養(yang)基 (灌液培(pei)養(yang)基) 不(bu)能(neng)再(zai)用來培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)，請換用(yong)按照(zhao)說明書(shu)細(xi)胞(bao)培(pei) 養(yang)條件(jian)新配(pei)制(zhi)的(de)培(pei)養(yang)基來培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)。     收(shou)到細(xi)胞(bao)後第(di)壹(yi)次傳代建議 1：2 傳代 。

9. 註意：  1:2 傳代就(jiu)是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳 2 個 T25 瓶(ping)或(huo)者 2 個 6cm 皿(min)。不(bu)是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳 2 個10cm 皿(min)。