KLE人(ren)子(zi)宮內膜(mo)癌(ai)細胞

公司產(chan)品僅供科(ke)研(yan)研(yan)究使用(yong)、不得用於(yu)臨(lin)床診(zhen)斷(duan)！

1、細胞傳(chuan)代(dai)：

1）細胞生長至覆蓋培養(yang)瓶的 80%面積(ji)時(shi)，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的培養(yang)液(ye)，用 PBS 清(qing)洗(xi)細胞壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消化液約 1ml 至培養(yang)瓶中，倒置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡下觀(guan)察，待(dai)細胞回(hui)縮變圓(yuan)後(hou)加入(ru) 5ml 培(pei)養(yang)

液(ye)終止(zhi)消化，再(zai)輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細胞使之脫(tuo)落(luo)，然後(hou)將(jiang)懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離(li)心管(guan)中，1000rpm 離(li)心 5min；

3）棄(qi)上(shang)清(qing)，沈(chen)澱(dian)細胞用(yong) 1-2ml 培養(yang)基(ji)重懸(xuan)，然後(hou)按 1:2 比(bi)例進(jin)行(xing)分(fen)瓶傳(chuan)代(dai)，最後(hou)放入(ru) 37℃，5%CO2細胞

培(pei)養(yang)箱(xiang)中培養(yang)；

壹、商品介(jie)紹(shao)：

2、細胞凍存：

1）細胞生長至覆蓋培養(yang)瓶的 80%面積(ji)時(shi)，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的培養(yang)液(ye)，用 PBS 清(qing)洗(xi)細胞壹(yi)次(ci)；

2）添(tian)加(jia) 0.25%消化液約 1ml 至培養(yang)瓶中，倒置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡下觀(guan)察，待(dai)細胞回(hui)縮變圓(yuan)後(hou)加入(ru)培(pei)養(yang)液(ye)終

止(zhi)消化，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打細胞使之脫(tuo)落(luo)，然後(hou)將(jiang)懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離(li)心管(guan)中，1000rpm 離(li)心 5min；

3）用(yong)適(shi)量的凍存液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細胞，並(bing)放置於(yu)凍存管(guan)中；

4）先將(jiang)細胞凍存管(guan)放(fang)置於(yu)-20℃ 1.5h，然後(hou)將(jiang)其(qi)移(yi)入(ru)-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後(hou)轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮(dan)中進(jin)行(xing)長期(qi)保(bao)存。使用(yong)程序

降(jiang)溫(wen)盒(he)可(ke)直接放(fang)入(ru)-80℃。

二(er)、細胞培(pei)養(yang)操(cao)作

1) 復蘇細胞：以(yi)下細胞培(pei)養(yang)凍存處(chu)理僅供參(can)考(kao)，具(ju)體操作步(bu)驟(zhou)以隨(sui)貨(huo)產(chan)品說(shuo)明(ming)書為(wei)主(zhu)。將(jiang)含(han)有1 mL細胞懸(xuan)液的凍存管(guan)在(zai) 37℃水(shui)浴(yu)中迅速搖(yao)晃(huang)解凍，加4 mL培養(yang)基(ji)混(hun)合均(jun)勻。在(zai)1000 rpm條(tiao)件下離(li)心3 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，加(jia)1-2 mL培(pei)養(yang)基(ji)後(hou)吹勻。然後(hou)將(jiang)所(suo)有細胞懸(xuan)液加入(ru)含(han)適(shi)量培(pei)養(yang)基(ji)的培養(yang)瓶中培養(yang)過(guo)夜(ye)（或(huo)將(jiang)細胞懸(xuan)液加入(ru)10 cm皿(min)中，加入(ru)約8 mL培養(yang)基(ji)，培養(yang)過(guo)夜(ye)）。第(di)二天(tian)換液並(bing)檢(jian)查細胞密(mi)度。

2) 細胞傳(chuan)代(dai)：如(ru)果細胞密(mi)度達 80%-90%，即(ji)可(ke)進(jin)行(xing)傳(chuan)代(dai)培養(yang)。

a、棄(qi)去培(pei)養(yang)上(shang)清(qing)，用(yong)不含鈣、鎂(mei)離(li)子的PBS潤洗細胞1-2次(ci)。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養(yang)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，將(jiang)培(pei)養(yang)瓶置於(yu)37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)中消化1-2 min（視細胞情況而(er)定(ding)），然後(hou)在(zai)顯(xian)微(wei)鏡下觀(guan)察細胞消化情況，若(ruo)細胞大(da)部(bu)分(fen)變圓(yuan)並脫(tuo)落(luo)，迅(xun)速拿回(hui)操作臺(tai)，輕(qing)敲(qiao)幾下培養(yang)瓶後(hou)加2-3ml培(pei)養(yang)基(ji)終止消化。輕(qing)輕(qing)打勻後(hou)裝入(ru)無菌(jun)離(li)心管(guan)中，1000 rpm離(li)心5 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，補加1-2 mL培(pei)養(yang)液(ye)後(hou)吹勻。

c、將(jiang)細胞懸(xuan)液按1:2比(bi)例(li)分(fen)到新的含8 mL培(pei)養(yang)基(ji)的新皿(min)中或(huo)者瓶中，置於(yu)培(pei)養(yang)箱(xiang)中培養(yang)。 3) 細胞凍存：待(dai)細胞生長狀態(tai)良好(hao)時(shi)，可(ke)進(jin)行(xing)細胞凍存。下面 T25 瓶為例(li)；a、收(shou)集細胞及(ji)細胞培(pei)養(yang)液(ye)，裝入(ru)無菌(jun)離(li)心管(guan)中，1000 rpm條件(jian)下離(li)心4 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)液(ye)，用(yong)PBS清(qing)洗壹遍，棄(qi)盡PBS，進(jin)行(xing)細胞計(ji)數(shu)。

b、根據(ju)細胞數(shu)量加入(ru)無血清(qing)細胞凍存液(ye)，使細胞密(mi)度5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混(hun)勻，每支(zhi)凍存管(guan)凍存1mL細胞懸(xuan)液，註意(yi)凍存管(guan)做(zuo)好(hao)標(biao)識。將(jiang)凍存管(guan)放(fang)入(ru)-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後(hou)轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮(dan)灌(guan)儲存。記(ji)錄(lu)凍存管(guan)位(wei)置以(yi)便下次(ci)拿取(qu)。

公司正在(zai)出(chu)售的產(chan)品：

MDGA2： 神經(jing)元膜(mo)糖(tang)蛋(dan)白錨(mao)定(ding)蛋(dan)白2抗(kang)體(ti) 人(ren)前脂肪細胞-內(nei)臟裂解(jie)物HPA-v L

B16小(xiao)鼠(shu)黑色素瘤細胞 B16 mouse melanoma cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS 大(da)鼠VC)ELISA 試劑盒(he) ENG/sCD105(human Soluble Endoglin)  人(ren)可(ke)溶(rong)性(xing)Endoglin 96T

MYRIP： MYRIP蛋(dan)白抗(kang)體(ti) TGFB1 Others Human 人(ren) late TGFβ1 人(ren)細胞裂解(jie)液(ye) (陽性(xing)對照(zhao))

CL-0256AM(人(ren)腺(xian)樣囊(nang)性(xing)癌(ai)細胞(高轉(zhuan)移(yi)))5×106cells/瓶×2 大鼠(shu)6(VB6)ELISA試(shi)劑盒(he) TNF- Alpha(Human Tumor necrosis factor Alpha)  人(ren)壞(huai)死因子(zi)α 96T

Myelin PLP： 髓0酯(zhi)髓鞘(qiao)蛋(dan)白1抗(kang)體(ti) tTA基(ji)因修飾的小(xiao)鼠(shu)畸胎瘤細胞(B類(lei));F9-CAG-tTA-1A3

7WML6.0細胞，人(ren)APP-PS1(M146L)雙(shuang)基(ji)因轉(zhuan)染(ran)CHO細胞株(zhu) 生孢梭(suo)菌(jun) 狗(gou)肺成(cheng)纖維(wei)樣細胞;DogL1 人(ren)布(bu)魯(lu)氏(shi)菌(jun)抗(kang)體IgG(Brucella Ab IgG)ELISA 試劑(ji)盒(he) JAK1(Tyrosine-protein kinase JAK1; Janus kinase 1) 蛋(dan)白質酪(lao)酸(suan)激酶JAK-1抗(kang)原(yuan) 0.5mg

IGLON5： IgLON家族蛋(dan)白5抗(kang)體(ti) TNFRSF10B Others Mouse 小(xiao)鼠(shu) AILR2 / TNFRSF10B 人(ren)細胞裂解(jie)液(ye) (陽性(xing)對照(zhao))

小(xiao)鼠(shu)神經(jing)母細胞瘤細胞;Neuro-2a [N2a; Neuro-2a] 人(ren)布(bu)病(bing)抗(kang)體(ti)(Brucellosis-Ab)ELISA試劑(ji)盒(he) JAK2(Tyrosine-protein kinase JAK2; Janus kinase 2; JAK-2) 蛋(dan)白質酪(lao)酸(suan)激酶JAK-2抗(kang)原(yuan) 0.5ml

IKAROS： 鋅指蛋(dan)白IKAROS抗(kang)體(ti) EB病(bing)毒(du)轉(zhuan)化的人(ren)B淋(lin)巴(ba)細胞;HH-16

NRK-52E(大鼠腎小(xiao)管(guan)導(dao)管(guan)上(shang)皮(pi)細胞) 5×106cells/瓶×2 人(ren) APCDD1 人(ren)細胞裂解(jie)液(ye) (陽性(xing)對照(zhao)) 人(ren)不透光相關蛋(dan)白(OPAs)ELISA 試(shi)劑(ji)盒(he) phospho JAK2(phospho-Tyr1007+Tyr1008) 0酸(suan)化蛋(dan)白酪(lao)酸(suan)激酶JAK-2抗(kang)原(yuan) 0.5mg

KLE人(ren)子(zi)宮內膜(mo)癌(ai)細胞TCN2 Others Mouse 小(xiao)鼠(shu) TCN2 / anscobalamin-II 人(ren)細胞裂解(jie)液(ye) (陽性(xing)對照(zhao)) 大鼠(shu)單(dan)胺氧化酶(MAO)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he) fPSA(Human Free Prostate Specific Antigen)  人(ren)遊(you)離(li)前列腺(xian)特異(yi)性(xing)抗原(yuan) 96T

RNF146： 環指蛋(dan)白146抗(kang)體(ti) 豹貓肌(ji)肉(rou)成(cheng)纖維(wei)樣細胞;LCM4

CL-0466WI38/VA13(SV-40Z轉(zhuan)化肺成(cheng)纖維(wei)細胞)5×106cells/瓶×2 大鼠(shu)大(da)內皮素(Big ET)ELISA試(shi)劑盒(he) PSA(Human prostate specific antigen)  人(ren)前列腺(xian)特異(yi)性(xing)抗原(yuan) 96T

Rab5b： RAS相關蛋(dan)白Rab5B抗(kang)體(ti) IFNGR1 Others Human 人(ren) IFNγR1 / CD119 人(ren)細胞裂解(jie)液(ye) (陽性(xing)對照(zhao))

人(ren)肝星(xing)形細胞RNAHHSteC miRNA5 μg 大(da)鼠大內皮素(Big ET)ELISA 試(shi)劑盒(he) PS(Human phosphatidylserine)  人(ren)0脂(zhi)酰絲(si)酸(suan) 96T

三、培養(yang)註意(yi)事項 

1. 收(shou)到細胞後(hou)首先觀(guan)察細胞瓶是否(fou)完(wan)好(hao)，培(pei)養(yang)液(ye)是否(fou)有漏液(ye)、渾濁等(deng)現象，若(ruo)有上(shang)述現象 發(fa)生請(qing)及(ji)時(shi)和我(wo)們(men)聯系。

2. 仔(zai)細閱(yue)讀(du)細胞說(shuo)明(ming)書，了(le)解(jie)細胞相關信息，如(ru)細胞形態(tai)、所用(yong)培養(yang)基(ji)、血清比(bi)例、所需 細胞因(yin)子等(deng)，確(que)保(bao)細胞培(pei)養(yang)條(tiao)件壹(yi)致，若(ruo)由於(yu)培(pei)養(yang)條(tiao)件不壹致而(er)導(dao)致細胞出(chu)現問題(ti)，責(ze)任(ren)由(you) 客戶自行(xing)承擔(dan)。

3. 用(yong) 75%酒(jiu)精(jing)擦拭細胞瓶表(biao)面(mian)，顯微(wei)鏡下觀(guan)察細胞狀態(tai)。因運(yun)輸(shu)問題(ti)，部(bu)分(fen)細胞由(you)於(yu)溫(wen)度(du) 變化及劇(ju)烈(lie)碰亡(wang)破(po)碎(sui)形成(cheng)碎(sui)片，是(shi)正常現象。觀(guan)察好(hao)細胞狀態(tai)後(hou)，75%酒(jiu)精(jing)消毒(du)瓶壁將(jiang) T25 瓶置於(yu) 37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)放置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁(bi)細胞可(ke)以消化，懸(xuan)浮細胞直(zhi)接混(hun)勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，棄(qi)上(shang) 清(qing)。加(jia) 5 mL PBS 重懸(xuan)細胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，用(yong)新鮮的培養(yang)基(ji)重懸(xuan) 細胞，並(bing)接種(zhong)到新的培養(yang)瓶或(huo)培養(yang)皿(min)中，置於(yu)培(pei)養(yang)箱(xiang)中進(jin)行(xing)培養(yang)。

5. 請(qing)客戶用相同條件的培養(yang)基(ji)用於(yu)細胞培(pei)養(yang)。

6. 建(jian)議客戶收到細胞後(hou)前 3 天(tian)各拍(pai)幾張(zhang)細胞照(zhao)片，記(ji)錄(lu)細胞狀態(tai)，便於(yu)和(he)我(wo)司(si)技術部(bu)溝(gou)通(tong) 交流。由(you)於(yu)運(yun)輸(shu)的原因(yin)，個別(bie)敏感細胞會出現不穩定的情況，請(qing)及(ji)時(shi)和我(wo)們(men)聯系，告知(zhi)細胞 的具(ju)體情況，以(yi)便(bian)我(wo)們(men)的技術人(ren)員(yuan)跟蹤(zong)回(hui)訪(fang)直(zhi)至問題(ti)解(jie)決(jue)。

7. 該(gai)細胞僅供科(ke)研(yan)使用(yong)。

8. 備(bei)註：運(yun)輸(shu)用(yong)的培養(yang)基(ji) (灌(guan)液培(pei)養(yang)基(ji)) 不能再(zai)用來(lai)培養(yang)細胞，請(qing)換用按(an)照(zhao)說(shuo)明(ming)書細胞培(pei) 養(yang)條(tiao)件新配制的培養(yang)基(ji)來(lai)培養(yang)細胞。     收(shou)到細胞後(hou)第(di)壹次(ci)傳(chuan)代(dai)建議 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳(chuan)代(dai)就是(shi) 1 個 T25 瓶傳(chuan) 2 個 T25 瓶或(huo)者 2 個 6cm 皿。不是 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個10cm 皿。