Caco-2人(ren)結(jie)腸腺(xian)癌(ai)細(xi)胞

公司產(chan)品僅(jin)供科研(yan)研(yan)究(jiu)使用、不(bu)得(de)用於臨(lin)床(chuang)診(zhen)斷！

1、細(xi)胞傳(chuan)代(dai)：

1）細(xi)胞生(sheng)長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培(pei)養瓶的 80%面積(ji)時，棄(qi) 25cm2培(pei)養瓶中(zhong)的培養液，用 PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞壹次；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化(hua)液約(yue) 1ml 至培養瓶中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察(cha)，待細(xi)胞回(hui)縮變圓(yuan)後(hou)加入 5ml 培養

液終止消(xiao)化(hua)，再(zai)輕輕(qing)吹打(da)細(xi)胞使(shi)之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然(ran)後(hou)將懸(xuan)液(ye)轉移(yi)至 15ml 離(li)心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄(qi)上(shang)清，沈(chen)澱細(xi)胞用 1-2ml 培(pei)養基(ji)重懸，然(ran)後(hou)按(an) 1:2 比例(li)進(jin)行(xing)分(fen)瓶傳(chuan)代(dai)，最(zui)後(hou)放(fang)入 37℃，5%CO2細(xi)胞

培(pei)養箱(xiang)中(zhong)培養；

2、細(xi)胞凍存(cun)：

1）細(xi)胞生(sheng)長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培(pei)養瓶的 80%面積(ji)時，棄(qi) 25cm2培(pei)養瓶中(zhong)的培養液，用 PBS 清(qing)洗(xi)細(xi)胞壹次；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化(hua)液約(yue) 1ml 至培養瓶中(zhong)，倒(dao)置(zhi)顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察(cha)，待細(xi)胞回(hui)縮變圓(yuan)後(hou)加入培養液終

止消(xiao)化(hua)，輕輕(qing)吹打(da)細(xi)胞使(shi)之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然(ran)後(hou)將懸(xuan)液(ye)轉移(yi)至 15ml 離(li)心(xin)管中(zhong)，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用適(shi)量的凍存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞，並放(fang)置(zhi)於凍存(cun)管中(zhong)；

4）先將細(xi)胞凍存(cun)管放(fang)置(zhi)於-20℃ 1.5h，然(ran)後(hou)將其(qi)移(yi)入-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後(hou)轉(zhuan)入液氮(dan)中(zhong)進行(xing)長(chang)期(qi)保(bao)存(cun)。使用程(cheng)序

降溫盒可直(zhi)接放(fang)入-80℃。

二(er)、細(xi)胞培(pei)養操(cao)作(zuo)

1) 復(fu)蘇(su)細(xi)胞：以(yi)下細(xi)胞培(pei)養凍存(cun)處理僅(jin)供參考(kao)，具體操(cao)作(zuo)步驟(zhou)以(yi)隨(sui)貨產(chan)品說(shuo)明書(shu)為(wei)主。將含(han)有(you)1 mL細(xi)胞懸(xuan)液的凍存(cun)管在 37℃水(shui)浴中(zhong)迅速搖晃解(jie)凍，加4 mL培(pei)養基(ji)混(hun)合均勻(yun)。在(zai)1000 rpm條件下(xia)離(li)心(xin)3 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清液(ye)，加1-2 mL培(pei)養基(ji)後(hou)吹(chui)勻(yun)。然(ran)後(hou)將所有(you)細(xi)胞懸(xuan)液加入含適(shi)量培養基(ji)的培養瓶中(zhong)培養過(guo)夜(ye)（或將細(xi)胞懸(xuan)液加入10 cm皿(min)中(zhong)，加入約8 mL培(pei)養基(ji)，培養過(guo)夜(ye)）。第(di)二(er)天換(huan)液並檢查(zha)細(xi)胞密(mi)度。

2) 細(xi)胞傳(chuan)代(dai)：如(ru)果細(xi)胞密(mi)度達 80%-90%，即(ji)可進行(xing)傳(chuan)代(dai)培養。

a、棄(qi)去(qu)培養上(shang)清，用不(bu)含(han)鈣、鎂(mei)離(li)子(zi)的PBS潤(run)洗(xi)細(xi)胞1-2次(ci)。

b、加1 mL消(xiao)化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(pei)養瓶中(zhong)，使消(xiao)化(hua)液浸(jin)潤(run)所有(you)細(xi)胞，將培(pei)養瓶置(zhi)於37℃培(pei)養箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化(hua)1-2 min（視細(xi)胞情(qing)況而定），然(ran)後(hou)在(zai)顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察(cha)細(xi)胞消(xiao)化(hua)情況(kuang)，若(ruo)細(xi)胞大(da)部分(fen)變圓(yuan)並脫(tuo)落(luo)，迅速拿(na)回操(cao)作(zuo)臺(tai)，輕(qing)敲(qiao)幾下(xia)培養瓶後(hou)加2-3ml培(pei)養基(ji)終止消(xiao)化(hua)。輕輕(qing)打(da)勻(yun)後(hou)裝入無(wu)菌離(li)心(xin)管中(zhong)，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清液(ye)，補加1-2 mL培(pei)養液後(hou)吹(chui)勻(yun)。

c、將細(xi)胞懸(xuan)液按(an)1:2比例(li)分(fen)到新的含8 mL培養基(ji)的新皿(min)中(zhong)或者瓶中(zhong)，置於培(pei)養箱(xiang)中(zhong)培養。 3) 細(xi)胞凍存(cun)：待細(xi)胞生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態良好(hao)時，可進行(xing)細(xi)胞凍存(cun)。下面(mian) T25 瓶(ping)為(wei)例(li)；a、收(shou)集(ji)細(xi)胞及細(xi)胞培(pei)養液，裝入無(wu)菌離(li)心(xin)管中(zhong)，1000 rpm條件下(xia)離(li)心(xin)4 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清液(ye)，用PBS清(qing)洗(xi)壹遍，棄(qi)盡(jin)PBS，進行細(xi)胞計數。

b、根(gen)據(ju)細(xi)胞數量加入無(wu)血(xue)清細(xi)胞凍存(cun)液，使(shi)細(xi)胞密(mi)度5×106~1×107/mL，輕輕(qing)混(hun)勻，每(mei)支(zhi)凍存(cun)管凍存(cun)1mL細(xi)胞懸(xuan)液，註(zhu)意凍存(cun)管做好(hao)標識。將凍存(cun)管放(fang)入-80℃冰箱(xiang)，24 h後(hou)轉(zhuan)入液氮(dan)灌(guan)儲存(cun)。記錄(lu)凍存(cun)管位(wei)置(zhi)以便下次(ci)拿(na)取(qu)。

三(san)、培(pei)養註(zhu)意事(shi)項(xiang) 

1. 收(shou)到細(xi)胞後(hou)首先(xian)觀察(cha)細(xi)胞瓶(ping)是否完(wan)好(hao)，培養液是(shi)否(fou)有(you)漏(lou)液(ye)、渾濁(zhuo)等現(xian)象，若(ruo)有(you)上(shang)述現(xian)象 發(fa)生(sheng)請(qing)及時和我們聯(lian)系。

2. 仔(zai)細(xi)閱讀(du)細(xi)胞說(shuo)明書(shu)，了解(jie)細(xi)胞相(xiang)關(guan)信(xin)息(xi)，如(ru)細(xi)胞形(xing)態、所用培(pei)養基(ji)、血(xue)清比例(li)、所需 細(xi)胞因子(zi)等，確保細(xi)胞培(pei)養條件壹致，若(ruo)由於培(pei)養條件不(bu)壹致而導致細(xi)胞出(chu)現(xian)問題，責(ze)任由(you) 客(ke)戶自行(xing)承擔。

3. 用 75%酒精擦拭細(xi)胞瓶(ping)表面，顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察(cha)細(xi)胞狀(zhuang)態。因運(yun)輸問題(ti)，部(bu)分(fen)細(xi)胞由(you)於溫度 變化(hua)及劇烈碰(peng)亡破碎形(xing)成(cheng)碎片(pian)，是(shi)正常現(xian)象。觀察(cha)好(hao)細(xi)胞狀(zhuang)態後(hou)，75%酒精消(xiao)毒瓶壁(bi)將 T25 瓶(ping)置(zhi)於 37℃培(pei)養箱(xiang)放(fang)置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁細(xi)胞可以消(xiao)化(hua)，懸浮細(xi)胞直(zhi)接混(hun)勻收(shou)集細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄(qi)上(shang) 清。加 5 mL PBS 重(zhong)懸細(xi)胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用新(xin)鮮(xian)的培養基(ji)重懸 細(xi)胞，並接種(zhong)到(dao)新的培養瓶或培養皿(min)中(zhong)，置於培(pei)養箱(xiang)中(zhong)進行(xing)培(pei)養。

5. 請(qing)客(ke)戶用相(xiang)同(tong)條件的培養基(ji)用於細(xi)胞培(pei)養。

6. 建(jian)議(yi)客(ke)戶收(shou)到細(xi)胞後(hou)前 3 天各拍幾張細(xi)胞照片，記錄(lu)細(xi)胞狀(zhuang)態，便(bian)於和(he)我司技(ji)術部溝通 交流。由(you)於運(yun)輸的原因，個(ge)別敏(min)感(gan)細(xi)胞會(hui)出(chu)現(xian)不穩定的情況，請(qing)及時和我們聯(lian)系，告(gao)知細(xi)胞 的具體情(qing)況，以便(bian)我們的技術人(ren)員(yuan)跟蹤(zong)回訪(fang)直(zhi)至問題(ti)解(jie)決(jue)。

7. 該細(xi)胞僅(jin)供科研(yan)使(shi)用。

8. 備(bei)註(zhu)：運(yun)輸用的培養基(ji) (灌液培(pei)養基(ji)) 不能再(zai)用來培(pei)養細(xi)胞，請(qing)換(huan)用按(an)照說明(ming)書(shu)細(xi)胞培(pei) 養條件新(xin)配制的培養基(ji)來培(pei)養細(xi)胞。     收(shou)到細(xi)胞後(hou)第(di)壹次傳(chuan)代(dai)建(jian)議(yi) 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註(zhu)意：  1:2 傳(chuan)代(dai)就(jiu)是 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶或者 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不是 1 個(ge) T25 瓶傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿(min)。

公司正在出(chu)售(shou)的產品：

lamin A + C： 核(he)纖層蛋(dan)白(bai)A/C抗(kang)體 小鼠(shu)成(cheng)肌(ji)細(xi)胞;C2C12

EB-3(人(ren)Butt淋(lin)巴瘤細(xi)胞) 5×106cells/瓶(ping)×2 人(ren)脊柱間(jian)充質幹細(xi)胞HVMSC 大(da)鼠(shu)粘蛋(dan)白(bai)/粘液(ye)素(su)5AC(MUC5AC)ELISA試(shi)劑盒 Insulin Protein/RBITC 羅丹(dan)明標(biao)記豬胰(yi)島素(su)蛋(dan)白(bai) 0.5mg

LRIG2： LRIG2抗(kang)體 CM-M065小鼠(shu)腎上(shang)皮細(xi)胞培(pei)養基(ji)100mL

IGFBP5 Protein Canine 重(zhong)組(zu)狗(gou) IGFBP5 / IGFBP-5 蛋(dan)白(bai) (Fc 標簽(qian)) 大(da)鼠(shu)粘蛋(dan)白(bai)/粘液(ye)素(su)1(MUC1)ELISA試(shi)劑盒 KLH/RBITC 羅丹(dan)明標(biao)記血(xue)藍蛋(dan)白(bai) 0.3ml

LEF-1： 淋(lin)巴(ba)增強因子(zi)-1抗(kang)體 TPP1 Others Human 人(ren) TPP1 / CLN2 桿(gan)狀(zhuang)病(bing)毒-昆(kun)蟲細(xi)胞裂解(jie)液(ye) (陽性對(dui)照)

轉(zhuan)PYTL基(ji)因小鼠(shu)支(zhi)持細(xi)胞;15P-1 人(ren)抗(kang)軟(ruan)骨(gu)抗(kang)體(ai-cailage-Ab)ELISA 試(shi)劑盒 Isulin 胰(yi)島素(su)(抗(kang)原) 0.5mg

HSD17B4： 羥基(ji)類(lei)固(gu)醇(chun)(17β)脫(tuo)氫(qing)酶4/17β-HSD4抗(kang)體 人(ren)胚(pei)肺(fei)成(cheng)纖維細(xi)胞;MRC-5

FRhK-4(恒(heng)河(he)猴(hou)胚(pei)腎細(xi)胞) 5×106cells/瓶(ping)×2 CL-0307SW1116(人(ren)結(jie)腸腺(xian)癌(ai)細(xi)胞)5×106cells/瓶(ping)×2 大耳(er)山(shan)羊腎(shen)細(xi)胞;LDG-2 人(ren)抗(kang)人(ren)絨(rong)毛(mao)膜(mo)抗(kang)體(AhCGAb)ELISA 試(shi)劑盒 APC(Activated protein C) APC活(huo)化(hua)蛋(dan)白(bai)C抗(kang)原 0.5mg

HBZ： 血(xue)紅蛋(dan)白(bai)ζ鏈/Hemoglobin ζ 抗(kang)體 人(ren)葡(pu)萄膜(mo)黑(hei)色素(su)細(xi)胞;UM

RKO-E6(人(ren)結(jie)腸癌(ai)轉(zhuan)基(ji)因細(xi)胞) 5×106cells/瓶(ping)×2 人(ren)抗(kang)人(ren)類(lei)免(mian)疫(yi)缺陷(xian)病(bing)毒抗(kang)體(HIV)ELISA 試(shi)劑盒 Apelin 脂(zhi)肪炎(yan)癥(zheng)因子(zi)Apelin抗(kang)原 0.5mg

Caco-2人(ren)結(jie)腸腺(xian)癌(ai)細(xi)胞人(ren)胚(pei)腎細(xi)胞;2V6.11 大(da)鼠(shu)基(ji)質細(xi)胞衍(yan)生(sheng)因子(zi)1α(SDF-1α)ELISA試(shi)劑盒 IgA  大(da)鼠(shu)免(mian)疫(yi)球蛋(dan)白(bai)A 96T

Proinsulin： 胰(yi)島素(su)原抗(kang)體 犬(quan)腎細(xi)胞;MDCK(NBL-2)

大(da)鼠(shu)腦膜(mo)細(xi)胞(RMC)(5×105) SP2/0, 小鼠(shu)骨(gu)髓(sui)瘤(liu)細(xi)胞 Mouse 大(da)鼠(shu)基(ji)質細(xi)胞衍(yan)生(sheng)因子(zi)1a(SDF-1a/CXCL12)ELISA試(shi)劑盒 ASD(Mouse Androstenedione) 小鼠(shu)雄(xiong) 96T

Podoplanin Protein： 平(ping)足(zu)蛋(dan)白(bai)gp36/淋巴(ba)管內皮細(xi)胞蛋(dan)白(bai)抗(kang)體 人(ren)結(jie)腸平(ping)滑(hua)肌(ji)細(xi)胞cDNAHCSMC cDNA

TNF Protein Canine 重(zhong)組(zu)狗(gou) TNF-alpha / TNFA / TNFSF1A 蛋(dan)白(bai) 大鼠(shu)基(ji)質細(xi)胞衍(yan)生(sheng)因子(zi)1a(SDF-1a/CXCL12)ELISA 試(shi)劑盒 IgE  大(da)鼠(shu)免(mian)疫(yi)球蛋(dan)白(bai)E 96T