HUCCT1人(ren)膽管癌細(xi)胞(bao)

公(gong)司產品(pin)僅(jin)供科(ke)研(yan)研(yan)究使用、不(bu)得用於臨(lin)床(chuang)診(zhen)斷(duan)！

1、細胞(bao)傳(chuan)代(dai)：

1）細(xi)胞生長(chang)至(zhi)覆蓋(gai)培養(yang)瓶的 80%面(mian)積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的培(pei)養(yang)液，用 PBS 清洗(xi)細胞壹次(ci)；

2）添加 0.25%消化(hua)液約(yue) 1ml 至(zhi)培養(yang)瓶中，倒置顯微(wei)鏡(jing)下觀察，待(dai)細(xi)胞(bao)回(hui)縮變(bian)圓後(hou)加入 5ml 培(pei)養(yang)

液終止(zhi)消化(hua)，再輕輕吹(chui)打(da)細胞(bao)使之脫(tuo)落，然後(hou)將懸液轉移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄(qi)上(shang)清，沈(chen)澱(dian)細(xi)胞用 1-2ml 培(pei)養(yang)基重懸，然後(hou)按 1:2 比例(li)進(jin)行(xing)分瓶(ping)傳代(dai)，最(zui)後放入(ru) 37℃，5%CO2細胞

培養(yang)箱(xiang)中培(pei)養(yang)；

壹、商(shang)品(pin)介(jie)紹：

2、細(xi)胞(bao)凍存(cun)：

1）細(xi)胞生長(chang)至(zhi)覆蓋(gai)培養(yang)瓶的 80%面(mian)積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培(pei)養(yang)瓶中的培(pei)養(yang)液，用 PBS 清洗(xi)細胞壹次(ci)；

2）添加 0.25%消化(hua)液約(yue) 1ml 至(zhi)培養(yang)瓶中，倒置顯微(wei)鏡(jing)下觀察，待(dai)細(xi)胞(bao)回(hui)縮變(bian)圓後(hou)加入培(pei)養(yang)液終

止(zhi)消化(hua)，輕輕吹(chui)打(da)細胞(bao)使之脫(tuo)落，然後(hou)將懸液轉移(yi)至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用(yong)適(shi)量(liang)的(de)凍存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸(xuan)細胞(bao)，並放置於凍存(cun)管中；

4）先(xian)將(jiang)細(xi)胞(bao)凍存(cun)管放置(zhi)於-20℃ 1.5h，然後(hou)將其移(yi)入(ru)-80℃過夜(ye)，24h 後轉(zhuan)入液氮中(zhong)進(jin)行(xing)長期(qi)保(bao)存(cun)。使用程(cheng)序

降溫盒可(ke)直接(jie)放入-80℃。

二(er)、細(xi)胞培(pei)養(yang)操(cao)作

1) 復蘇細(xi)胞：以(yi)下細胞(bao)培(pei)養(yang)凍存(cun)處(chu)理僅(jin)供參(can)考，具體(ti)操(cao)作步驟以(yi)隨(sui)貨產品(pin)說(shuo)明(ming)書為(wei)主。將含有(you)1 mL細胞(bao)懸(xuan)液的凍存(cun)管在 37℃水(shui)浴中迅(xun)速(su)搖(yao)晃解(jie)凍，加4 mL培養(yang)基混合均勻。在(zai)1000 rpm條件(jian)下離(li)心(xin)3 min，棄(qi)去(qu)上清液，加1-2 mL培養(yang)基後吹勻(yun)。然後(hou)將所有(you)細胞(bao)懸(xuan)液加入含適(shi)量(liang)培(pei)養(yang)基的培養(yang)瓶中培養(yang)過夜（或(huo)將細(xi)胞懸液加入10 cm皿(min)中(zhong)，加入約(yue)8 mL培(pei)養(yang)基，培養(yang)過夜）。第(di)二(er)天(tian)換液並檢查(zha)細胞密(mi)度。

2) 細胞傳(chuan)代(dai)：如(ru)果細胞(bao)密(mi)度達 80%-90%，即可(ke)進(jin)行(xing)傳代(dai)培(pei)養(yang)。

a、棄(qi)去(qu)培養(yang)上清，用(yong)不(bu)含鈣、鎂離(li)子的(de)PBS潤洗(xi)細胞1-2次(ci)。

b、加1 mL消化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於培(pei)養(yang)瓶中，使消化(hua)液浸(jin)潤所有(you)細胞(bao)，將(jiang)培(pei)養(yang)瓶置於37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)中消(xiao)化(hua)1-2 min（視細(xi)胞情(qing)況(kuang)而(er)定(ding)），然後(hou)在顯微(wei)鏡(jing)下觀察細胞(bao)消(xiao)化情況(kuang)，若(ruo)細胞(bao)大(da)部(bu)分(fen)變(bian)圓並(bing)脫(tuo)落，迅(xun)速(su)拿(na)回(hui)操(cao)作臺(tai)，輕敲(qiao)幾(ji)下培養(yang)瓶後加2-3ml培養(yang)基終止(zhi)消化(hua)。輕輕打(da)勻後(hou)裝入(ru)無菌(jun)離(li)心(xin)管中，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄(qi)去(qu)上清液，補加1-2 mL培養(yang)液後吹(chui)勻。

c、將(jiang)細胞懸液按1:2比例(li)分(fen)到新的(de)含8 mL培養(yang)基的新皿(min)中(zhong)或(huo)者瓶(ping)中(zhong)，置於培(pei)養(yang)箱(xiang)中培(pei)養(yang)。 3) 細胞凍存(cun)：待(dai)細(xi)胞(bao)生長(chang)狀(zhuang)態(tai)良(liang)好(hao)時(shi)，可(ke)進(jin)行(xing)細胞(bao)凍存(cun)。下面(mian) T25 瓶為(wei)例(li)；a、收(shou)集細胞及細(xi)胞(bao)培養(yang)液，裝入(ru)無菌(jun)離(li)心(xin)管中，1000 rpm條件(jian)下離(li)心(xin)4 min，棄(qi)去(qu)上清液，用PBS清洗(xi)壹遍(bian)，棄(qi)盡(jin)PBS，進(jin)行(xing)細胞(bao)計(ji)數(shu)。

b、根據細胞(bao)數(shu)量(liang)加入無血(xue)清細(xi)胞(bao)凍存(cun)液，使細胞(bao)密(mi)度5×106~1×107/mL，輕輕混(hun)勻，每支(zhi)凍存(cun)管凍存(cun)1mL細(xi)胞懸液，註意凍存(cun)管做(zuo)好(hao)標識。將(jiang)凍存(cun)管放入(ru)-80℃冰(bing)箱(xiang)，24 h後轉(zhuan)入(ru)液氮灌(guan)儲(chu)存(cun)。記錄(lu)凍存(cun)管位置(zhi)以(yi)便(bian)下次拿(na)取。

公(gong)司正(zheng)在出售(shou)的(de)產品(pin)：

MMP13： 基質金(jin)屬(shu)蛋(dan)白(bai)酶13抗體(ti) 人(ren)內根殼細胞總(zong)RNAHHIRSC NA

NIH/3T3小(xiao)鼠(shu)胚胎細(xi)胞(bao) NIH/3T3 mouse embryo cells DMEM+10% FBS 大鼠(shu)纖(xian)溶(rong)抑制因(yin)子(TAFI)ELISA試(shi)劑盒 BDNF(Mouse Brain derived neurotrophic facor)  小(xiao)鼠(shu)腦源性(xing)神經(jing)營養(yang)因(yin)子 96T

MMP-14： 基質金(jin)屬(shu)蛋(dan)白(bai)酶-14抗體(ti) PVRL3 Others Human 人(ren) PVRL3 / CD113 人(ren)細胞裂解(jie)液 (陽性(xing)對(dui)照(zhao))

CL-0395NCI-H2227(人(ren)小(xiao)細(xi)胞肺(fei)癌(ai)細(xi)胞(bao))5×106cells/瓶×2 大鼠纖(xian)溶(rong)酶原(yuan)激(ji)活(huo)物(wu)抑制因(yin)子2(PAI2)ELISA試(shi)劑盒 GNRHR-Ab  大(da)鼠釋放激(ji)素(su)受體(ti)抗體(ti) 小(xiao)鼠(shu)前胃癌(ai)低(di)轉移(yi)細(xi)胞(bao)(綠色熒光蛋(dan)白(bai)標記);MFC-B5-GFP

NCI-H2170(人(ren)肺(fei)鱗(lin)癌(ai)細(xi)胞(bao)) 5×106cells/瓶×2 HT-29(結腸(chang)癌(ai)細(xi)胞(bao)) 大(da)鼠纖(xian)溶(rong)酶原(yuan)激(ji)活(huo)物(wu)抑制因(yin)子1(PAI-1)ELISA試(shi)劑盒 AIF(Mouse apoptosis inducing factor)  小(xiao)鼠(shu)雕亡誘(you)導因(yin)子 96T

PDGFRB Others Rat 大鼠 PDGFRB / PDGFR-1 人(ren)細胞裂解(jie)液 (陽性(xing)對(dui)照(zhao)) 人(ren)第(di)八(ba)因(yin)子相(xiang)關抗原(yuan)(FⅧAg)ELISA 試劑盒 GnRHR peptide 釋放激(ji)素(su)受體(ti)抗原(yuan) 0.5mg

HIV2 gp36： 人(ren)類免(mian)疫缺(que)陷(xian)病(bing)毒(du)2型(xing)/2型(xing)艾滋(zi)病(bing)病(bing)毒(du)gp36抗體(ti) CM-M097小(xiao)鼠(shu)皮下脂肪(fang)細(xi)胞(bao)培養(yang)基100mL

SMC-1細胞，人(ren)胸膜(mo)瘤細胞(bao) 鼠(shu)傷(shang)門(men)氏菌(jun)Ta98 大(da)鼠(shu)肝細胞(bao)瘤;H-4-II-E 人(ren)抵(di)抗素(su)(Resistin)ELISA 試劑盒(he) KiSS-1R/GPR54/GPCR54(KiSS-1 receptor/G-Protein Coupled Receptor 54) G蛋(dan)白(bai)偶(ou)聯受體(ti)54抗原(yuan) 0.5mg

HUNK： 激(ji)素(su)上調(tiao)神經(jing)相關(guan)激(ji)酶抗體(ti) BAMBI Others Human 人(ren) BAMBI / NMA 人(ren)細胞裂解(jie)液 (陽性(xing)對(dui)照(zhao))

中國倉(cang)鼠(shu)肺(fei)細(xi)胞(bao);CHL 人(ren)低(di)氧(yang)誘導因(yin)子1α(HIF-1α)ELISA 試(shi)劑盒 GRK2/BARK1 (G-protein coupled receptor kinase 2) G蛋(dan)白(bai)偶(ou)合(he)受體(ti)激(ji)酶2抗原(yuan) 0.5mg

HUCCT1人(ren)膽管癌細(xi)胞(bao)phospho-PP2A alpha (Tyr307)： 0酸化蛋(dan)酸酶2A(PP2Aα)抗體(ti) 恒(heng)河(he)猴(hou)腎細胞(bao);RM-2

LncaP, 人(ren)前列腺癌細胞 大(da)鼠(shu)多巴胺(DA)ELISA試劑盒 ICAM-1/CD54  大鼠(shu)細(xi)胞間粘(zhan)附分(fen)子1 96T

PLK5： 絲酸/蘇酸蛋(dan)白(bai)激(ji)酶5抗體(ti) IL1A Others Human 人(ren) IL-1 alpha / IL1A / IL1F1 人(ren)細胞裂解(jie)液 (陽性(xing)對(dui)照(zhao))

人(ren)胚腎細胞(SV40T基因(yin)修(xiu)飾);293T/17 大鼠多巴胺(DA)ELISA 試劑盒 SR(Human secretin receptor)  人(ren)促(cu)胰(yi)液素(su)/分泌(mi)素(su)受體(ti) 96T

PICK1： 蛋(dan)白(bai)激(ji)酶Cα相互(hu)作用蛋(dan)白(bai)1抗體(ti) 水(shui)牛皮(pi)膚(fu)成(cheng)纖(xian)維(wei)樣(yang)細胞;WB-S2

三、培養(yang)註意事(shi)項(xiang) 

1. 收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)首先觀察細胞(bao)瓶(ping)是(shi)否完好(hao)，培(pei)養(yang)液是(shi)否有(you)漏(lou)液、渾濁(zhuo)等現(xian)象，若(ruo)有(you)上述(shu)現(xian)象 發(fa)生請及時(shi)和(he)我們聯系。

2. 仔(zai)細閱(yue)讀細胞說(shuo)明(ming)書，了解(jie)細(xi)胞(bao)相(xiang)關信(xin)息(xi)，如(ru)細胞形(xing)態、所用(yong)培養(yang)基、血清比例(li)、所需 細胞因(yin)子等，確保(bao)細胞(bao)培養(yang)條件(jian)壹致(zhi)，若(ruo)由(you)於培(pei)養(yang)條件(jian)不(bu)壹致(zhi)而(er)導致(zhi)細(xi)胞(bao)出現(xian)問題，責(ze)任(ren)由(you) 客(ke)戶自行(xing)承擔。

3. 用 75%酒(jiu)精(jing)擦(ca)拭細(xi)胞瓶表(biao)面(mian)，顯微(wei)鏡(jing)下觀察細胞(bao)狀(zhuang)態。因(yin)運(yun)輸問題，部(bu)分(fen)細胞(bao)由(you)於溫(wen)度(du) 變(bian)化及劇(ju)烈(lie)碰(peng)亡破(po)碎形(xing)成(cheng)碎片，是(shi)正(zheng)常現(xian)象。觀察好(hao)細(xi)胞(bao)狀態後，75%酒(jiu)精(jing)消毒(du)瓶壁將(jiang) T25 瓶置於 37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)放置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁細(xi)胞可(ke)以(yi)消(xiao)化(hua)，懸浮(fu)細胞(bao)直接(jie)混勻收(shou)集細胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄(qi)上(shang) 清。加 5 mL PBS 重懸(xuan)細(xi)胞(bao)，再 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用(yong)新鮮(xian)的(de)培養(yang)基重懸 細(xi)胞(bao)，並接(jie)種到新的(de)培(pei)養(yang)瓶或(huo)培養(yang)皿中，置於培(pei)養(yang)箱(xiang)中進(jin)行(xing)培養(yang)。

5. 請客(ke)戶用相同條件(jian)的培養(yang)基用於細(xi)胞(bao)培養(yang)。

6. 建議客(ke)戶收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)前 3 天(tian)各拍幾(ji)張細(xi)胞照片，記錄(lu)細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)，便(bian)於和(he)我司技(ji)術部(bu)溝(gou)通(tong) 交(jiao)流。由(you)於運(yun)輸的(de)原(yuan)因(yin)，個別(bie)敏感(gan)細(xi)胞(bao)會(hui)出現(xian)不(bu)穩(wen)定(ding)的(de)情(qing)況(kuang)，請及時(shi)和(he)我們聯系，告(gao)知(zhi)細(xi)胞 的具體(ti)情(qing)況(kuang)，以(yi)便(bian)我們的(de)技(ji)術人(ren)員跟蹤回(hui)訪直至(zhi)問題解(jie)決(jue)。

7. 該細(xi)胞僅(jin)供科(ke)研(yan)使用。

8. 備(bei)註：運(yun)輸用(yong)的培(pei)養(yang)基 (灌液培養(yang)基) 不(bu)能再用(yong)來培(pei)養(yang)細胞，請換用按(an)照(zhao)說明(ming)書細(xi)胞(bao)培(pei) 養(yang)條件(jian)新配(pei)制(zhi)的培養(yang)基來培養(yang)細胞。     收(shou)到(dao)細(xi)胞(bao)後(hou)第(di)壹次(ci)傳代(dai)建(jian)議 1：2 傳代(dai) 。

9. 註意：  1:2 傳(chuan)代(dai)就是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳 2 個 T25 瓶(ping)或(huo)者 2 個 6cm 皿(min)。不(bu)是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳 2 個10cm 皿(min)。