COLO679細(xi)胞

公(gong)司產(chan)品僅供科研研究使(shi)用、不得(de)用於(yu)臨(lin)床診(zhen)斷(duan)！

1、細(xi)胞傳代：

1）細(xi)胞生(sheng)長至(zhi)覆蓋培養(yang)瓶的 80%面積(ji)時，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶中(zhong)的培(pei)養(yang)液，用(yong) PBS 清洗細(xi)胞壹(yi)次(ci)；

2）添加 0.25%消(xiao)化(hua)液約(yue) 1ml 至(zhi)培養(yang)瓶中(zhong)，倒(dao)置顯微鏡下觀(guan)察，待(dai)細(xi)胞回(hui)縮變(bian)圓(yuan)後加入(ru) 5ml 培養(yang)

液終止消(xiao)化(hua)，再(zai)輕(qing)輕吹(chui)打(da)細(xi)胞使(shi)之脫落，然後(hou)將懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離心管中(zhong)，1000rpm 離心 5min；

3）棄(qi)上(shang)清，沈(chen)澱(dian)細(xi)胞用(yong) 1-2ml 培養(yang)基重(zhong)懸(xuan)，然(ran)後按 1:2 比(bi)例(li)進(jin)行(xing)分瓶傳代，最後(hou)放入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞

培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)培(pei)養(yang)；

壹、商品(pin)介(jie)紹：

2、細(xi)胞凍(dong)存：

1）細(xi)胞生(sheng)長至(zhi)覆蓋培養(yang)瓶的 80%面積(ji)時，棄 25cm2培(pei)養(yang)瓶中(zhong)的培(pei)養(yang)液，用(yong) PBS 清洗細(xi)胞壹(yi)次(ci)；

2）添加 0.25%消(xiao)化(hua)液約(yue) 1ml 至(zhi)培養(yang)瓶中(zhong)，倒(dao)置顯微鏡下觀(guan)察，待(dai)細(xi)胞回(hui)縮變(bian)圓(yuan)後加入(ru)培養(yang)液終

止消(xiao)化(hua)，輕輕吹(chui)打(da)細(xi)胞使(shi)之脫落，然後(hou)將懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)至 15ml 離心管中(zhong)，1000rpm 離心 5min；

3）用(yong)適(shi)量的凍(dong)存液（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞，並(bing)放置(zhi)於(yu)凍(dong)存管中(zhong)；

4）先將細(xi)胞凍(dong)存管放置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後(hou)將其移入(ru)-80℃過(guo)夜，24h 後(hou)轉入(ru)液氮(dan)中(zhong)進(jin)行(xing)長期保存。使(shi)用(yong)程(cheng)序(xu)

降溫(wen)盒可(ke)直(zhi)接(jie)放入(ru)-80℃。

二、細(xi)胞培(pei)養(yang)操作(zuo)

1) 復(fu)蘇(su)細(xi)胞：以(yi)下細(xi)胞培(pei)養(yang)凍(dong)存處理僅(jin)供參(can)考，具體(ti)操作(zuo)步(bu)驟(zhou)以隨(sui)貨(huo)產(chan)品說明(ming)書(shu)為(wei)主。將含(han)有1 mL細(xi)胞懸(xuan)液的凍(dong)存管在 37℃水(shui)浴中(zhong)迅(xun)速(su)搖(yao)晃(huang)解凍(dong)，加4 mL培(pei)養(yang)基混(hun)合均(jun)勻(yun)。在1000 rpm條(tiao)件(jian)下離心3 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清液，加1-2 mL培(pei)養(yang)基後吹(chui)勻(yun)。然後(hou)將(jiang)所(suo)有細(xi)胞懸(xuan)液加入(ru)含(han)適量(liang)培養(yang)基的培(pei)養(yang)瓶中(zhong)培(pei)養(yang)過(guo)夜（或(huo)將(jiang)細(xi)胞懸(xuan)液加入(ru)10 cm皿中(zhong)，加入(ru)約(yue)8 mL培(pei)養(yang)基，培養(yang)過(guo)夜）。第(di)二天換(huan)液並(bing)檢查細(xi)胞密度(du)。

2) 細(xi)胞傳代：如果細(xi)胞密度(du)達 80%-90%，即(ji)可(ke)進(jin)行(xing)傳代培養(yang)。

a、棄去(qu)培(pei)養(yang)上清，用不含(han)鈣、鎂離子的PBS潤(run)洗細(xi)胞1-2次(ci)。

b、加1 mL消(xiao)化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養(yang)瓶中(zhong)，使(shi)消(xiao)化(hua)液浸潤(run)所有細(xi)胞，將(jiang)培養(yang)瓶置於(yu)37℃培養(yang)箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化(hua)1-2 min（視細(xi)胞情況而定(ding)），然後(hou)在顯微(wei)鏡下(xia)觀(guan)察細(xi)胞消(xiao)化(hua)情況，若細(xi)胞大(da)部分變(bian)圓(yuan)並脫落，迅速(su)拿(na)回(hui)操作(zuo)臺(tai)，輕(qing)敲幾下(xia)培(pei)養(yang)瓶後加2-3ml培(pei)養(yang)基終止消(xiao)化(hua)。輕輕打(da)勻(yun)後裝(zhuang)入(ru)無菌離心管中(zhong)，1000 rpm離心5 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清液，補(bu)加1-2 mL培(pei)養(yang)液後(hou)吹(chui)勻(yun)。

c、將細(xi)胞懸(xuan)液按1:2比(bi)例(li)分到新(xin)的含(han)8 mL培養(yang)基的新(xin)皿中(zhong)或(huo)者(zhe)瓶中(zhong)，置(zhi)於(yu)培養(yang)箱(xiang)中(zhong)培(pei)養(yang)。 3) 細(xi)胞凍(dong)存：待(dai)細(xi)胞生(sheng)長狀態良好時(shi)，可進(jin)行(xing)細(xi)胞凍(dong)存。下(xia)面 T25 瓶(ping)為例(li)；a、收集(ji)細(xi)胞及(ji)細(xi)胞培(pei)養(yang)液，裝(zhuang)入(ru)無菌離心管中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件(jian)下離心4 min，棄(qi)去(qu)上(shang)清液，用(yong)PBS清洗壹遍(bian)，棄盡PBS，進(jin)行(xing)細(xi)胞計(ji)數(shu)。

b、根據細(xi)胞數(shu)量加入(ru)無血(xue)清細(xi)胞凍(dong)存液，使(shi)細(xi)胞密度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕混(hun)勻(yun)，每支(zhi)凍(dong)存管凍(dong)存1mL細(xi)胞懸(xuan)液，註(zhu)意(yi)凍(dong)存管做好(hao)標(biao)識。將凍(dong)存管放入(ru)-80℃冰箱(xiang)，24 h後轉入(ru)液氮(dan)灌(guan)儲(chu)存。記錄(lu)凍(dong)存管位(wei)置(zhi)以(yi)便(bian)下(xia)次(ci)拿取(qu)。

公司正(zheng)在出售(shou)的產(chan)品：

細(xi)胞過(guo)氧化(hua)氫（HYDROGEN PEROXIDE）活(huo)性

[α32P]dCTP聚合酶(mei)標記法(fa)酶(mei)切產(chan)物處理試(shi)劑盒(he)

通(tong)用型(xing)HHV6-A（HUMAN HERPESVIRUS 6-A）病毒(du)定(ding)性檢測(ce)試(shi)劑盒(he)

載(zai)玻(bo)片(pian)細(xi)胞TNF BETA蛋白表達NBT顯色光(guang)學(xue)顯(xian)微(wei)鏡(jing)檢測(ce)試(shi)劑盒(he)

肉(rou)類(lei)氮(dan)含(han)量克(ke)爾道(dao)（Kjeldahl）法(fa)定(ding)量檢測(ce)試(shi)劑盒(he)

冰凍(dong)切片(pian)半(ban)-9（CASPASE-9）活(huo)性原(yuan)位(wei)熒(ying)光染(ran)色檢測(ce)試(shi)劑盒(he)

細(xi)胞ROS激(ji)酶(mei)活(huo)性定(ding)量檢測(ce)試(shi)劑盒(he)（A/B/C）

石蠟(la)切(qie)片(pian)細(xi)胞細(xi)胞有絲(si)分裂熒(ying)光顯(xian)微鏡(jing)檢測(ce)試(shi)劑盒(he)

石蠟切片(pian)蘇(su)木(mu)素(su)染(ran)色試(shi)劑盒(he)

活(huo)性比(bi)色法(fa)定(ding)量檢測(ce)試(shi)劑盒(he)

石蠟切片(pian)銅(tong)熒(ying)光（CSI）染(ran)色試(shi)劑盒(he)

水(shui)中(zhong)隱孢(bao)子蟲（Cryptosporidium）基(ji)因定(ding)性檢測(ce)試(shi)劑盒(he)

石蠟切片(pian)組(zu)織(zhi)RyR受(shou)體蛋白表達NBT顯色光(guang)學(xue)顯(xian)微(wei)鏡(jing)檢測(ce)試(shi)劑盒(he)

細(xi)胞基(ji)質金(jin)屬(shu)（MMP）總(zong)活(huo)性熒(ying)光定(ding)量檢測(ce)試(shi)劑盒(he)

動(dong)物腦組織細(xi)胞分離培養(yang)試(shi)劑盒(he)

早期B淋(lin)巴細(xi)胞因子2抗體

鈣粘蛋白LKC抗體(ti)

驅動(dong)蛋白家族(zu)成員(yuan)22抗體(ti)

JOSD1蛋白抗體

細(xi)胞骨(gu)架相關(guan)蛋白1/微管蛋白折(zhe)疊輔(fu)助(zhu)因子B抗體

ZC3H15蛋白抗體

跨膜蛋白93抗體(ti)

COLO679細(xi)胞APC標記小鼠(shu)CD11c單克(ke)隆(long)抗體(ti)

鋅指蛋白785抗體

三、培(pei)養(yang)註(zhu)意(yi)事項 

1. 收(shou)到(dao)細(xi)胞後(hou)首先觀(guan)察細(xi)胞瓶(ping)是否(fou)完(wan)好(hao)，培(pei)養(yang)液是否(fou)有漏液、渾(hun)濁(zhuo)等(deng)現象，若有上述(shu)現象 發(fa)生(sheng)請(qing)及(ji)時(shi)和(he)我(wo)們(men)聯系。

2. 仔(zai)細(xi)閱(yue)讀細(xi)胞說明(ming)書(shu)，了(le)解細(xi)胞相關(guan)信息(xi)，如細(xi)胞形(xing)態、所(suo)用(yong)培養(yang)基、血清比例(li)、所需(xu) 細(xi)胞因子等(deng)，確保細(xi)胞培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)壹致，若由(you)於(yu)培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)不壹致而(er)導致(zhi)細(xi)胞出(chu)現問(wen)題，責(ze)任(ren)由(you) 客(ke)戶(hu)自(zi)行(xing)承(cheng)擔。

3. 用(yong) 75%酒(jiu)精(jing)擦(ca)拭(shi)細(xi)胞瓶(ping)表面，顯(xian)微鏡下(xia)觀(guan)察細(xi)胞狀態。因運輸(shu)問(wen)題，部(bu)分細(xi)胞由(you)於(yu)溫(wen)度(du) 變(bian)化(hua)及劇烈(lie)碰亡(wang)破(po)碎(sui)形(xing)成碎(sui)片(pian)，是正(zheng)常(chang)現象。觀(guan)察好(hao)細(xi)胞狀態後(hou)，75%酒(jiu)精(jing)消(xiao)毒(du)瓶(ping)壁將 T25 瓶置於(yu) 37℃培(pei)養(yang)箱(xiang)放置(zhi) 2-4h。

4. 貼(tie)壁細(xi)胞可(ke)以消化(hua)，懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞直(zhi)接(jie)混(hun)勻(yun)收集(ji)細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄(qi)上(shang) 清。加 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用(yong)新(xin)鮮的培(pei)養(yang)基重(zhong)懸(xuan) 細(xi)胞，並(bing)接(jie)種(zhong)到(dao)新(xin)的培(pei)養(yang)瓶或(huo)培(pei)養(yang)皿中(zhong)，置(zhi)於(yu)培養(yang)箱(xiang)中(zhong)進(jin)行(xing)培(pei)養(yang)。

5. 請客戶(hu)用相同(tong)條(tiao)件(jian)的培(pei)養(yang)基用於(yu)細(xi)胞培(pei)養(yang)。

6. 建(jian)議(yi)客戶(hu)收到(dao)細(xi)胞後(hou)前(qian) 3 天各(ge)拍(pai)幾(ji)張(zhang)細(xi)胞照(zhao)片(pian)，記錄(lu)細(xi)胞狀態，便(bian)於(yu)和(he)我(wo)司技術(shu)部(bu)溝通(tong) 交流。由(you)於(yu)運輸(shu)的原(yuan)因，個別(bie)敏(min)感(gan)細(xi)胞會出現不穩(wen)定(ding)的情況，請及時(shi)和(he)我(wo)們(men)聯系，告知細(xi)胞 的具體(ti)情況，以便(bian)我(wo)們(men)的技(ji)術(shu)人(ren)員(yuan)跟蹤回訪(fang)直(zhi)至問題解決。

7. 該(gai)細(xi)胞僅(jin)供科研使(shi)用(yong)。

8. 備(bei)註(zhu)：運輸(shu)用(yong)的培(pei)養(yang)基 (灌(guan)液培(pei)養(yang)基) 不能再(zai)用(yong)來培(pei)養(yang)細(xi)胞，請(qing)換用按照(zhao)說明(ming)書(shu)細(xi)胞培(pei) 養(yang)條(tiao)件(jian)新配制的培(pei)養(yang)基來培(pei)養(yang)細(xi)胞。     收(shou)到細(xi)胞後(hou)第壹次(ci)傳代建(jian)議(yi) 1：2 傳代 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳代就(jiu)是 1 個 T25 瓶(ping)傳 2 個 T25 瓶(ping)或(huo)者(zhe) 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶(ping)傳 2 個10cm 皿。