COLO684細(xi)胞

公司(si)產(chan)品(pin)僅(jin)供科(ke)研(yan)研(yan)究(jiu)使用(yong)、不(bu)得(de)用於(yu)臨(lin)床(chuang)診(zhen)斷！

1、細(xi)胞傳(chuan)代(dai)：

1）細(xi)胞生長至(zhi)覆蓋(gai)培養瓶(ping)的 80%面積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培(pei)養瓶(ping)中(zhong)的培養液，用(yong) PBS 清洗(xi)細(xi)胞壹(yi)次；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化液約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察，待(dai)細(xi)胞回縮變圓(yuan)後(hou)加入(ru) 5ml 培養

液終止(zhi)消(xiao)化，再輕輕吹打(da)細(xi)胞使之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然(ran)後將懸(xuan)液轉移(yi)至(zhi) 15ml 離心管中(zhong)，1000rpm 離心 5min；

3）棄上(shang)清(qing)，沈澱細(xi)胞用 1-2ml 培(pei)養基重(zhong)懸(xuan)，然(ran)後按(an) 1:2 比(bi)例進行分瓶(ping)傳(chuan)代(dai)，最(zui)後放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細(xi)胞

培養箱(xiang)中(zhong)培養；

壹(yi)、商(shang)品(pin)介(jie)紹：

2、細(xi)胞凍存(cun)：

1）細(xi)胞生長至(zhi)覆蓋(gai)培養瓶(ping)的 80%面積(ji)時(shi)，棄(qi) 25cm2培(pei)養瓶(ping)中(zhong)的培養液，用(yong) PBS 清洗(xi)細(xi)胞壹(yi)次；

2）添(tian)加 0.25%消(xiao)化液約(yue) 1ml 至(zhi)培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，倒(dao)置顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察，待(dai)細(xi)胞回縮變圓(yuan)後(hou)加入(ru)培養液終

止(zhi)消(xiao)化，輕輕吹打(da)細(xi)胞使之(zhi)脫(tuo)落(luo)，然(ran)後將懸(xuan)液轉移(yi)至(zhi) 15ml 離心管中(zhong)，1000rpm 離心 5min；

3）用適(shi)量的凍存(cun)液（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞，並放(fang)置於(yu)凍(dong)存(cun)管(guan)中(zhong)；

4）先(xian)將細(xi)胞凍存(cun)管(guan)放(fang)置於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後將其(qi)移(yi)入(ru)-80℃過(guo)夜，24h 後轉入液氮中進行長期(qi)保存。使用程(cheng)序

降(jiang)溫(wen)盒(he)可(ke)直(zhi)接放(fang)入(ru)-80℃。

二(er)、細(xi)胞培養操(cao)作(zuo)

1) 復蘇(su)細(xi)胞：以下細(xi)胞培養凍(dong)存(cun)處理(li)僅供參(can)考，具體(ti)操作(zuo)步驟以隨(sui)貨(huo)產(chan)品(pin)說明(ming)書(shu)為主。將含有1 mL細(xi)胞懸(xuan)液的凍存(cun)管在 37℃水浴(yu)中(zhong)迅速(su)搖晃解(jie)凍(dong)，加4 mL培(pei)養基混合均(jun)勻(yun)。在1000 rpm條件下(xia)離心3 min，棄去(qu)上(shang)清液，加1-2 mL培(pei)養基後吹(chui)勻(yun)。然(ran)後將所(suo)有細(xi)胞懸(xuan)液加入(ru)含適(shi)量培(pei)養基的培養瓶(ping)中(zhong)培養過(guo)夜（或將細(xi)胞懸(xuan)液加入(ru)10 cm皿中(zhong)，加入(ru)約(yue)8 mL培(pei)養基，培養過(guo)夜）。第二天換(huan)液並檢查細(xi)胞密度(du)。

2) 細(xi)胞傳(chuan)代(dai)：如(ru)果(guo)細(xi)胞密度(du)達 80%-90%，即可進行傳(chuan)代(dai)培(pei)養。

a、棄(qi)去(qu)培養上(shang)清(qing)，用不(bu)含鈣、鎂離子(zi)的PBS潤(run)洗(xi)細(xi)胞1-2次。

b、加1 mL消(xiao)化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培養瓶(ping)中(zhong)，使消(xiao)化液浸(jin)潤(run)所(suo)有細(xi)胞，將培(pei)養瓶(ping)置於(yu)37℃培(pei)養箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化1-2 min（視細(xi)胞情況(kuang)而(er)定(ding)），然(ran)後在顯微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察細(xi)胞消(xiao)化情況(kuang)，若(ruo)細(xi)胞大部(bu)分變圓並脫(tuo)落(luo)，迅(xun)速(su)拿回操作臺(tai)，輕敲幾下(xia)培養瓶(ping)後(hou)加2-3ml培(pei)養基終止(zhi)消(xiao)化。輕輕打(da)勻(yun)後裝入無(wu)菌(jun)離心管中(zhong)，1000 rpm離心5 min，棄去(qu)上(shang)清液，補(bu)加1-2 mL培(pei)養液後(hou)吹勻(yun)。

c、將細(xi)胞懸(xuan)液按(an)1:2比(bi)例分到(dao)新的含8 mL培養基的新皿(min)中(zhong)或者瓶(ping)中(zhong)，置於(yu)培(pei)養箱(xiang)中(zhong)培養。 3) 細(xi)胞凍存(cun)：待(dai)細(xi)胞生長狀(zhuang)態良(liang)好(hao)時，可(ke)進行細(xi)胞凍存(cun)。下(xia)面 T25 瓶(ping)為(wei)例；a、收(shou)集細(xi)胞及細(xi)胞培養液，裝入無(wu)菌(jun)離心管中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件下(xia)離心4 min，棄去(qu)上(shang)清液，用(yong)PBS清洗(xi)壹(yi)遍，棄(qi)盡(jin)PBS，進行細(xi)胞計(ji)數。

b、根(gen)據(ju)細(xi)胞數量加入(ru)無血(xue)清細(xi)胞凍存(cun)液，使(shi)細(xi)胞密度(du)5×106~1×107/mL，輕輕混勻(yun)，每支(zhi)凍存(cun)管(guan)凍存1mL細(xi)胞懸(xuan)液，註意(yi)凍(dong)存(cun)管(guan)做好(hao)標(biao)識(shi)。將凍(dong)存管(guan)放(fang)入(ru)-80℃冰(bing)箱，24 h後轉入液氮灌儲(chu)存(cun)。記錄(lu)凍(dong)存管位置以便下(xia)次(ci)拿取。

公司(si)正在出售(shou)的產(chan)品(pin)：

化學(xue)發光法(fa)定(ding)量檢測試劑盒(he)

－蛋(dan)白結合免疫(yi)沈澱分析（CHIP）試(shi)劑專題

細(xi)胞HHV6-A（HUMAN HERPESVIRUS 6-A）病(bing)毒定(ding)性(xing)檢測試劑盒(he)

冰(bing)凍(dong)切片組織TNF BETA蛋(dan)白表達NBT顯(xian)色(se)光學(xue)顯微(wei)鏡(jing)檢測試劑盒(he)

飼(si)料氮含量克(ke)爾道（Kjeldahl）法(fa)定(ding)量檢測試劑盒(he)

活(huo)體細(xi)胞半-10（CASPASE-10）活(huo)性(xing)原(yuan)位(wei)熒(ying)光染(ran)色(se)檢測試劑盒(he)

組織ROS激酶(mei)活(huo)性(xing)定(ding)量檢測試劑盒(he)（A/B/C）

載玻片細(xi)胞有絲(si)分裂NBT顯(xian)色(se)檢測試劑盒(he)

冰(bing)凍(dong)切片蘇(su)木素(su)染(ran)色(se)試(shi)劑(ji)盒(he)

細(xi)胞中鏈脂酰氧化酶(mei)（acyl-CoA oxidase）

冰凍切片銅(tong)熒光（CSI）染(ran)色(se)試(shi)劑(ji)盒(he)

水(shui)中(zhong)隱孢子(zi)蟲（Cryptosporidium）基因熒(ying)光定(ding)量檢測試劑盒(he)

細(xi)胞RyR受(shou)體(ti)蛋(dan)白表達比(bi)色(se)法(fa)定(ding)量檢測試劑盒(he)

組織基質(zhi)金屬（MMP）總(zong)活(huo)性(xing)熒(ying)光定(ding)量檢測試劑盒(he)

動(dong)物(wu)軟骨(gu)組織細(xi)胞分離培(pei)養試(shi)劑(ji)盒(he)

早(zao)期(qi)B淋(lin)巴(ba)細(xi)胞因子(zi)4抗體

鈣粘(zhan)蛋(dan)白β12抗體

驅(qu)動蛋(dan)白家(jia)族(zu)成員(yuan)24抗體

JOSD2蛋(dan)白抗體

細(xi)胞骨架(jia)相(xiang)關蛋(dan)白2/腫(zhong)瘤和(he)微管(guan)相(xiang)關蛋(dan)白抗體

ZC3H3蛋(dan)白抗體

跨(kua)膜蛋(dan)白9B抗體

COLO684細(xi)胞APC標(biao)記小(xiao)鼠(shu)CD122單克(ke)隆抗體

鋅(xin)指(zhi)蛋(dan)白786抗體

三(san)、培養註意(yi)事(shi)項(xiang) 

1. 收(shou)到(dao)細(xi)胞後首(shou)先(xian)觀(guan)察細(xi)胞瓶(ping)是(shi)否完(wan)好(hao)，培養液是(shi)否有漏液、渾(hun)濁等(deng)現象，若(ruo)有上述(shu)現象 發(fa)生(sheng)請(qing)及時和(he)我(wo)們聯(lian)系(xi)。

2. 仔細(xi)閱讀細(xi)胞說明(ming)書(shu)，了解(jie)細(xi)胞相關信息，如(ru)細(xi)胞形態(tai)、所(suo)用培(pei)養基、血(xue)清比(bi)例、所(suo)需 細(xi)胞因子(zi)等，確(que)保細(xi)胞培養條(tiao)件壹(yi)致，若(ruo)由(you)於(yu)培(pei)養條(tiao)件不(bu)壹(yi)致而(er)導(dao)致細(xi)胞出現問題，責(ze)任(ren)由(you) 客戶自(zi)行(xing)承(cheng)擔(dan)。

3. 用(yong) 75%酒精(jing)擦拭細(xi)胞瓶(ping)表面，顯(xian)微(wei)鏡(jing)下觀(guan)察細(xi)胞狀態(tai)。因(yin)運輸(shu)問題，部(bu)分細(xi)胞由(you)於(yu)溫(wen)度(du) 變(bian)化及劇烈(lie)碰亡(wang)破(po)碎(sui)形(xing)成碎片，是(shi)正(zheng)常(chang)現象。觀(guan)察好(hao)細(xi)胞狀態(tai)後(hou)，75%酒精(jing)消(xiao)毒瓶(ping)壁將 T25 瓶(ping)置於(yu) 37℃培(pei)養箱(xiang)放(fang)置 2-4h。

4. 貼(tie)壁細(xi)胞可以消(xiao)化，懸(xuan)浮細(xi)胞直(zhi)接混勻(yun)收(shou)集細(xi)胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上(shang) 清(qing)。加 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮(xian)的培養基重(zhong)懸(xuan) 細(xi)胞，並接種(zhong)到(dao)新的培養瓶(ping)或培養皿(min)中(zhong)，置於(yu)培(pei)養箱(xiang)中(zhong)進行培養。

5. 請(qing)客戶用(yong)相(xiang)同條件的培養基用於(yu)細(xi)胞培養。

6. 建(jian)議(yi)客戶收(shou)到(dao)細(xi)胞後前(qian) 3 天各(ge)拍(pai)幾(ji)張(zhang)細(xi)胞照片，記錄(lu)細(xi)胞狀態(tai)，便(bian)於和(he)我(wo)司(si)技術(shu)部(bu)溝通(tong) 交(jiao)流(liu)。由(you)於(yu)運輸(shu)的原因(yin)，個別(bie)敏感細(xi)胞會出現不(bu)穩(wen)定(ding)的情況(kuang)，請(qing)及時和(he)我(wo)們聯(lian)系(xi)，告知(zhi)細(xi)胞 的具體(ti)情況(kuang)，以便我(wo)們的技術(shu)人員(yuan)跟蹤回訪直(zhi)至問題解(jie)決。

7. 該(gai)細(xi)胞僅供(gong)科(ke)研(yan)使用(yong)。

8. 備(bei)註：運輸(shu)用(yong)的培養基 (灌液培(pei)養基) 不(bu)能(neng)再用來(lai)培養細(xi)胞，請(qing)換用(yong)按(an)照(zhao)說明(ming)書(shu)細(xi)胞培 養條(tiao)件新配制的培養基來(lai)培養細(xi)胞。     收(shou)到(dao)細(xi)胞後第壹(yi)次傳(chuan)代(dai)建(jian)議(yi) 1：2 傳(chuan)代(dai) 。

9. 註意(yi)：  1:2 傳(chuan)代(dai)就(jiu)是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個 T25 瓶(ping)或者 2 個 6cm 皿(min)。不(bu)是(shi) 1 個 T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個10cm 皿(min)。