COLO741細胞

公(gong)司產品僅供(gong)科(ke)研(yan)研(yan)究使(shi)用、不(bu)得(de)用於(yu)臨(lin)床診斷！

1、細胞傳(chuan)代：

1）細胞生(sheng)長至(zhi)覆(fu)蓋培(pei)養瓶(ping)的 80%面(mian)積時(shi)，棄 25cm2培(pei)養瓶(ping)中的培(pei)養液(ye)，用 PBS 清(qing)洗(xi)細胞壹(yi)次；

2）添加 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約 1ml 至培(pei)養瓶(ping)中，倒(dao)置(zhi)顯微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察，待(dai)細胞回(hui)縮變(bian)圓(yuan)後(hou)加入(ru) 5ml 培(pei)養

液(ye)終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)，再(zai)輕(qing)輕(qing)吹(chui)打(da)細胞使(shi)之脫(tuo)落，然後(hou)將懸液(ye)轉移至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）棄上清(qing)，沈澱(dian)細胞用 1-2ml 培(pei)養基重(zhong)懸，然後(hou)按 1:2 比(bi)例(li)進(jin)行分瓶(ping)傳(chuan)代(dai)，最後(hou)放入(ru) 37℃，5%CO2細胞

培(pei)養箱中培(pei)養；

壹(yi)、商(shang)品介紹：

2、細胞凍(dong)存(cun)：

1）細胞生(sheng)長至(zhi)覆(fu)蓋培(pei)養瓶(ping)的 80%面(mian)積時(shi)，棄 25cm2培(pei)養瓶(ping)中的培(pei)養液(ye)，用 PBS 清(qing)洗(xi)細胞壹(yi)次；

2）添加 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約 1ml 至培(pei)養瓶(ping)中，倒(dao)置(zhi)顯微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察，待(dai)細胞回(hui)縮變(bian)圓(yuan)後(hou)加入(ru)培(pei)養液(ye)終(zhong)

止(zhi)消(xiao)化(hua)，輕(qing)輕(qing)吹(chui)打(da)細胞使(shi)之脫(tuo)落，然後(hou)將懸液(ye)轉移至(zhi) 15ml 離(li)心(xin)管中，1000rpm 離(li)心(xin) 5min；

3）用適(shi)量的凍(dong)存(cun)液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細胞，並(bing)放置(zhi)於凍(dong)存(cun)管中；

4）先將(jiang)細胞凍(dong)存(cun)管放置(zhi)於-20℃ 1.5h，然後(hou)將其移(yi)入(ru)-80℃過(guo)夜(ye)，24h 後(hou)轉入(ru)液(ye)氮(dan)中(zhong)進(jin)行長期(qi)保存(cun)。使(shi)用程(cheng)序(xu)

降溫盒(he)可(ke)直(zhi)接放入(ru)-80℃。

二(er)、細胞培(pei)養操(cao)作

1) 復蘇(su)細胞：以下(xia)細胞培(pei)養凍(dong)存(cun)處(chu)理(li)僅供(gong)參(can)考(kao)，具(ju)體(ti)操(cao)作步驟(zhou)以隨(sui)貨(huo)產品說明書(shu)為(wei)主。將含有1 mL細胞懸(xuan)液的凍(dong)存(cun)管在(zai) 37℃水(shui)浴(yu)中(zhong)迅速(su)搖(yao)晃(huang)解(jie)凍(dong)，加4 mL培(pei)養基混(hun)合均(jun)勻(yun)。在(zai)1000 rpm條(tiao)件下離(li)心(xin)3 min，棄去上清(qing)液(ye)，加1-2 mL培(pei)養基後(hou)吹(chui)勻(yun)。然後(hou)將所(suo)有(you)細胞懸(xuan)液加入(ru)含(han)適(shi)量培(pei)養基的培(pei)養瓶(ping)中培(pei)養過(guo)夜（或(huo)將(jiang)細胞懸(xuan)液加入(ru)10 cm皿(min)中，加入(ru)約8 mL培(pei)養基，培(pei)養過(guo)夜）。第二(er)天換(huan)液並檢(jian)查(zha)細胞密(mi)度(du)。

2) 細胞傳(chuan)代：如(ru)果(guo)細胞密(mi)度(du)達(da) 80%-90%，即(ji)可進(jin)行傳(chuan)代培(pei)養。

a、棄去培(pei)養上清(qing)，用不(bu)含(han)鈣、鎂離(li)子的PBS潤(run)洗(xi)細胞1-2次。

b、加1 mL消(xiao)化(hua)液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培(pei)養瓶(ping)中，使(shi)消(xiao)化(hua)液(ye)浸(jin)潤(run)所(suo)有(you)細胞，將(jiang)培(pei)養瓶(ping)置(zhi)於37℃培(pei)養箱中消(xiao)化(hua)1-2 min（視細胞情況而(er)定(ding)），然(ran)後(hou)在(zai)顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察細胞消(xiao)化(hua)情況，若細胞大(da)部(bu)分變(bian)圓(yuan)並脫(tuo)落，迅速(su)拿(na)回(hui)操(cao)作臺，輕(qing)敲(qiao)幾(ji)下培(pei)養瓶(ping)後(hou)加2-3ml培(pei)養基終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)。輕(qing)輕(qing)打勻(yun)後(hou)裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌離(li)心(xin)管中，1000 rpm離(li)心(xin)5 min，棄去上清(qing)液(ye)，補(bu)加1-2 mL培(pei)養液(ye)後(hou)吹(chui)勻(yun)。

c、將細胞懸(xuan)液按1:2比(bi)例(li)分到(dao)新(xin)的含(han)8 mL培(pei)養基的新(xin)皿(min)中或(huo)者瓶(ping)中(zhong)，置(zhi)於培(pei)養箱中培(pei)養。 3) 細胞凍(dong)存(cun)：待(dai)細胞生(sheng)長狀(zhuang)態良(liang)好(hao)時(shi)，可(ke)進(jin)行細胞凍(dong)存(cun)。下(xia)面(mian) T25 瓶為(wei)例(li)；a、收集(ji)細胞及細胞培(pei)養液(ye)，裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌離(li)心(xin)管中，1000 rpm條件下離(li)心(xin)4 min，棄去上清(qing)液(ye)，用PBS清(qing)洗(xi)壹遍(bian)，棄盡PBS，進(jin)行細胞計(ji)數。

b、根據細胞數(shu)量加入(ru)無(wu)血(xue)清(qing)細胞凍(dong)存(cun)液(ye)，使(shi)細胞密(mi)度(du)5×106~1×107/mL，輕(qing)輕(qing)混(hun)勻(yun)，每支凍(dong)存(cun)管凍(dong)存(cun)1mL細胞懸(xuan)液，註意凍(dong)存(cun)管做好(hao)標識(shi)。將凍(dong)存(cun)管放入(ru)-80℃冰箱，24 h後(hou)轉入(ru)液(ye)氮(dan)灌(guan)儲存(cun)。記(ji)錄(lu)凍(dong)存(cun)管位置(zhi)以便(bian)下(xia)次拿取。

公(gong)司正(zheng)在(zai)出(chu)售(shou)的產(chan)品：

組織(zhi)過氧化(hua)氫(qing)（HYDROGEN PEROXIDE）活性

細胞染色(se)質(zhi)免(mian)疫(yi)沈澱(dian)分析(xi)（CHIP）試(shi)劑盒

組織(zhi)HHV6-A（HUMAN HERPESVIRUS 6-A）病(bing)毒(du)定性檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒

石(shi)蠟切(qie)片組織(zhi)TNF BETA蛋(dan)白(bai)表(biao)達(da)NBT顯(xian)色光學顯(xian)微(wei)鏡(jing)檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒

谷(gu)類(lei)氮(dan)含(han)量克(ke)爾(er)道（Kjeldahl）法(fa)定(ding)量檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒

冰凍(dong)切(qie)片半-10（CASPASE-10）活性原(yuan)位熒(ying)光染色(se)檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒

細胞RSE激(ji)酶(mei)活性定量檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒（A/B/C）

冰凍(dong)切(qie)片細胞有(you)絲分裂(lie)NBT顯(xian)色檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒

細胞蘇(su)木(mu)素染色(se)試(shi)劑盒

細胞長鏈(lian)脂(zhi)酰氧化(hua)酶(mei)（acyl-CoA oxidase）

線(xian)粒(li)體(ti)銅(tong)離(li)子熒(ying)光（CTAP-1）染色(se)試(shi)劑盒

水(shui)中賈(jia)第鞭(bian)毛(mao)蟲（Giardia）基因(yin)定性檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒

細胞RyR受(shou)體(ti)蛋(dan)白(bai)表(biao)達(da)熒(ying)光定量檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒

體(ti)液(ye)基質(zhi)金(jin)屬（MMP）總(zong)活性熒(ying)光定量檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒

動(dong)物直(zhi)腸組織(zhi)細胞分離(li)培(pei)養試(shi)劑盒

早(zao)期(qi)發(fa)育調(tiao)控蛋(dan)白(bai)1/EDR1抗(kang)體(ti)

鈣粘蛋(dan)白(bai)超家族CELSR1抗(kang)體(ti)

驅動(dong)蛋(dan)白(bai)家族成(cheng)員25抗(kang)體(ti)

JRKL蛋(dan)白(bai)樣(yang)抗(kang)體(ti)

細胞骨(gu)架相關蛋(dan)白(bai)2抗(kang)體(ti)

ZC3H7A蛋(dan)白(bai)抗(kang)體(ti)

跨(kua)膜蛋(dan)白(bai)9超家族成(cheng)員3抗(kang)體(ti)

COLO741細胞APC標記(ji)小(xiao)鼠CD16/32單(dan)克(ke)隆(long)抗體(ti)

鋅(xin)指(zhi)蛋(dan)白(bai)787抗(kang)體(ti)

三(san)、培(pei)養註(zhu)意事(shi)項 

1. 收到細胞後(hou)首先觀(guan)察細胞瓶(ping)是(shi)否完(wan)好(hao)，培(pei)養液(ye)是(shi)否有(you)漏(lou)液、渾(hun)濁(zhuo)等現象，若有上述現象 發生(sheng)請及時(shi)和(he)我(wo)們聯系。

2. 仔(zai)細閱讀(du)細胞說(shuo)明書(shu)，了(le)解細胞相關信息(xi)，如(ru)細胞形(xing)態、所(suo)用培(pei)養基、血(xue)清(qing)比(bi)例(li)、所(suo)需(xu) 細胞因(yin)子等(deng)，確保細胞培(pei)養條(tiao)件壹致，若由(you)於培(pei)養條(tiao)件不壹(yi)致而(er)導(dao)致細胞出(chu)現問題，責(ze)任(ren)由(you) 客戶(hu)自(zi)行承(cheng)擔。

3. 用 75%酒(jiu)精(jing)擦(ca)拭細胞瓶(ping)表面(mian)，顯微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察細胞狀(zhuang)態。因(yin)運(yun)輸(shu)問題，部分細胞由(you)於溫度(du) 變化(hua)及劇(ju)烈碰亡破碎(sui)形(xing)成(cheng)碎片(pian)，是(shi)正(zheng)常現象。觀(guan)察好(hao)細胞狀(zhuang)態後(hou)，75%酒精消(xiao)毒(du)瓶壁(bi)將 T25 瓶(ping)置(zhi)於 37℃培(pei)養箱放置(zhi) 2-4h。

4. 貼壁(bi)細胞可(ke)以消(xiao)化(hua)，懸(xuan)浮細胞直(zhi)接混(hun)勻(yun)收集(ji)細胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，棄上 清(qing)。加 5 mL PBS 重(zhong)懸細胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，用新(xin)鮮的培(pei)養基重(zhong)懸 細胞，並(bing)接種到(dao)新(xin)的培(pei)養瓶(ping)或(huo)培(pei)養皿(min)中，置(zhi)於培(pei)養箱中進(jin)行培(pei)養。

5. 請(qing)客戶(hu)用相同條件的培(pei)養基用於(yu)細胞培(pei)養。

6. 建(jian)議(yi)客戶(hu)收到細胞後(hou)前(qian) 3 天各拍(pai)幾(ji)張細胞照片，記(ji)錄(lu)細胞狀(zhuang)態，便(bian)於(yu)和(he)我(wo)司技術(shu)部(bu)溝通(tong) 交流(liu)。由(you)於運輸(shu)的原(yuan)因，個(ge)別(bie)敏(min)感細胞會(hui)出現不穩定(ding)的情況，請(qing)及時(shi)和(he)我(wo)們聯系，告(gao)知細胞 的具(ju)體(ti)情況，以便(bian)我(wo)們的技(ji)術(shu)人(ren)員跟(gen)蹤(zong)回(hui)訪(fang)直(zhi)至問(wen)題解決。

7. 該細胞僅(jin)供(gong)科(ke)研(yan)使(shi)用。

8. 備(bei)註(zhu)：運輸(shu)用的培(pei)養基 (灌(guan)液培(pei)養基) 不(bu)能再(zai)用來(lai)培(pei)養細胞，請(qing)換(huan)用按照說明(ming)書(shu)細胞培(pei) 養條(tiao)件新(xin)配制的培(pei)養基來(lai)培(pei)養細胞。     收到細胞後(hou)第壹(yi)次傳代建(jian)議(yi) 1：2 傳代 。

9. 註(zhu)意(yi)：  1:2 傳(chuan)代就是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge) T25 瓶(ping)或(huo)者 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不是(shi) 1 個(ge) T25 瓶(ping)傳(chuan) 2 個(ge)10cm 皿(min)。