COLO-60H細胞

公(gong)司(si)產品僅供(gong)科(ke)研研究使(shi)用(yong)、不(bu)得用(yong)於(yu)臨(lin)床診(zhen)斷(duan)！

1、細胞傳代：

1）細胞生(sheng)長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培養瓶的 80%面積(ji)時，棄 25cm2培養瓶中的培養液(ye)，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細胞壹(yi)次；

2）添加 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培養瓶中，倒(dao)置顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)，待(dai)細胞回(hui)縮變圓後加(jia)入(ru) 5ml 培養

液(ye)終(zhong)止消化(hua)，再輕(qing)輕吹(chui)打細胞使(shi)之脫(tuo)落(luo)，然(ran)後(hou)將懸液(ye)轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離心管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心 5min；

3）棄上(shang)清(qing)，沈澱(dian)細胞用(yong) 1-2ml 培養基重(zhong)懸(xuan)，然(ran)後(hou)按(an) 1:2 比例(li)進(jin)行(xing)分(fen)瓶傳代，最(zui)後放(fang)入(ru) 37℃，5%CO2細胞

培養箱中(zhong)培養；

壹、商品介(jie)紹(shao)：

2、細胞凍(dong)存：

1）細胞生(sheng)長(chang)至(zhi)覆(fu)蓋(gai)培養瓶的 80%面積(ji)時，棄 25cm2培養瓶中的培養液(ye)，用(yong) PBS 清(qing)洗(xi)細胞壹(yi)次；

2）添加 0.25%消(xiao)化(hua)液(ye)約(yue) 1ml 至(zhi)培養瓶中，倒(dao)置顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)，待(dai)細胞回(hui)縮變圓後加(jia)入(ru)培養液(ye)終(zhong)

止消化(hua)，輕輕(qing)吹(chui)打細胞使(shi)之脫(tuo)落(luo)，然(ran)後(hou)將懸液(ye)轉(zhuan)移至(zhi) 15ml 離心管(guan)中(zhong)，1000rpm 離(li)心 5min；

3）用(yong)適(shi)量的凍(dong)存液(ye)（FBS：DMSO=9 ：1）重(zhong)懸(xuan)細胞，並(bing)放置(zhi)於(yu)凍(dong)存管(guan)中(zhong)；

4）先(xian)將細胞凍(dong)存管(guan)放(fang)置(zhi)於(yu)-20℃ 1.5h，然(ran)後(hou)將其移(yi)入(ru)-80℃過夜(ye)，24h 後轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮(dan)中進(jin)行(xing)長(chang)期保存。使(shi)用(yong)程(cheng)序

降(jiang)溫盒(he)可(ke)直接(jie)放(fang)入(ru)-80℃。

二(er)、細胞培養操(cao)作

1) 復(fu)蘇(su)細胞：以(yi)下(xia)細胞培養凍(dong)存處理(li)僅供(gong)參考，具(ju)體操(cao)作步(bu)驟以隨(sui)貨產品說明(ming)書(shu)為主(zhu)。將含有1 mL細胞懸(xuan)液(ye)的凍(dong)存管(guan)在(zai) 37℃水(shui)浴中(zhong)迅速搖(yao)晃(huang)解凍(dong)，加(jia)4 mL培養基混(hun)合均勻(yun)。在(zai)1000 rpm條(tiao)件下(xia)離(li)心3 min，棄去(qu)上(shang)清液(ye)，加(jia)1-2 mL培養基後吹(chui)勻(yun)。然(ran)後(hou)將所(suo)有細胞懸(xuan)液(ye)加(jia)入(ru)含適量培養基的培養瓶中培養過夜(ye)（或將細胞懸(xuan)液(ye)加(jia)入(ru)10 cm皿中(zhong)，加入(ru)約8 mL培養基，培養過夜(ye)）。第二(er)天換(huan)液(ye)並(bing)檢查(zha)細胞密度。

2) 細胞傳代：如果(guo)細胞密度達 80%-90%，即(ji)可(ke)進(jin)行(xing)傳代培養。

a、棄去(qu)培養上清(qing)，用(yong)不(bu)含鈣(gai)、鎂離子(zi)的PBS潤洗(xi)細胞1-2次(ci)。

b、加1 mL消(xiao)化(hua)液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)培養瓶中，使(shi)消化(hua)液(ye)浸潤所(suo)有細胞，將培養瓶置於(yu)37℃培養箱中(zhong)消化(hua)1-2 min（視細胞情(qing)況而(er)定(ding)），然(ran)後(hou)在(zai)顯微鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)細胞消(xiao)化(hua)情況，若(ruo)細胞大(da)部分變(bian)圓(yuan)並脫(tuo)落(luo)，迅速拿回(hui)操(cao)作臺(tai)，輕(qing)敲(qiao)幾下(xia)培養瓶後加(jia)2-3ml培養基終(zhong)止消化(hua)。輕輕(qing)打勻(yun)後(hou)裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌(jun)離(li)心管(guan)中(zhong)，1000 rpm離(li)心5 min，棄去(qu)上(shang)清液(ye)，補(bu)加1-2 mL培養液(ye)後(hou)吹(chui)勻(yun)。

c、將細胞懸(xuan)液(ye)按(an)1:2比例(li)分(fen)到(dao)新(xin)的含8 mL培養基的新(xin)皿(min)中(zhong)或者瓶中，置(zhi)於(yu)培養箱中(zhong)培養。 3) 細胞凍(dong)存：待(dai)細胞生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態良(liang)好時，可(ke)進(jin)行(xing)細胞凍(dong)存。下(xia)面 T25 瓶為例(li)；a、收(shou)集(ji)細胞及細胞培養液(ye)，裝(zhuang)入(ru)無(wu)菌(jun)離(li)心管(guan)中(zhong)，1000 rpm條(tiao)件(jian)下(xia)離(li)心4 min，棄去(qu)上(shang)清液(ye)，用(yong)PBS清(qing)洗(xi)壹遍(bian)，棄盡(jin)PBS，進(jin)行(xing)細胞計數。

b、根據(ju)細胞數量加(jia)入(ru)無(wu)血清細胞凍(dong)存液(ye)，使(shi)細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混(hun)勻(yun)，每(mei)支(zhi)凍(dong)存管(guan)凍(dong)存1mL細胞懸(xuan)液(ye)，註意凍(dong)存管(guan)做(zuo)好標(biao)識(shi)。將凍(dong)存管(guan)放(fang)入(ru)-80℃冰(bing)箱，24 h後轉(zhuan)入(ru)液(ye)氮(dan)灌(guan)儲(chu)存。記錄凍(dong)存管(guan)位(wei)置(zhi)以(yi)便下(xia)次(ci)拿取(qu)。

公(gong)司(si)正(zheng)在出售的產品：

細胞過氧(yang)化(hua)氫（HYDROGEN PEROXIDE）活性(xing)熒(ying)光定(ding)量檢(jian)測試劑(ji)盒(he)

組織染(ran)色(se)質(zhi)免疫(yi)沈(chen)澱(dian)分析(xi)（CHIP）試劑盒(he)（包(bao)括(kuo)抗體(ti)）

細胞HHV6-A（HUMAN HERPESVIRUS 6-A）病毒

TNF BETA蛋白表(biao)達西(xi)方(fang)雜交(jiao)分(fen)析(xi)試(shi)劑(ji)盒(he)

細胞培養液(ye)瓜(gua)含量比色法(fa)定(ding)量檢(jian)測試劑(ji)盒(he)

活體細胞半(ban)13（CASPASE-13）活性(xing)原(yuan)位(wei)熒(ying)光染色檢測試劑(ji)盒(he)

組織SRCN1激酶(mei)活(huo)性(xing)定(ding)量檢(jian)測試劑(ji)盒(he)（A/B/C）

HOECHST33342/PI簡易細胞核(he)形態染(ran)色(se)試劑盒

染色試(shi)劑(ji)盒(he)

組織長(chang)鏈脂(zhi)酰氧(yang)化(hua)酶(mei)（acyl-CoA oxidase）

銅離子(zi)膜通(tong)道轉(zhuan)運功能（CTR）綠色(se)熒(ying)光檢測試劑(ji)盒(he)

水(shui)中大(da)腸菌(jun)群(qun)（coliform）熒(ying)光定(ding)量檢(jian)測試劑(ji)盒(he)

RyR受體蛋(dan)白(bai)表(biao)達ELISA定(ding)量檢(jian)測試劑(ji)盒(he)

體液(ye)基質(zhi)金屬（MMP）總(zong)活(huo)性(xing)比色法(fa)定(ding)量檢(jian)測試劑(ji)盒(he)

動物眼組(zu)織(zhi)細胞分(fen)離培養試劑(ji)盒

早(zao)期(qi)生(sheng)長(chang)反(fan)應(ying)蛋白(bai)2抗體(ti)

鈣(gai)粘蛋白(bai)相(xiang)關蛋(dan)白受(shou)體(ti)BTR1抗體(ti)

驅(qu)動(dong)蛋(dan)白(bai)家(jia)族成(cheng)員2A抗體(ti)

JWA蛋白抗體(ti)

細胞骨(gu)架(jia)相(xiang)關蛋(dan)白酪磷酸(suan)酶(mei)2抗體(ti)

ZC4H2蛋白抗體(ti)

跨膜蛋白BRI抗體(ti)

COLO-60H細胞APC標(biao)記小鼠(shu)CD23單克隆(long)抗體(ti)

鋅(xin)指蛋白790抗體(ti)

三、培養註意事(shi)項(xiang) 

1. 收(shou)到(dao)細胞後(hou)首(shou)先觀(guan)察(cha)細胞瓶是否(fou)完(wan)好，培養液(ye)是否(fou)有漏液(ye)、渾(hun)濁(zhuo)等現象(xiang)，若(ruo)有(you)上(shang)述(shu)現象(xiang) 發生(sheng)請(qing)及時和我(wo)們(men)聯系(xi)。

2. 仔細閱讀(du)細胞說明(ming)書(shu)，了解細胞相(xiang)關信(xin)息，如細胞形(xing)態、所(suo)用(yong)培養基、血清比例(li)、所(suo)需(xu) 細胞因子(zi)等，確(que)保細胞培養條件(jian)壹致(zhi)，若(ruo)由於(yu)培養條件(jian)不(bu)壹(yi)致(zhi)而(er)導致(zhi)細胞出現問題(ti)，責(ze)任(ren)由 客戶(hu)自(zi)行(xing)承(cheng)擔。

3. 用(yong) 75%酒精(jing)擦(ca)拭(shi)細胞瓶表(biao)面，顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀(guan)察(cha)細胞狀(zhuang)態。因運輸問(wen)題(ti)，部分細胞由於(yu)溫(wen)度 變化(hua)及劇(ju)烈碰(peng)亡(wang)破(po)碎(sui)形成(cheng)碎(sui)片，是正(zheng)常現象(xiang)。觀(guan)察(cha)好(hao)細胞狀(zhuang)態後(hou)，75%酒精(jing)消毒瓶壁將 T25 瓶置於(yu) 37℃培養箱放(fang)置 2-4h。

4. 貼(tie)壁細胞可(ke)以消(xiao)化(hua)，懸浮(fu)細胞直(zhi)接(jie)混(hun)勻(yun)收(shou)集(ji)細胞，900 rpm-1000 rpm 離(li)心 3 min，棄上(shang) 清(qing)。加 5 mL PBS 重(zhong)懸(xuan)細胞，再(zai) 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用(yong)新(xin)鮮(xian)的培養基重(zhong)懸(xuan) 細胞，並(bing)接(jie)種(zhong)到(dao)新(xin)的培養瓶或培養皿中(zhong)，置於(yu)培養箱中(zhong)進(jin)行(xing)培養。

5. 請(qing)客戶(hu)用(yong)相(xiang)同(tong)條(tiao)件的培養基用(yong)於(yu)細胞培養。

6. 建議(yi)客戶(hu)收(shou)到(dao)細胞後(hou)前(qian) 3 天各(ge)拍幾張(zhang)細胞照(zhao)片，記錄細胞狀(zhuang)態，便於(yu)和我(wo)司(si)技(ji)術部溝(gou)通(tong) 交(jiao)流。由於(yu)運(yun)輸的原(yuan)因，個(ge)別(bie)敏(min)感(gan)細胞會(hui)出現不(bu)穩定(ding)的情況，請(qing)及時和我(wo)們(men)聯系(xi)，告知(zhi)細胞 的具(ju)體情(qing)況，以(yi)便我(wo)們(men)的技(ji)術人(ren)員(yuan)跟(gen)蹤(zong)回(hui)訪直(zhi)至(zhi)問題(ti)解決。

7. 該(gai)細胞僅(jin)供(gong)科(ke)研使用(yong)。

8. 備(bei)註：運輸用(yong)的培養基 (灌(guan)液(ye)培養基) 不(bu)能(neng)再(zai)用(yong)來(lai)培養細胞，請(qing)換用(yong)按(an)照說明(ming)書(shu)細胞培 養條件(jian)新(xin)配(pei)制的培養基來(lai)培養細胞。     收(shou)到(dao)細胞後(hou)第壹(yi)次(ci)傳代建(jian)議 1：2 傳代 。

9. 註意：  1:2 傳代就是 1 個(ge) T25 瓶傳 2 個(ge) T25 瓶或者 2 個(ge) 6cm 皿(min)。不(bu)是 1 個(ge) T25 瓶傳 2 個(ge)10cm 皿(min)。